简介：目的研究紫草素抑制由脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症的机制。方法以淀粉培养基注射BALB/c小鼠腹腔，诱导并分离巨噬细胞，以APC标记F4/80染色，并用流式细胞仪检测分离巨噬细胞情况;用1mg?1T1的LPS刺激上述分离的巨噬细胞，分组如下:DMSO溶剂对照组，LPS对照组，LPS+低剂量紫草素组(0.1|junal*1T1);LPS+中剂量紫草素组（1|junol?高剂量紫草素组（10ijund?IT1);通过ELISA和实时定量PCR(qRT-PCR)方法分别测定各处理组培养上清液以及细胞中肿瘤坏死因子-ct(TNF-c〇、白细胞介素-lp(IL-lp)、白细胞介素^6(11^)和白细胞介素-IO(IL-IO)的表达情况;Westemblot分别测定Toll样受体4(TLR4)和核因子-kB(NF-kB)的P65亚基磷酸化表达情况。结果流式细胞检测可知，APC标记的F4/80染色巨噬细胞的纯度可达97.8%;ELISA和实时定量PCR结果显示，紫草素处理后可以抑制由LPS刺激细胞因子TNF-ct、IL-lp和IL-6的表达（P<0.05)，并增加IL-10的表达（P<0.05)，且呈现出一定的浓度依赖性；Westernblot结果显示，紫草素能下调由LPS刺激的TLR4的表达水平和NF-kB的P65亚基磷酸化表达。结论紫草素的抗炎机制可能是通过TLR4介导的信号通路活化NF-kB,抑制IL-lp、IL-6和TNF-ct的分泌，并促进IL-10的分泌。

简介：目的：探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人外周血CD14＋单核细胞表达Th17细胞分化相关细胞因子IL-1β、IL-6、IL-23和TGF-β的影响。方法：采用脂多糖提取试剂盒提取牙龈卟啉单胞菌标准株ATCC33277和高毒力株W83脂多糖;免疫磁珠法分选健康志愿者外周血CD14＋单核细胞。以大肠杆菌脂多糖为对照,1μg/ml牙龈卟啉单胞菌脂多糖处理单核细胞,分别培养12、24、36h后收集细胞和上清液,实时定量PCR及ELISA法检测IL-1β、IL-6、IL-23、TGF-βmRNA和蛋白水平的表达。结果：各型脂多糖均可显著上调单核细胞四种细胞因子mRNA及蛋白水平的表达;上调作用具有时间效应,在12h达到高峰。并且三种菌株脂多糖对不同细胞因子表达的影响存在一定差异。结论：牙龈卟啉单胞菌脂多糖可显著上调CD14＋单核细胞表达IL-1β,IL-6,IL-23,TGF-β,可能与牙周炎症环境中Th17细胞的分化相关。

简介：摘要目的探究牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激巨噬细胞后，髓样细胞触发受体-1（triggering receptors expressed on myeloid cells-1，TREM-1）表达与M1、M2型极化的关系，进一步探讨巨噬细胞TREM-1在牙周炎发生发展中的作用机制。方法使用豆蔻酰佛波醇乙酯诱导人单核细胞系THP-1分化为巨噬细胞，予以0（空白对照组）和1 μg/ml 的 Pg-LPS（LPS组）刺激，同期加入终质量浓度为0.1 μg/ml的TREM-1抑制剂LP17（LPS+LP17组）或对照肽（LPS+对照肽组），培养24 h后用实时荧光定量PCR（real-time quantitative-PCR，RT-qPCR）检测TREM-1和巨噬细胞M1、M2型极化标志物（分别为CD86、CD206）及其极化相关细胞因子［分别为肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-10］mRNA表达变化，蛋白质印迹法检测TREM-1、CD86、CD206蛋白含量，酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β及IL-10的表达。结果细胞培养24 h后，LPS组巨噬细胞中TREM-1相对 mRNA表达量（1.40±0.14）及蛋白表达量（3.85±0.24）均较空白对照组（分别为1.01±0.18、1.00±0.05）显著升高（P<0.05），同时M1型极化标志物CD86 mRNA及蛋白表达（分别为1.42±0.01、1.55±0.07）均较空白对照组（分别为1.00±0.09、1.00±0.10）显著上调（P<0.01），且M1型极化相关细胞因子TNF-α、IL-1β mRNA及蛋白表达量均显著增加（P<0.05）；加入TREM-1阻断剂LP17后，与LPS组相比，TREM-1 mRNA及蛋白表达水平差异均无统计学意义（P>0.05），CD86 mRNA（0.96±0.00）和蛋白（1.36±0.02）表达水平均显著下降（P<0.05），TNF-α、IL-1β mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。对于M2型极化标志物CD206及极化相关细胞因子IL-10，细胞培养24 h后，CD206 mRNA（0.56±0.05）及蛋白表达（0.25±0.04）均较空白对照组（分别为1.02±0.25、1.00±0.10）显著下调（P<0.01），IL-10 mRNA较空白对照组表达显著上调（P<0.05），其蛋白表达水平与空白对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）；LPS+LP17组CD206、IL-10 mRNA表达均较LPS组显著下调（P<0.05），CD206、IL-10蛋白表达在两组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论TREM-1及其下游信号通路可能参与了Pg-LPS介导的巨噬细胞M1型极化，从而在牙周炎发生发展中发挥促炎作用；尚无证据表明TREM-1是否参与调控Pg-LPS介导的巨噬细胞M2型极化。

简介：摘要目的探讨人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）对脂多糖（LPS）活化的小胶质细胞功能表型的影响。方法实验设未诱导对照组（加入PBS无LPS诱导的BV-2细胞），LPS诱导组（加入1.0 μg/mL的LPS诱导BV-2细胞向M1型分化），按比例加入不同浓度hUCMSCs进行干预（LPS+低、中、高浓度hUCMSCs干预组hUCMSCs与BV-2细胞比例分别为：1:100、1:10、1:1），分别于24、48、72 h观察BV-2形态变化，Griess法检测细胞培养上清中M1表型产物一氧化氮（NO）的浓度；将hUCMSCs与BV-2细胞在不同条件下（LPS+/LPS-）共培养，qRT-PCR检测BV-2细胞M2表型标记物精氨酸酶1表达变化。数据分析采用重复测量资料的方差分析，组间比较采用Tukey分析。结果BV-2细胞经LPS诱导后活化，细胞变大，呈"煎饼状"、"阿米巴状"变化，呈经典的M1表型分化；与未诱导对照组相比，LPS诱导组48、72 h BV-2细胞NO含量升高[48 h：（0.507±0.012）μg/mL比（5.183±0.171）μg/ mL；72 h：（0.934±0.024）μg/ mL比（12.498±0.168） μg/mL，P均< 0.01]，与LPS诱导组比较，LPS+低、中、高浓度hUCMSCs干预组72 h [（12.498±0.168）μg/mL比（11.852±0.149）μg/ mL、（9.796±0.048）μg/mL、（1.876±0.063） μg/mL]及LPS+中、高浓度hUCMSCs干预组48 h NO含量[（5.183±0.171） μg/ mL比（3.921±0.066）μg/mL、（1.202±0.012）μg/ mL]降低，且呈干预浓度依赖性NO含量下降，差异均有统计学意义（P均< 0.01）。精氨酸酶1 qRT-PCR结果显示：与未诱导组比较，单纯高浓度hUCMSCs干预组3个时间点精氨酸酶1的相对表达量均升高（1.046±0.057比19.266±0.641，1.114±0.093比16.977±0.749，1.139±0.118比16.959±0.625），与LPS诱导对照组（0.000）比较，未诱导对照组（1.046±0.057，1.114±0.093，1.139±0.118）及LPS+高浓度hUCMSCs干预组精氨酸酶1表达（0.879±0.077，1.023±0.081，1.121±0.078）升高，差异具有统计学意义（P均< 0.01）。结论LPS可诱导小胶质细胞BV-2炎症反应，而hUCMSCs可抑制活化小胶质细胞的炎症反应，抵消LPS对BV-2的诱导效应，促进小胶质细胞由促炎的M1型向抗炎的M2型转变。

简介：芦荟多糖是芦荟主要功能成分之一，具有很高的药用价值。采用膜技术从中华芦荟中分离提取的芦会多糖，经DEAE柱层析分离，得到纯化的三个芦会多糖组分，经苯酚-硫酸颜色-紫外可见分光光度法，于490nm处进行含量测定，及纸层析多糖组分鉴定，芦荟多糖含量为7．35％，各组分分子量一致。

简介：摘要对课本实验进行模块化重新设计，创设目标任务、逐层创设问题冲突、通过实验中关键问题的引导，提高实验探究过程中的思维深度，提高证据推理能力。通过探究葡萄糖的结构以及结构与性质之间的关系，强化"结构决定性质"、进一步发展"结构间会相互作用影响性质"的结构认知思维模型，建立起宏观性质、用途与微观组成、结构之间的关联。培养学生"宏观辨识与微观辨析"、"证据推理与模型认知"的化学学科核心素养1。

简介：摘要目的探讨人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cell，HPDLSC）经低剂量脂多糖作用后，对巨噬细胞促炎因子表达的影响及其机制。方法培养原代HPDLSC，并以磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS）、100 μg/L或10 mg/L 脂多糖处理48 h，收集各自条件培养基（conditioned medium，CM），分别与人单核白血病细胞（human monocyte leukemic cell，THP-1）源性巨噬细胞共培养48 h，对应实验分组为PBS处理的HPDLSC条件培养基（PBS-treated HPDLSC-derived CM，CM-C）组、低剂量脂多糖处理的HPDLSC条件培养基（low dose lipopolysaccharide-treated HPDLSC-derived CM，CM-L）组和高剂量脂多糖处理的HPDLSC条件培养基（high dose lipopolysaccharide-treated HPDLSC-derived CM，CM-H）组。实时荧光定量PCR检测各组巨噬细胞促炎因子相关基因白介素（interleukin，IL）-6、IL-8、IL-12、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）mRNA表达；CM-C、CM-L组核因子E2相关因子2 ［nuclear factor （erythroid-derived 2）-like 2，NRF2］及其下游抗氧化基因谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基（glutamate-cysteine ligase catalytic subunit，GCLC）、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（磷酸）：醌氧化还原酶1［NAD（P）H quinone dehydrogenase 1，NQO1］及血红素加氧酶1（heme oxygenase 1，HO-1）mRNA的表达。同时以蛋白质免疫印迹法检测CM-C和CM-L组巨噬细胞胞质与胞核NRF2蛋白、GCLC及HO-1蛋白表达；2′，7′-二氯荧光素探针检测CM-C和CM-L组巨噬细胞内活性氧水平，以平均荧光强度（mean fluorescent intensity，MFI）表征结果。结果CM-H组巨噬细胞内促炎因子IL-6、IL-8、IL-12及TNF-α mRNA表达（2.332±0.594、3.601±0.639、2.120±0.677、2.468±0.236）均较CM-C组（1.000±0.321、1.000±0.151、1.000±0.059、1.000±0.095）显著上调（P<0.05）；而CM-L组巨噬细胞内IL-6、IL-12及TNF-α mRNA表达（0.056±0.002、0.215±0.024、0.567±0.071）均较CM-C组（1.000±0.209、1.000±0.220、1.000±0.220）显著下调（P<0.05）。在mRNA水平，NRF2表达在CM-L组（1.864±0.198）较CM-C组（1.000±0.094）显著上调（P<0.05）；在蛋白水平，CM-L组巨噬细胞胞质及胞核NRF2表达（1.175±0.104、1.308±0.082）均较CM-C组（1.000±0.025、1.000±0.049）显著升高（P<0.05）。CM-L组巨噬细胞NRF2下游抗氧化基因GCLC、NQO1 mRNA表达（1.786±0.278、1.444±0.078）均较CM-C组（1.000±0.139、1.000±0.226）显著上调（P<0.05），且CM-L组GCLC、HO-1蛋白水平（1.159±0.036、1.412±0.075）均显著高于CM-C组（1.000±0.050、1.000±0.013）（P<0.05）。同时CM-L组巨噬细胞活性氧水平（MFI：123 419±1 302）较CM-C组（MFI：139 193±1 241）显著降低（P<0.05）。结论低剂量脂多糖可以诱导HPDLSC激活巨噬细胞NRF2信号通路调控氧化应激反应，下调巨噬细胞促炎因子表达。

简介：摘要目的探讨环状RNA VMA21(circ_VMA21)对脂多糖(LPS)诱导的血管内皮细胞损伤和氧化应激的影响及其机制。方法人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)随机分为Control、LPS、LPS+pcDNA-circ_VMA21、LPS+pcDNA、LPS+微小RNA(miR)-122-5p inhibitor、LPS+anti-miR-NC、LPS+pcDNA-circ_VMA21+miR-122-5p mimic组；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circ_VMA21和miR-122-5p的表达水平；细胞计数检测细胞活性；流式细胞术检测细胞凋亡；蛋白质印迹法检测蛋白表达；酶联免疫吸附法检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活性；双荧光素酶报告实验检测circ_VMA21和miR-122-5p的靶向关系。两组间均数比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析(组间两两比较采用LSD-t检验)。结果LPS诱导的HUVEC中circ_VMA21表达水平降低(0.17±0.02比1.00±0.00)，miR-122-5p表达水平升高(3.76±0.09比1.00±0.00)，细胞活性降低(0.41±0.02比1.22±0.07)，细胞凋亡率(24.17±0.93比7.62±0.39)及裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)表达水平升高(0.80±0.06比0.13±0.01)，MDA含量[(736.11±27.21) nmol/ml比(159.37±14.93) nmol/ml]及LDH活性升高[(486.45±16.07) U/L比120.58±9.00) U/L]，SOD活性降低[(46.25±4.44) U/L比238.49±11.23) U/L，t＝9.721、13.122、15.321、22.472、10.817、38.123、18.237、25.522，P<0.05]；与LPS组和LPS+anti-miR-NC组比较，LPS+miR-122-5p inhibitor组miR-122-5p表达水平降低，细胞活性升高，细胞凋亡率及cleaved-Caspase-3表达水平降低，MDA含量及LDH活性降低，SOD活性升高(F＝2 564.169、693.501、540.990、704.667、41 336.059、1 170.734、414.559，P<0.05)。与LPS+pcDNA-circ_VMA21组比较，LPS+pcDNA-circ_VMA21+miR-122-5p mimic组miR-122-5p表达水平升高，细胞活性降低，细胞凋亡率及cleaved-Caspase-3表达水平升高，MDA含量及LDH活性升高，SOD活性降低(F＝810.792、298.432、376.370、279.806、634.476、528.520、343.420，P<0.05)。结论circ_VMA21通过下调miR-122-5p抑制脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤和氧化应激。

简介：摘要目的探讨重组人突触融合蛋白4(STX4)对脂多糖(LPS)诱导的胰岛β细胞INS-1损伤影响。方法胰岛β细胞INS-1分成Control组(空白对照)、LPS组(LPS处理)、LPS+NC组(转染阴性对照载体，LPS处理)、LPS+STX4组(转染pcDNA-STX4，LPS处理)，RT-qPCR和Western blot检测STX4 mRNA和蛋白质表达，流式细胞术检测凋亡，DCFHDA法检测活性氧簇(ROS)水平、黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平、比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平、钼酸铵比色法检测过氧化氢酶(CAT)水平、硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平，ELISA法检测细胞分泌的白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和葡萄糖条件下胰岛素分泌水平，Western blot法检测Cleaved Caspase-3、Bax、p65蛋白质表达。用NF-κB信号通路激活剂处理上调STX4后的胰岛β细胞INS-1，给予LPS刺激，同样利用上述方法测定细胞凋亡、ROS、SOD、GSH-Px、CAT、MDA水平和分泌的IL-1β、TNF-α、胰岛素水平以及Cleaved Caspase-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p65蛋白质水平。结果与Control组比，LPS组胰岛β细胞中STX4 mRNA和蛋白质表达均减少，细胞凋亡率、ROS水平、MDA水平均升高，SOD、GSH-Px、CAT水平均降低，细胞分泌的IL-1β、TNF-α水平均升高，细胞分泌的胰岛素水平降低，Cleaved Caspase-3、Bax、p65蛋白质表达水平也升高。NF-κB信号通路激活剂处理逆转上调STX4对LPS条件下胰岛β细胞凋亡、ROS、SOD、GSH-Px、CAT、MDA水平和分泌的IL-1β、TNF-α、胰岛素水平以及Cleaved Caspase-3、Bax、p65蛋白质水平影响。结论上调STX4抑制LPS诱导的胰岛β细胞氧化损伤、细胞凋亡和炎症因子释放，机制与降低NF-κB信号通路激活水平有关。

简介：摘要目的探讨线粒体融合蛋白1(mitofusin 1，MFN1)对脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的小鼠Raw264.7巨噬细胞焦亡的调控作用，为预防巨噬细胞功能障碍导致的炎症和纤维化提供新的研究靶点和理论参考。方法体外培养小鼠单核巨噬细胞Raw264.7，构建LPS诱导的细胞焦亡模型。CCK-8、PI染色、LDH释放、Western blot等验证LPS诱导Raw264.7细胞发生焦亡；Western blot筛选异常表达的线粒体相关蛋白MFN1；DCFH-DA探针检测细胞总活性氧生成情况、Mito-SOX探针检测线粒体活性氧水平、JC-1线粒体膜电位荧光探针检测线粒体膜电位变化以反映线粒体受损情况；利用Ubibrowser数据库预测出MFN1蛋白可与多种E3泛素连接酶结合，通过免疫荧光、免疫共沉淀(co-immunoprecipitation，CO-IP)试验等验证MFN1蛋白是否受泛素化调控；采用Lipofectamine2000试剂转染MFN1过表达质粒检测MFN1蛋白对细胞焦亡和线粒体功能的影响。结果LPS诱导Raw264.7细胞发生线粒体功能障碍和焦亡。LPS刺激后MFN1蛋白表达减少。CO-IP试验证明MFN1蛋白发生泛素化修饰。泛素化抑制剂MG-132处理后抑制LPS诱导的细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Pro-caspase-1、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达上调并且改善线粒体功能。MFN1过表达后缓解LPS导致的线粒体稳态失衡和巨噬细胞焦亡。结论LPS通过影响MFN1泛素化修饰调节线粒体功能障碍，进而导致巨噬细胞焦亡，本研究为治疗巨噬细胞诱导的炎症及相关疾病提供了潜在靶点。

简介：摘要目的分析心房颤动（房颤）患者肠道菌群脂多糖合成功能的变化特点及其可能的作用。方法本研究为前瞻性、横断面研究。选取2016年3月至2018年12月在首都医科大学附属北京朝阳医院住院的非瓣膜性房颤患者作为房颤组，并选取同期遗传背景匹配的体检者作为对照。收集所有研究对象的临床基线资料及粪便样本，提取肠道细菌DNA，采用Illumina novaseq进行宏基因组学测序。基于宏基因组学测序数据，分析脂多糖合成过程中的同源基因簇（KEGG orthology，KO）、合成酶的编码基因及含有这些酶基因的细菌的丰度。基于LASSO分析，筛选与房颤相关的参与脂多糖合成的关键因子，并采用受试者工作特征（ROC）曲线分析、中介分析和logistic回归分析评价其在房颤发病中可能的作用。结果房颤组50例，年龄66.0（57.0，71.3）岁，男性32例（64%）。对照组50名，年龄55.0（50.5，57.5）岁，男性41例（82%）。有20个参与脂多糖合成的KO、7个脂多糖合成酶的编码基因和89个同时可编码9个脂多糖合成酶的肠道细菌在对照组与房颤组间存在差异。LASSO回归分析显示，有5个KO、3个酶基因及9个种层级物种被筛选为关键因子，其中富集在房颤组的因子包括：2个KO（K02851和K00972），3个酶基因（LpxH、LpxC和LpxK），7个种层级物种（Intestinibacterbartlettii、Ruminococcussp. JC304、Coprococcuscatus、unculturedEubacteriumsp.、Eubacteriumsp. CAG：251、Anaerostipeshadrus、Dorealongicatena）。基于上述关键因子构建回归模型，ROC曲线分析示：KO、酶基因、物种分值识别房颤的曲线下面积（AUC）和95%CI分别为0.957（0.918~0.995）、0.940（0.889~0.991）和0.972（0.948~0.997）。中介分析的结果显示，参与脂多糖合成的肠道细菌的变化可影响房颤发病，其中有35.17%是通过富集相应的KO所介导。多因素logistic回归分析结果显示，KO分值绝对值增大，房颤的发生风险增加（OR值<0.001，95%CI：<0.001~0.021，P<0.001）。结论房颤患者肠道内富集了参与脂多糖合成的细菌，其通过编码脂多糖合成酶基因，使得房颤患者脂多糖合成功能有所上调。

简介：摘要目的以坏死性凋亡为切入点，探讨肝纤维化抵抗D-氨基半乳糖/脂多糖（D-GalN/LPS）诱导致死性损伤的新机制。方法建立四氯化碳（CCl4）诱导的肝纤维化小鼠模型，于纤维化6周时以致死剂量的D-GalN/LPS进行攻击，以同样处理的正常小鼠作为对照。即实验共分为4组：对照组（Control）、急性损伤（D-GalN/LPS）组、肝纤维化（Fib）组、肝纤维化+急性攻击（Fib+D-GalN/LPS）组。定量PCR和免疫荧光法分析坏死性凋亡（necroptosis）关键信号分子受体相互作用蛋白（RIPK）1、RIPK3、混合谱系激酶结构域蛋白（MLKL）和/或P-MLKL在各组中的表达。给予正常小鼠以靶向necroptosis关键信号分子的抑制剂，再给予急性攻击，根据转氨酶水平及肝组织学的变化来评估抑制necroptosis对D-GalN/LPS触发急性肝损害的影响。建立肝纤维化自发消融模型，再给予急性攻击，免疫组织化学法分析和比较各组小鼠肝组织中necroptosis关键信号分子的表达。组间差异的比较采用t检验或方差分析。结果定量PCR和免疫荧光检测结果显示，D-GalN/LPS攻击触发了RIPK1、RIPK3、MLKL和/或P-MLKL的明显上调。抑制necroptosis信号的关键分子可明显减轻D-GalN/LPS诱导的肝损害，表现为血清丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶水平的显著降低以及肝组织学的明显改善。纤维化肝脏中necroptosis信号分子的表达明显受到抑制。肝纤维化对D-GalN/LPS触发necroptosis的抑制随着纤维消融而逐渐削弱。结论肝纤维化可能通过抑制D-GalN/LPS触发的necroptosis而保护小鼠抵抗急性致死性损伤的攻击。

简介：目的探讨脂多糖作用小鼠RAW264.7巨噬细胞24h内细胞表面TLR4/CD14/MD-2受体复合物表达的变化特点。方法分别用低剂量（100ng/ml）和高剂量（1000ng/ml）脂多糖刺激RAW264.7,应用RT-PCR检测TLR4、CD14、MD-2mRNA水平的变化,ELISA检测细胞上清TNF-α含量的变化。结果低剂量脂多糖下调TLR4mRNA表达,14h降至最低,24h维持在低水平表达;CD14和MD-2mRNA表达增加。高剂量脂多糖上调TLR4mRNA表达,1h上升至高峰,此后维持在高水平表达;CD14和MD-2mRNA表达也明显增强。高剂量脂多糖作用后TNF-α含量显著高于低剂量脂多糖（P〈0.05）。结论高剂量脂多糖逆转低剂量脂多糖下调的TLR4表达,提高TLR4/CD14/MD-2受体复合物的表达水平,放大下游信号转导通路的炎症效应。

简介：【摘要】目的使用 ELISA法检测不同浓度脂多糖对哮喘大鼠气道平滑肌细胞合成分泌功能的影响。方法：取 6只大鼠，每只哮喘大鼠 ASMCs分成 3组， A、 B、 C组，每组 1×106cells/ml， A组：空白对照组，与 PBS共孵育 24小时； B组：低浓度 LPS组：加入 LPS（终浓度为 0.1ng/ml）共孵育 24小时； C组：高浓度 LPS组；加入 LPS（终浓度为 100ng/ml）共孵育 24小时； D组： TLR4抗体处理组 :每日激发哮喘一次 ,每次于激发哮喘前 30分钟腹腔注射抗 TLR4抗体 1ml，共 4周。使用酶联免疫吸附实验（ ELISA）检测各组培养上清液中 ASMCs分泌的 IFN-γ、 IL-4、 IL-6、 TGF-β的含量，以了解 ASMCs的分泌功能。结论：低浓度 LPS组（ B)IL-4、 IL-6蛋白含量高于空白对照组（ A)(P<0.01),IFN-Y、 TGF-β蛋白含量与空白对照组（ A)比较差异无统计学意义（ P>0.05);高浓度 LPS组（ C)IL-4、 IL-6蛋白含量低于空白对照组（ A)(P<0.01)， IFN-Y、 TGF-β蛋白含量高于空白对照组（ A)(P<0.01)；低浓度 LPS组（ B)IL-4、 IL-6蛋白含量高于高浓度 LPS组（ C)(P<0.01),IFN-Y、 TGF-β蛋白含量低于高浓度 LPS组 (C)(P<0.01)；低浓度 LPS+TLR4抗体组（ D)IL-4、 IL-6蛋白含量低于低浓度 LPS组（ B)(P<0.01)， IFN-Y、 TGF-β蛋白含量与低浓度 LPS组（ B)比较差异无统计学意义 (P>0.05),分别与空白对照组（ A)TGF-β、 IL-4、 IL-6、 IFN-Y含量比较差异无统计学意义（ P>0.05);高浓度 LPS+TLR4抗体组（ E)IL-4、 IL-6蛋白含量高于高浓度 LPS组 (C)(P<0.01),IFN-Y、 TGF-β蛋白含量低于高浓度 LPS组（ B)(P<0.01),分别与空白对照组（ A)IL-4、 IFN-Y、 IL-6、 TGF-β含量比较差异无统计学意义（ P>0.05)。

简介：摘要目的探讨14－3－3σ基因在调控内毒素/脂多糖(LPS)引发人肺上皮细胞炎症反应中的机制。方法(1)取培养的对数生长期人正常肺上皮细胞BEAS－2B，按照随机数字表法分为对照组、PCMV6－14－3－3σ组，每组3孔。对照组细胞转染空载质粒，PCMV6－14－3－3σ组细胞转染PCMV6－14－3－3σ质粒。转染48 h，蛋白质印迹法检测细胞内14－3－3σ蛋白表达。(2)取培养的对数生长期人正常肺上皮细胞BEAS－2B，按照随机数字表法分为对照组、PCMV6－14－3－3σ组、PCMV6－14－3－3σ＋LPS组、LPS组，每组3孔。对照组细胞转染空载质粒孵育42 h，PCMV6－14－3－3σ组细胞转染PCMV6－14－3－3σ质粒孵育42 h，PCMV6－14－3－3σ＋LPS组细胞转染PCMV6－14－3－3σ质粒42 h后加入LPS(终质量浓度1 μg/mL，下同)刺激6 h，LPS组细胞仅加入LPS刺激6 h。蛋白质印迹法检测Bax、B淋巴细胞瘤－2基因(Bcl－2)的蛋白表达，计算两者比值；流式细胞仪检测细胞凋亡率；实时荧光定量反转录PCR技术检测细胞内肿瘤坏死因子α(TNF－α)、白细胞介素1β(IL－1β)mRNA表达量；酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中TNF－α、IL－1β含量。对数据行t检验、单因素方差分析、LSD检验。结果(1)与对照组(0.78±0.04)比较，转染48 h PCMV6－14－3－3σ组细胞14－3－3σ蛋白表达水平(1.05±0.03)明显升高(t＝5.41, P<0.01)。(2)与对照组比较，PCMV6－14－3－3σ组细胞Bax/Bcl－2比值、细胞凋亡率、TNF－α mRNA及IL－1β mRNA表达量、细胞上清液中TNF－α及IL－1β含量均无明显变化(P>0.05)，LPS组细胞上述指标均明显升高或增加(P<0.01)。与LPS组比较，PCMV6－14－3－3σ＋LPS组细胞上述指标明显下降或减少(P<0.01)。结论14－3－3σ是调控细胞凋亡的重要因子，通过调节凋亡调控因子Bax/Bcl－2比值，抑制人肺上皮细胞凋亡，从而减轻LPS诱导的炎症反应。

简介：摘要目的使用ELISA法检测不同浓度脂多糖对哮喘大鼠气道平滑肌细胞合成分泌功能的影响。方法取6只大鼠，每只哮喘大鼠ASMCs分成3组，A、B、C组，每组1×106cells/ml，A组空白对照组，与PBS共孵育24小时；B组低浓度LPS组加入LPS（终浓度为0.1ng/ml）共孵育24小时；C组高浓度LPS组；加入LPS（终浓度为100ng/ml）共孵育24小时；D组TLR4抗体处理组每日激发哮喘一次,每次于激发哮喘前30分钟腹腔注射抗TLR4抗体1ml，共4周。使用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组培养上清液中ASMCs分泌的IFN-γ、IL-4、IL-6、TGF-β的含量，以了解ASMCs的分泌功能。结论低浓度LPS组（B)IL-4、IL-6蛋白含量高于空白对照组（A)(P<0.01),IFN-Y、TGF-β蛋白含量与空白对照组（A)比较差异无统计学意义（P>0.05);高浓度LPS组（C)IL-4、IL-6蛋白含量低于空白对照组（A)(P<0.01)，IFN-Y、TGF-β蛋白含量高于空白对照组（A)(P<0.01)；低浓度LPS组（B)IL-4、IL-6蛋白含量高于高浓度LPS组（C)(P<0.01),IFN-Y、TGF-β蛋白含量低于高浓度LPS组(C)(P<0.01)；低浓度LPS+TLR4抗体组（D)IL-4、IL-6蛋白含量低于低浓度LPS组（B)(P<0.01)，IFN-Y、TGF-β蛋白含量与低浓度LPS组（B)比较差异无统计学意义(P>0.05),分别与空白对照组（A)TGF-β、IL-4、IL-6、IFN-Y含量比较差异无统计学意义（P>0.05);高浓度LPS+TLR4抗体组（E)IL-4、IL-6蛋白含量高于高浓度LPS组(C)(P<0.01),IFN-Y、TGF-β蛋白含量低于高浓度LPS组（B)(P<0.01),分别与空白对照组（A)IL-4、IFN-Y、IL-6、TGF-β含量比较差异无统计学意义（P>0.05)。

简介：目的：明确腺病毒E1A基因对细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）所致肺泡上皮细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）／基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP-1）失衡是否存在影响。方法：将人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞分为正常对照组、转染腺病毒E1A质粒组（E1A＋组）和转染不含有腺病毒E1A的空白质粒组（EIA一组），分别以不同浓度的LPS刺激．刺激后12、24h用反转录聚合酶链反应技术检测各组细胞MMP-9mRNA和TIMP．1mRNA的表达，用酶联免疫吸附分析（ELISA）检测MMP．9和TIMP-1蛋白的表达。结果：在LPS刺激12h后E1A＋组的MMP-9／TIMP-1mRNA比值高于其他2组（P=0．045）：在刺激24h后3组之间的差别更加显著（P=0．032）。MMP-9/TIMP-1蛋白比值在LPS刺激12h后E1A＋组高于其他2组．但无统计学意义（P=0．069），在刺激24h后3组蛋白比值的差别比较显著（P=0．039）。结论：腺病毒EIA基因可导致Ⅱ型肺泡上皮细胞在LPS刺激下大量释放MMP-9．使MMP-9／TIMP-1的失衡进一步加重。

简介：摘要目的观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导肺成纤维细胞及肺组织有氧糖酵解关键酶6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2, 6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3, PFKFB3）表达及其与有氧糖酵解的关系，探讨在LPS诱导肺纤维化过程中肺成纤维细胞和肺组织有氧糖酵解的潜在机制。方法将人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞系采用随机数字表法分为PBS对照组（PBS组）和LPS组（每组3孔），Western blot检测LPS刺激细胞6h后PFKFB3表达情况，同时免疫荧光显示PFKFB3在细胞内的定位情况；于LPS刺激后48 h采用海马细胞能量代谢仪检测细胞耗氧率（oxygen consumption rate, OCR）和产酸率（extracellular acidification rate, ECAR ），并采用比色法检测有氧糖酵解产物乳酸产生情况，同时Western blot检测LPS刺激48 h后Ⅰ型胶原蛋白合成情况。将24只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为生理盐水对照组（C组）、LPS组（L组），每组12只，L组、C组连续5d分别腹腔注射5 mg/kg LPS、等容量生理盐水；每组各6只于造模后第7天无痛处死小鼠，取血浆和肺组织，Western blot和免疫荧光检测各组肺组织中PFKFB3表达情况，比色法检测各组小鼠血浆中乳酸的含量；剩余小鼠于造模后第28天取肺组织，一侧肺通过Western blot检测肺组织Ⅰ型胶原蛋白合成情况，另一侧肺做石蜡切片进行病理学检测。结果与PBS组比较，LPS刺激细胞6h后PFKFB3表达明显升高（P<0.05）；LPS刺激细胞48 h后，与PBS组比较，LPS组细胞耗氧率降低、产酸率增加，代谢产物乳酸含量明显升高（P<0.05），同时细胞Ⅰ型胶原蛋白合成显著增加（P<0.05）。与C组比较，L组小鼠腹腔注射LPS 7 d后肺组织中PFKFB3表达明显升高（P<0.05），血浆乳酸含量明显升高（P<0.05）；LPS注射28 d后，L组小鼠Ⅰ型胶原蛋白表达明显升高（P<0.05），肺组织出现明显纤维化。结论在LPS诱导的肺纤维化过程中，LPS可诱导肺成纤维细胞和肺组织中PFKFB3蛋白表达，该过程与其有氧糖酵解过程相关，PFKFB3的表达上调可能是LPS诱导肺成纤维细胞和肺组织有氧糖酵解和肺纤维化的关键环节。

简介：摘要目的探讨牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）的致病因子脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激巨噬细胞和破骨细胞后的免疫应答反应。方法获取C57BL/6小鼠骨髓单核细胞，利用条件培养基将其分别诱导为骨髓来源的巨噬细胞（bone marrow derived macrophages，BMM）和破骨细胞。实验分为空白对照组和实验组，空白对照组为不加Pg-LPS组，实验组采用Pg-LPS（10 μg/ml）分别刺激BMM和破骨细胞，检测两种细胞表达Toll样受体2（Toll-like receptor-2，TLR-2）和TLR-4的mRNA水平、蛋白水平以及分泌炎症因子的情况，并观察Pg-LPS对BMM分化为破骨细胞过程的影响。结果小鼠骨髓单核细胞成功诱导为BMM及成熟的破骨细胞。在Pg-LPS的作用下，BMM组的TLR-2 mRNA水平（41.41±13.07）较空白对照组（1.03±0.31）显著上调（P<0.01），TLR-4 mRNA无明显改变；破骨细胞组的TLR-2 mRNA（2.24±0.23）和TLR-4 mRNA水平（4.83±1.07）均较空白对照组显著上调（P<0.05，P<0.01）。流式细胞术检测结果显示，BMM组的TLR-2蛋白表达显著上调（P<0.01），平均荧光强度空白对照组为39.85±5.27，实验组为221.57±13.13；破骨细胞组的TLR-2亦有显著增加（P<0.01）：平均荧光强度空白对照组为83.31±2.69，实验组为108.65±6.32；两组细胞的TLR-4均无明显激活（P>0.05）。BMM和破骨细胞分泌的肿瘤坏死因子α和白细胞介素6水平均显著升高（P<0.01），其中破骨细胞的炎症因子增幅水平显著低于BMM（P<0.01）。此外，Pg-LPS显著抑制破骨细胞形成的数目及大小，面积百分比较对照组减少47%。结论Pg-LPS能激活BMM产生明显的免疫炎症反应，而破骨细胞对Pg-LPS的免疫应答较弱；Pg-LPS可抑制BMM分化为破骨细胞。

简介：摘要目的探讨布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）在内毒素/脂多糖（LPS）诱导烫伤小鼠肠道细胞焦亡中的作用。方法采用实验研究方法。将128只6~8周龄的雄性C57BL/6小鼠分成假伤组、单纯烫伤组、烫伤+LPS组、烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组，假伤组8只，其余5组分别为24只。烫伤5组小鼠造成背部10%体表总面积Ⅲ度烫伤，假伤组小鼠背部模拟致伤。伤后0 h（即刻），假伤组、单纯烫伤组小鼠腹腔注射生理盐水，烫伤+LPS组小鼠腹腔注射LPS，其余3组小鼠腹腔注射LPS及相应剂量的LFM-A13。假伤组小鼠于伤后0 h处死，收集肠道组织和血清；烫伤5组分别于伤后0、12、24 h，每组取8只小鼠处死，收集肠道组织及伤后12 h血清。采用免疫组织化学法检测小鼠肠道组织BTK磷酸化情况。采用蛋白质印迹法检测小鼠肠道组织磷酸化BTK和剪切型胱天蛋白酶1（caspase-1）、caspase-11蛋白表达情况。采用酶联免疫吸附测定法检测小鼠肠道组织和血清白细胞介素1β（IL-1β）含量。对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果6组小鼠伤后0 h及单纯烫伤组小鼠伤后12、24 h肠道组织未见明显BTK磷酸化情况。伤后12、24 h，烫伤+LPS组小鼠肠道组织BTK磷酸化较单纯烫伤组明显增加，烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠肠道组织BTK磷酸化较烫伤+LPS组明显下降，且随着LFM-A13剂量的增加，下降程度逐渐增加。与假伤组（0.130±0.010）及单纯烫伤组（0.120±0.040、0.110±0.040）比较，烫伤+LPS组小鼠伤后12、24 h肠道组织磷酸化BTK蛋白表达明显升高（0.470±0.090、0.430±0.080，P<0.01）。与烫伤+LPS组比较，烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后24 h及烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后12、24 h肠道组织磷酸化BTK蛋白表达明显下降（0.280±0.060，0.300±0.120、0.150±0.050，0.280±0.090、0.140±0.040，P<0.05或P<0.01）。与烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组比较，烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后24 h肠道组织磷酸化BTK蛋白表达明显下降（P<0.01）。与假伤组和单纯烫伤组比较，烫伤+LPS组小鼠伤后12、24 h肠道组织剪切型caspase-1、caspase-11蛋白表达明显增加（P<0.01）。与烫伤+LPS组比较，烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组小鼠肠道组织伤后12 h剪切型caspase-1和伤后12、24 h剪切型caspase-11蛋白表达及烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后12、24 h肠道组织剪切型caspase-1、caspase-11蛋白表达明显减少（P<0.01）。与烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组比较，烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后12、24 h肠道组织剪切型caspase-1、caspase-11蛋白表达明显减少（P<0.05或P<0.01）。伤后12 h，烫伤+LPS组小鼠肠道组织、血清IL-1β含量明显高于假伤组和单纯烫伤组（P<0.01），烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠肠道组织、血清IL-1β含量明显低于烫伤+LPS组（P<0.01）。结论BTK的磷酸化与烫伤脓毒症小鼠肠道组织剪切型caspase-1、caspase-11和血清、肠道的IL-1β含量增加有关。BTK的磷酸化介导了LPS诱导的烫伤小鼠肠道细胞焦亡，抑制BTK磷酸化可减轻烫伤小鼠肠道细胞焦亡，对肠道具有保护作用。