简介：摘要目的探讨大黄素在D-氨基半乳糖胺（D-galactosamine，D-GalN）/脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的急性肝损伤中的保护作用及其机制。方法将40只BALB/c雄性小鼠按随机数字法分为5组（n=8），对照组、大黄素组、D-GalN/LPS组、大黄素+ D-GalN/LPS组和自噬抑制剂3-MA+大黄素+ D-GalN/LPS组。经小鼠腹腔注射D-GalN （700 mg/kg）/LPS （10 μg/kg）诱导急性肝损伤模型。3-MA（15 mg/kg）和（或）大黄素（20 mg/kg）腹腔注射于模型建立前30 min，6 h后在麻醉下处死小鼠并采集血、肝组织标本。采用比色定量法检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平、肝组织髓过氧化物酶（MPO）活性，采用ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的水平，HE染色观察肝组织病理学改变，Western blot检测肝组织自噬蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1的表达量，并分析实验动物生存率。定量资料比较采用单因素方差分析，采用SNK-q检验进行两两比较，方差不齐时采用Games-Howell检验。结果与对照组相比，D-GalN/LPS组AST、ALT、TNF-α、IL-6水平和MPO活性[（2 476.80±263.14）U/L、（271.71±47.15）U/L、（537.92±89.35）pg/mL、（169.74±25.52）pg/mL、（1.37±0.22）U/mg]显著升高（P<0.05）。与D-GalN/LPS组相比，大黄素+D-GalN/LPS组AST、ALT、TNF-α、IL-6水平和MPO活性[（1 248.01±380.70）U/L、（142.59±34.63）U/L、（288.91±67.21）pg/mL、（61.83±13.64）pg/mL、（0.80±0.21）U/mg]显著降低（P<0.05）。与D-GalN/LPS组相比，大黄素+D-GalN/LPS组可明显减轻肝组织肝细胞的病理损伤，提高小鼠生存率。与对照组相比，D-GalN/LPS组肝组织LC3-Ⅱ、Beclin1表达下降；而与D-GalN/LPS组相比，大黄素+ D-GalN/LPS组肝组织LC3-Ⅱ、Beclin1表达升高。联合自噬抑制剂3-MA后大黄素的肝保护效应被逆转，AST、ALT、TNF-α、IL-6水平和MPO活性[（2 398.78±233.57）U/L、（242.79±43.46）U/L、（505.07±67.89）pg/mL、（151.46±14.11）pg/mL、（1.27±0.15）U/mg]升高（P<0.05），肝组织病理损伤加重。结论大黄素减轻D-GalN/LPS诱导的急性肝损伤，这可能与激活LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白恢复自噬有关。

简介：摘要目的探讨脂多糖（LPS）诱导的O-连接的N-乙酰葡萄糖胺（O-GlcNAc）修饰是否参与内皮细胞炎症信号通路。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），取对数生长期细胞用于实验，分为空白对照组、LPS组（2 000 mg/L的LPS）、O-GlcNAc转移酶（OGT）过表达（OGT-OE）+LPS组（转染OGT-OE质粒+2 000 mg/L的LPS）、蛋白激酶C（PKC）抑制剂+LPS组（10 μmol/L的Go 6983+2 000 mg/L的LPS）、Rho蛋白家族RhoA抑制剂+ LPS组（40 μmol/L盐酸罗红+ 2 000 mg/L的LPS）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂+LPS组（1 μmol/L的SL-2052+2 000 mg/L的LPS）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）抑制剂+ LPS组（10 μmol/L的PP2+2 000 mg/L的LPS）和小干扰RNA（siRNA）作用的Akt（si-AKT）+LPS组（si-Akt+2 000 mg/L的LPS）。各组细胞经LPS处理24 h后，采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测炎症细胞因子〔白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）〕的转录水平；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）测定OGT、O-GlcNAc、Akt、细胞外信号调节激酶（ERK）、p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）和信号转导及转录激活因子3（STAT3）的蛋白表达或磷酸化水平。结果与空白对照组相比，LPS组细胞中OGT表达及O-GlcNAc修饰水平均降低，并伴随ERK、p38MAPK和STAT3的磷酸化水平升高，且炎症因子的转录水平亦显著升高〔IL-6 mRNA（2-ΔΔCt）：4.71±0.60比1.03±0.29，TNF-α mRNA（2-ΔΔCt）：1.89±0.11比1.04±0.35，ICAM-1 mRNA（2-ΔΔCt）：2.06±0.18比1.02±0.21，VCAM-1 mRNA（2-ΔΔCt）：2.94±0.57比1.01±0.17，均P<0.05〕，说明LPS会导致O-GlcNAc修饰水平降低、炎症信号通路激活及炎症因子表达升高。与LPS组相比，OGT-OE+LPS组细胞ERK、p38MAPK、NF-κB p65和STAT3磷酸化水平下降，伴随炎症因子表达显著下降〔IL-6 mRNA（2-ΔΔCt）：0.12±0.01比0.90±0.17，TNF-α mRNA（2-ΔΔCt）：0.31±0.01比0.91±0.14，ICAM-1 mRNA（2-ΔΔCt）：0.64±0.02比1.13±0.16，VCAM-1 mRNA（2-ΔΔCt）：0.11±0.01比0.93±0.11，均P<0.05〕，说明OGT水平增高可抑制LPS作用下的内皮细胞炎症信号通路部分激活。与空白对照组比较，LPS组Akt磷酸化水平升高；与LPS组相比，给予PKC抑制剂、RhoA抑制剂、PI3K抑制剂和Akt抑制剂预处理后，OGT表达及O-GlcNAc修饰水平均下调；其中PP2+LPS组IL-6、TNF-α、ICAM-1的转录水平均较LPS组明显下降〔IL-6 mRNA（2-ΔΔCt）：1.46±0.16比3.55±0.87，TNF-α mRNA（2-ΔΔCt）：0.98±0.14比1.76±0.10，ICAM-1 mRNA（2-ΔΔCt）：1.39±0.24比2.04±0.13，均P<0.05〕，而VCAM-1无明显变化。与LPS组相比，si-Akt+LPS组OGT表达及O-GlcNAc修饰水平均下降，且炎症因子的转录水平亦明显下调〔IL-6 mRNA（2-ΔΔCt）：0.75±0.03比0.99±0.09，TNF-α mRNA（2-ΔΔCt）：0.69±0.01比1.10±0.08，ICAM-1 mRNA（2-ΔΔCt）：0.76±0.01比0.99±0.02，VCAM-1 mRNA（2-ΔΔCt）：0.93±0.08比1.20±0.21，均P<0.05〕，说明Akt参与了LPS对OGT的作用过程，并影响了炎症因子表达。结论LPS作用下的内皮细胞O-GlcNAc修饰水平下降，促进了炎症信号通路部分激活，主要涉及ERK、p38MAPK和STAT3，并影响了炎症因子表达；Akt可能参与了LPS对O-GlcNAc修饰的抑制作用。

简介：摘要目的探讨衣康酸外源性衍生物4-辛基衣康酸（4-octyl itaconate, 4-OI）对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的急性肺损伤（acute lung injury, ALI）的作用及具体调控机制。方法采用6~8周龄的C57BL/6雄性小鼠，按照随机数表法均分为对照组、4-OI组、LPS组、4-OI+LPS组和去铁酮（deferiprone, DFP）+LPS组，每组6只。通过腹腔注射LPS建立LPS诱导的ALI模型，4-OI治疗组在LPS造模前2 h预先腹腔注射4-OI。造模12 h后处死收集小鼠肺组织并进行病理及分子生物学检测。应用苏木精伊红染色和马松染色分别检测肺损伤及胶原沉积程度。应用实时定量PCR检测炎性因子及铁死亡相关基因表达水平，采用免疫印迹法测定铁死亡相关蛋白的表达水平。计量资料统计前进行方差齐性检验，多组间差异比较采用单因素方差分析。结果与对照组比较，LPS组小鼠肺组织病理损伤加重，胶原沉积增加，肺损伤评分及肺湿干重比明显升高（均P<0.05），而4-OI治疗明显减轻LPS诱导的ALI。4-OI治疗还显著降低LPS诱导的小鼠肺组织炎性因子IL-1β[（4.38±0.47） vs. （32.65±4.49）]、IL-6[（3.97±0.64） vs.（12.22±0.91）]、TNF-α[（15.06±2.26） vs. （38.53±2.31）]的mRNA水平。同时，与对照组相比，LPS组小鼠肺组织脂质过氧化代谢产物4-羟基壬烯醛、丙二醛、组织铁水平明显升高，铁死亡标志物前列腺素内过氧化物合酶2 mRNA水平也显著增加（均P<0.05）。4-OI+LPS组的上述指标显著低于LPS组水平。免疫荧光、免疫印迹及PCR结果进一步表明，LPS组核因子红细胞2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2）、谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4, GPX4）和铁蛋白重链（ferritin heavy chain, FTH1）蛋白水平显著低于对照组，而4-OI治疗显著增加Nrf2、GPX4和FTH1水平（均P<0.05），与DFP发挥出相同的抑制铁死亡作用。结论4-OI通过增加Nrf2并上调FTH1和GPX4减轻LPS诱导的ALI，为临床上ALI的防治提供潜在的药物及其理论机制。

简介：摘要目的探讨脂多糖(LPS)刺激下NUFIP-1介导核糖体自噬在树突细胞(DCs)凋亡中的作用及意义。方法将培养的树突细胞系DC2.4分为空白对照组及LPS刺激6、12、24、48、72 h组(n=5)，LPS各亚组加入1 μg/mL LPS培养相应时间。采用Western blot检测各组细胞NUFIP-1及自噬相关蛋白p62和LC3B表达水平，激光共聚焦显微镜检测NUFIP-1在细胞中的表达与定位及其分别与Lyso-tracker、LC3B共定位情况。将载有沉默空载体NS及沉默慢病毒载体NUFIP-1 siRNA感染DC2.4 (n=3)，以1 μg/mL LPS刺激24 h，应用流式细胞分析术检测细胞凋亡情况，并采用Western blot检测凋亡相关蛋白包括胱天蛋白酶(cleaved-caspase-3)和Bcl-2表达水平。多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，采用LSD-t法进一步进行组间两两比较。以P<0.05为差异有统计学意义。结果Western blot结果提示，LPS刺激不同时间(6、12、24、48、72 h)后DC2.4中NUFIP-1蛋白表达水平呈现先升高后下降趋势，其中LPS 24 h组NUFIP-1表达水平显著高于空白对照组[空白对照组：(0.6786 ± 0.0820)；LPS 24 h组：(1.4830 ± 0.1170)，P<0.01]。同时，LPS 24 h组p62表达水平显著低于空白对照组[空白对照组：(0.9087 ± 0.1235)；LPS 24 h组：(0.3113 ± 0.5571)，P<0.01]。LPS 24 h组LC3B-I向LC3B-Ⅱ的转化显著高于空白对照组[空白对照组：(0.5542 ± 0.1248)；LPS 24 h组：(2.5310 ± 0.3119)，P<0.01]。激光共聚焦显微镜观察显示，NUFIP-1主要定位于细胞核及核周，LPS刺激后其荧光强度于6 h至24 h呈时间依赖性增强，而刺激48、72 h明显减弱。同时，NUFIP-1与Lyso-tracker及LC3B的共定位较空白对照组显著增强。采用慢病毒感染技术感染NUFIP-1 siRNA可显著下调DC2.4 NUFIP-1表达水平，与空白对照组及空载体组比较分析，差异有统计学意义[空白对照组：(0.6627 ± 0.1707)；空载体组：(0.6966 ± 0.1107)；siRNA组：(0.1428 ± 0.0296)，P<0.05]。流式细胞分析术显示，NUFIP-1 siRNA感染组在LPS刺激后较空白对照LPS 24 h组及空载体LPS 24 h组DC2.4凋亡率显著升高[空白对照LPS 24 h组：(47.91%±1.006%)；空载体LPS 24 h组：(70.26% ± 1.011%)；siRNA LPS 24 h组：(80.23% ± 2.094%)，P<0.01]。Western blot分析进一步证实，NUFIP-1 siRNA感染组相较空白对照组及空载体组在LPS刺激下DC2.4凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3表达显著增强[空白对照LPS 24 h组：(0.4748 ± 0.0876)；空载体LPS 24 h组：(0.2849 ± 0.0418)；siRNA LPS 24 h组：(0.9733 ± 0.0525)，P<0.01]，抗凋亡蛋白Bcl-2表达则明显下调[空白对照LPS 24 h组：(0.7810 ± 0.0490)；空载体LPS 24 h组：(0.8292 ± 0.0729)；siRNA LPS 24 h组：(0.3957 ± 0.0838)，P<0.05]。结论LPS刺激后DC2.4中NUFIP-1介导核糖体自噬明显活化，且对DC2.4凋亡具有显著保护效应。

简介：摘要目的探讨鸢尾素(Irisin)对成骨细胞炎性反应的保护作用及其机制。方法2018年8月至2019年4月，往小鼠成骨细胞(MC3T3-E1，购自北京北纳生物公司)加入鸢尾素预处理后，再经脂多糖(LPS)刺激。实验分为6组：对照组(Control组)、LPS(5 mg/L)、LPS＋Irisin(25 μg/L)、LPS＋Irisin(50 μg/L)、LPS＋Irisin(100 μg/L)和LPS＋Irisin(200 μg/L)组。用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖，2’，7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧自由基(ROS)含量，流式细胞术检测线粒体活性与细胞凋亡率，蛋白质印迹法(Western blot)检测单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶-α (AMPK-α)、p-AMPK-α与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。两组比较采用t检验，多组比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，两两比较采用LSD检验。结果(1)与Control组比较(0.864±0.021)，LPS组细胞增殖明显下降(0.719±0.018)，而100 μg/L(0.760±0.033)与200 μg/L(0.809±0.025) Irisin预处理组细胞增殖的明显增加(F＝23.625，P<0.05)，差异有统计学意义；(2)与Control组比较(286.600±33.448)，LPS组ROS含量显著增加(402.600±42.694)，而Irisin预处理组(25～200 μg/L)(323.400±27.437、322.600±28.325、309.000±42.936、307.800±24.045)明显抑制ROS形成(F＝6.986，P<0.01)，差异有统计学意义；(3)与Control组比较，LPS刺激后明显降低线粒体活力[(31.800±3.242)%、(15.667±1.804)%，t＝7.532，P<0.01]，细胞凋亡率显著增加[(7.610±0.229)%、(14.057±1.631)%，t＝6.777，P<0.01]，差异有统计学意义。p-AMPK-α表达显著降低[(0.546±0.178)、(0.186±0.093)，t＝6.777，P<0.01]，而Caspase-3水平明显升高[(0.212±0.031)、(0.324±0.026)，t＝4.811，P<0.01]，差异有统计学意义；(4)与LPS处理组比较，Irisin＋LPS组中MC3T3-E1线粒体活性明显升高[(10.157±0.774)%、(27.500±1.572)%，t＝17.145，P<0.01]，细胞凋亡率显著减少[(11.927±0.385)%、(7.017±1.080)%，t＝7.417，P<0.01]，p-AMPK-α表达显著升高[(0.356±0.059)、(0.551±0.044)，t＝4.567，P<0.05]，凋亡蛋白Caspase-3显著下降[(0.384±0.071)、(0.202±0.031)，t＝4.051，P<0.05]，差异均有统计学意义。结论Irisin抑制LPS诱导的小鼠成骨细胞凋亡，这一机制可能与激活AMPK信号有关。

简介：摘要目的建立有效的细菌性角膜炎体外细胞模型，探讨其对角膜基质细胞的影响。方法采用贴壁法分离培养SD大鼠角膜基质细胞，以1 000细胞·100 μl-1·孔-1接种并使用CCK8测定不同浓度（0.4、2、10、50、250、1 250 mg/L）脂多糖（LPS）对细胞1、2、3、4、5 d内的量效作用曲线，对照组使用PBS（n=3）。根据量效曲线选定建模浓度后，分别设置模型组与对照组（n=3）。光镜观察培养5 d角膜基质细胞形态变化。以5 000细胞·100 μl-1·孔-1接种，使用CCK8测定LPS作用6、12 h对角膜基质细胞短期活性影响。划痕实验检测LPS作用6、12 h角膜基质细胞迁移率；ELISA检测角膜基质细胞炎症因子TNF-α、IL-6分泌水平；免疫荧光染色鉴定胶原分泌水平；免疫印迹检测基质金属蛋白酶9（MMP9）表达变化。结果与对照组比较，自LPS作用1 d开始，相同时间点时10、50、250、1 250 mg/L角膜基质细胞活性均降低（均P<0.05）。为满足细胞炎症诱导的需要，选用出现细胞增殖抑制效应的低药物浓度10 mg/L LPS建立体外炎症细胞模型。细胞体外培养5 d时，与对照组比较，模型组角膜基质细胞形态由梭形变为多边形。调整细胞种植密度后，短期的体外活性检测表明，与对照组比较，模型组角膜基质细胞在LPS作用6 h和12 h后出现细胞活性抑制现象[6 h：0.036±0.006比0.061±0.006，12 h：0.033±0.004比0.053±0.005，均P<0.05]。6 h和12 h时模型组角膜基质细胞的体外迁移速率明显低于对照组[6 h：（6.77±3.22）Pixel/h比（16.52±1.18）Pixel/h，12 h：（8.41±1.45）Pixel/h比（17.09±0.75）Pixel/h，均P<0.05]。LPS作用48 h后，与对照组比较，模型组角膜基质细胞炎症因子分泌水平升高[TNF-α：（446.71±20.59）pg/ml比（289.27±26.44）pg/ml，IL-6：（146.26±17.34）pg/ml比（65.94±10.11）pg/ml，均P<0.05]；MMP9表达量增加[0.884±0.052比0.385±0.036，P<0.05]；Ⅰ、Ⅵ型胶原含量降低[Ⅰ型：（0.46±0.15）×105 Pixel2比（1.21±0.53）×105 Pixel2，Ⅵ型：（2.63±2.07）×106 Pixel2比（7.08±1.52）×106 Pixel2，均P<0.05]，Ⅲ型胶原含量升高[（3.69±0.73）×105 Pixel2比（1.12±0.40）×105 Pixel2，P<0.05]。结论LPS诱导角膜基质细胞可模拟角膜炎中细胞炎症反应及变化，为研究细菌性角膜炎的机制和治疗方法提供有效的体外细胞模型。

简介：摘要目的探讨小鼠肝癌原位移植瘤模型中脂多糖（LPS）诱导Yes相关蛋白（YAP）的表达情况及其调控巨噬细胞极化的机制。方法建立野生型（WT）、YAP基因敲除（YAP-HKO）、YAP-WT C57BL/6小鼠肝癌模型，随机选取4只WT小鼠作为LPS组，予每天腹腔注射LPS 5 mg/kg；另选4只作为对照组，予腹腔注射等体积生理盐水。为验证YAP的作用，设置YAP-HKO小鼠组及其同窝YAP-WT小鼠组，每组各4只。各组小鼠饲养10 d后处死，测量肝肿瘤体积；免疫组化法观察LPS组和对照组小鼠肝组织YAP、Ki67、F4/80、CD163，YAP-HKO和YAP-WT小鼠肝组织F4/80、CD163的表达情况。流式细胞术检测小鼠肝组织巨噬细胞分型情况。两组检测指标比较采用t检验。结果LPS组小鼠肝肿瘤体积为（2.50±0.79）cm3，明显大于对照组的（0.97±0.29）cm3（t=3.641，P<0.05）；YAP-HKO小鼠肝肿瘤体积为（0.13±0.11）cm3，明显小于YAP-WT小鼠的（0.78±0.23）cm3（t=-5.100，P<0.05）。LPS组肝组织YAP、Ki67、F4/80、CD163表达均高于对照组。YAP-HKO小鼠肝组织F4/80、CD163表达均低于YAP-WT小鼠。LPS组肝组织M2型巨噬细胞百分率为（69±3）%，明显高于对照组的（45±4）%（t=9.768，P<0.05）。YAP-HKO小鼠组肝组织M2型巨噬细胞百分率为（54±4）%，明显低于YAP-WT小鼠组的（68±7）%（t=-3.669，P<0.05）。结论在小鼠肝癌原位移植瘤模型中，LPS通过促进YAP的表达，募集巨噬细胞并促进其向M2型极化，促进肿瘤增殖。

简介：摘要目的探讨布地奈德对脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤的影响。方法将30只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为3组：对照组、LPS组和布地奈德组，每组10只。采用经气管插管给予LPS(5 mg/kg)制备大鼠急性肺损伤模型；布地奈德组给予LPS 24 h后经气道给予布地奈德(500 μg/kg)。3组均于48 h后测定肺水清除率，称量肺湿干重比，采用酶联免疫吸附试验测定支气管肺泡灌洗液中白细胞介素1β的水平，HE染色观察肺组织病理学改变，免疫组织化学法观察细胞间黏附分子1的表达。结果与LPS组相比，布地奈德干预后，肺组织结构破坏明显减轻，炎症细胞浸润减少，肺水清除率提高(P值均<0.01)，肺湿干重比降低(P<0.05)，支气管肺泡灌洗液中蛋白含量及中性粒细胞、巨噬细胞等的渗出减少(P<0.05或P<0.01)，细胞间黏附分子1表达减少。结论布地奈德对LPS诱导的急性肺损伤大鼠具有肺保护作用，其机制考虑与减少细胞炎症反应、减少炎症因子对内皮细胞的活化、加强肺水清除作用有关。

简介：摘要目的探讨母孕期脂多糖暴露对小鼠子代过敏性哮喘发生的影响。方法动物实验研究，2019年6月至2021年6月将10只C57BL/6J孕鼠于妊娠第15.5天采用随机数字表法进行分组，根据予以腹腔注射7 μg/kg脂多糖或磷酸盐缓冲液（PBS）分为脂多糖组和PBS组。采用随机数字表法在脂多糖组及PBS组产生的子代小鼠中各选取6只（共12只），从4周龄起分别进行屋尘螨或PBS刺激，分为脂多糖+PBS组、脂多糖+屋尘螨组、PBS+PBS组、PBS+屋尘螨组，每组各3只。观察仔鼠咳喘表现，通过HE染色观察其肺组织病理改变，同时应用高通量液相蛋白芯片检测法测定肺组织炎症因子［白细胞介素（IL）4、6、17A、23，干扰素α、β］的表达，组间比较采用t检验或秩和检验。结果12只小鼠中，通过观察PBS+屋尘螨组哮喘样表现相对于PBS+PBS组明显，而脂多糖+屋尘螨组哮喘样表现轻于PBS+屋尘螨组。肺组织HE染色显示，PBS+屋尘螨组炎性细胞聚集高于PBS+PBS组［4.0（3.5，4.0）比0（0，0.5）分，Z=2.02，P=0.043］，脂多糖+屋尘螨组炎症细胞水平低于PBS+屋尘螨组［1.0（0.5，1.5）比4.0（3.5，4.0）分，Z=1.99，P=0.046］。肺组织高通量液相蛋白芯片检测可见PBS+屋尘螨组的IL-6、IL-23、干扰素β均高于PBS+PBS组［（114±3）比（94±4）ng/L、（210±4）比（173±7）ng/L、（113±2）比（94±4）ng/L，t=4.37、4.84、3.96，均P<0.05］，脂多糖+屋尘螨组的IL-6、IL-23、干扰素α、干扰素β水平均明显低于PBS+屋尘螨组［（87±5）比（114±3）ng/L、（171±7）比（210±4）ng/L、（16.1±0.6）比（20.9±0.3）ng/L、（95±1）比（113±2）ng/L，t=5.07、5.07、7.28、7.47，均P<0.05］。结论孕期低剂量脂多糖暴露可减轻子代过敏性气道炎症发展，降低过敏性疾病发生，这提示母孕期细菌感染可能改变了子代过敏性哮喘的发生和发展。

简介：摘要目的探讨脂多糖（LPS）促进肠道L细胞miR-425-5p表达的机制。方法将肠道L细胞系GLUTag细胞分为对照（NC）组、LPS组（LPS 200 ng/ml培养24 h）、小干扰RNA（siRNA）NC组（LPS 200 ng/ml培养24 h后转染siRNA NC）和NF-κB siRNA组［LPS 200 ng/ml培养24 h后转染核因子-κB（NF-κB）siRNA］，每组3个复孔。采用Western blotting检测细胞核及细胞质中NF-κB p65蛋白表达水平，实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-425-5p表达水平，酶联免疫吸附测定法检测胰高糖素样肽-1（GLP-1）的分泌水平。采用Promo软件分析预测miR-425-5p启动子上NF-κB的潜在结合位点，双荧光素酶报告实验检测miR-425-5p启动子区域结合位点的相对活性，染色质免疫沉淀反应验证NF-κB与miR-425-5p之间的相互作用。两组之间比较采用独立样本t检验，多组之间比较采用单因素方差分析。结果与对照组相比，LPS组的GLP-1分泌水平显著下降（P<0.01），miR-425-5p表达水平显著升高（P<0.01）、细胞质和细胞核中NF-κB p65蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。与siRNA NC组相比，NF-κB siRNA组细胞核及细胞质中NF-κB p65的蛋白表达水平、miR-425-5p表达水平均明显下降（P<0.01）。LPS诱导下，含有两个结合位点（2-Luc/3-Luc）的miR-425-5p启动子活性明显高于含有单独的结合位点（3-Luc），差异具有统计学意义（P<0.01）；NF-κB与miR-425-5p基因启动子序列结合位点2的结合能力最强（P<0.01）。结论LPS通过活化NF-κB，促进其与miR-425-5p基因启动子序列的结合位点2结合，进而促进肠道L细胞miR-425-5p转录，最终调节肠道L细胞GLP-1分泌。

简介：摘要目的探讨尼古丁在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤炎症反应中的作用及机制。方法本研究为实验研究。动物实验部分，应用LPS构建急性肺损伤小鼠模型，将C57BL/6J小鼠24只，按体质量排序，采用蛇形分组法分为4组，每组6只，对照组、LPS组、LPS+尼古丁组、LPS+尼古丁+3-MA组。留取肺组织行HE染色，肺泡灌洗液行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素1β(IL-1β)水平。细胞实验部分，采用MH-S细胞系，分为4组，对照组、LPS组、LPS+尼古丁组、LPS+尼古丁+3-MA组，取细胞上清液行ELISA检测IL-1β水平，采用细胞裂解液提取总蛋白行蛋白免疫印迹法检测NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase1、LC3BⅡ、LC3BⅠ、P62蛋白水平，免疫荧光检测LC3B表达，透射电镜观测自噬小体数量。结果LPS组较对照组，肺组织出现明显炎性细胞浸润。支气管肺泡灌洗液和MH-S细胞上清液中IL-1β水平升高；LPS+尼古丁组较LPS组，肺组织炎性细胞浸润减轻，支气管肺泡灌洗液和细胞上清液中IL-1β水平降低；LPS+尼古丁+3-MA组较LPS+尼古丁组，肺组织炎性细胞浸润加重，支气管肺泡灌洗液和MH-S细胞上清液中IL-1β水平升高，差异均有统计学意义(F值分别为446.40、656.40，P值均<0.001)。蛋白免疫印迹法检测各组MH-S细胞裂解液，LPS组较对照组NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase1表达水平升高，LPS+尼古丁组较LPS组NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase 1表达水平下降，LPS+尼古丁+3-MA组较LPS+尼古丁组NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase1表达水平升高，差异均有统计学意义(F值分别为180.00、301.70、105.80，P值均<0.001)。使用透射电镜观察4组MH-S细胞自噬小体，采用蛋白免疫印迹法检测4组MH-S细胞中P62及LC3BⅡ/LC3BⅠ表达显示，与对照组比较，LPS组自噬小体数量增多，P62表达水平降低，LC3BⅡ/LC3BⅠ升高；LPS+尼古丁组较LPS组自噬小体数量增多，P62表达水平降低，LC3B Ⅱ/LC3BⅠ升高，LPS+尼古丁+3-MA组较LPS+尼古丁组自噬小体数量减少，P62表达水平升高，LC3B Ⅱ/LC3BⅠ降低，差异均有统计学意义(F值分别为45.25、152.00、137.40，P值均<0.05)。结论尼古丁通过增强自噬减弱LPS诱导的急性肺损伤炎症反应及NLRP3炎症小体的活性。

简介：摘要目的研究松花粉对脂多糖（LPS）诱发小鼠学习记忆功能损伤的保护作用和机制。方法将60只小鼠采用数字表法随机分为四组：正常对照组（n=15）、模型组（n=15）、松花粉低剂量组（500 mg/kg，n=15）和松花粉高剂量组（1 000 mg/kg，n=15）。小鼠侧脑室一次性注射LPS建立小鼠学习记忆功能损伤模型，通过水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力，同时测定小鼠海马超氧化物歧化酶（SOD）的活性，谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）的含量，同时检测小鼠海马白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量，以及多巴胺（DA）和去甲肾上腺素（NE）的含量。结果与正常对照组小鼠相比，模型组小鼠避暗实验潜伏期［（134.80±33.89）s比（282.20±17.43）s］明显缩短（t=4.23，P<0.01），错误次数［（4.00±1.58）次比（1.20±1.30）次］显著升高（t=2.85，P<0.01）。给予松花粉治疗后可显著提升小鼠避暗实验潜伏期［（189.40±27.21）s、（213.40±21.26）s比（134.80±33.89）s］（t=3.21、4.38，均P<0.05），降低小鼠的错误次数［（1.60±1.44）次、（1.40±1.44）次比（4.00±1.58）次］（t=5.12、6.42，均P<0.05）。同时，模型组小鼠海马中SOD的活性，GSH、DA、NE的含量较正常对照组小鼠［（7.59±1.77）kU/g比（39.90±6.37）kU/g，（3.49±0.13）mmol/g比（6.37±0.14）mmol/g，（418.42±2.57）ng/L比（586.37±3.64）ng/L，（187.20±5.41）ng/L比（298.42±2.32）ng/L］显著降低（t=3.67、8.23、2.23、3.65，均P<0.05），MDA、IL-6和TNF-α的含量［（8.79±0.82）mmol/g比（2.62±0.16）mmol/g，（48.07±5.56）ng/L比（18.76±1.42）ng/L，（87.20±4.31）ng/L比（22.42±3.39）ng/L］显著升高（t=7.45、2.67、4.35，P<0.05或P<0.01）。给予松花粉治疗后，与模型组小鼠相比，SOD的活性，GSH、DA和NE的含量［（18.80±2.39）kU/g、（28.70±2.36）kU/g比（7.59±1.77）kU/g，（5.04±0.36）mmol/g、（5.45±0.17）mmol/g比（3.49±0.13）mmol/g，（488.37±3.46）ng/L、（506.29±5.72）ng/L比（418.42±2.57）ng/L，（225.65±3.72）ng/L、（239.76±5.58）ng/L比（187.20±5.41）ng/L］显著升高（t=4.56、6.71，t=4.65、5.32，t=4.73、6.72，t=3.84、5.63，P<0.05或P<0.01），MDA、IL-6和TNF-α的含量［（5.72±0.47）mmol/g、（3.77±0.23）mmol/g比（8.79±0.82）mmol/g，（28.42±3.54）ng/L、（23.43±5.62）ng/L比（48.07±5.56）ng/L，（48.87±4.82）ng/L、（39.65±6.69）ng/L比（87.20±4.31）ng/L］显著降低（t=6.31、7.28，t=3.46、6.31，t=4.28、3.57，P<0.05或P<0.01）。结论松花粉对LPS诱导的小鼠学习记忆能力损伤具有改善作用，其作用机制可能与其上调小鼠海马中单胺类神经递质DA和NE的水平，以及抑制海马氧化应激和炎性反应水平有关。

简介：摘要目的探讨12-脂氧合酶（12-LOX）抑制剂ML355对小鼠经脂多糖（LPS）诱导的炎症反应的拮抗效应及其分子机制。方法①体内实验：将24只成年雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组〔腹腔注射100 μL二甲亚砜（DMSO）后1 h再给予0.9%的生理盐水〕、LPS组（腹腔注射LPS 20 mg/kg）、ML355预处理组（给予LPS前1 h腹腔注射ML355 15 mg/kg、30 mg/kg进行预处理）。制模后12 h处死小鼠，收集外周血、腹腔灌洗液和腹腔巨噬细胞（PMs），采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组血浆和腹腔灌洗液中12-羟基二十碳四烯酸（12-HETE）含量、腹腔灌洗液中γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL-1β、IL-6、IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及血清中IFN-γ、IL-1β水平，采用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组小鼠PMs中IFN-γ、IL-1β及花生四烯酸-15-脂氧合酶（Alox15）的mRNA表达。②体外实验：体外培养小鼠原代PMs，按随机数字表法分为对照组（加入终浓度为0.3%的DMSO）、LPS组（给予LPS 20 mg/L）、ML355预处理组（给予LPS前1 h加入25 μmol/L、50 μmol/L的ML355预处理）。于LPS作用不同时间点收集各组细胞上清液和细胞团块，用细胞计数试剂盒- 8（CCK-8）检测ML355对PMs细胞存活率的影响，采用ELISA法检测各组PMs中12-HETE、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10的含量，用qRT-PCR检测各组细胞中IFN-γ、IL-1β及Alox15的mRNA表达，用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测12/15-脂氧合酶（12/15-LOX）及丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）的蛋白表达。结果①体内实验：作用12 h，LPS组血浆和腹腔灌洗液中12-HETE以及腹腔灌洗液中炎性因子、血清中IFN-γ、IL-1β含量均较对照组显著增加。与LPS组比较，15 mg/kg和30 mg/kg ML355预处理后血浆和腹腔灌洗液中12-HETE及血清中IFN-γ含量均明显减少〔12-HETE：血浆（mg/L）为11.59±1.80、11.58±1.75比18.59±1.68，腹腔灌洗液（μg/L）为355.80±59.47、196.30±88.98比712.10±44.55；血清中IFN-γ（ng/L）：147.60±2.94、114.20±2.94比326.40±2.22，均P<0.05〕，用30 mg/kg ML355预处理后小鼠腹腔灌洗液中IFN-γ水平明显降低（ng/L：228.70±6.94比309.80±16.37，P<0.05）；qRT-PCR结果显示，给予LPS后，PMs中IFN-γ、IL-1β的mRNA表达水平明显升高，用15 mg/kg和30 mg/kg ML355作用后均可明显下调IFN-γ及Alox15的mRNA表达水平〔IFN-γ mRNA（2-ΔΔCt）：1.25±0.25、0.33±0.07比2.32±0.13，Alox15 mRNA（2-ΔΔCt）：0.10±0.01、0.18±0.02比0.91±0.18，均P<0.05〕。②体外实验：与对照组比较，LPS刺激PMs 12 h后，小鼠PMs上清液中12-HETE含量呈升高趋势，但差异无统计学意义，给予25 μmol/L ML355预处理12 h后小鼠PMs上清液中12-HETE含量较LPS组明显降低（μg/L：39.92±6.22比79.01±9.82，P<0.05）；与对照组比较，LPS组小鼠PMs上清液中IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-6水平均明显升高，给予50 μmol/L的ML355预处理后，PMs上清液中IFN-γ明显降低（ng/L：255.30±8.82比303.10±6.76，P<0.05）；qRT-PCR和Western blotting结果显示，LPS刺激12 h后，PMs中炎性因子IFN-γ、IL-1β的mRNA表达较对照组明显上调，Alox15 mRNA表达无显著变化，细胞外信号调节微酶（ERK）、p38MAPK、c-Jun氨基末端激酶（JNK）的磷酸化水平及12/15-LOX蛋白表达均较对照组明显增加；与LPS组比较，用50 μmol/L ML355预处理后IFN-γ、IL-1β的mRNA表达明显下调〔IFN-γ mRNA（2-ΔΔCt）：0.16±0.05比1.25±0.03，IL-1βmRNA（2-ΔΔCt）：4.57±0.19比7.83±0.56，均P<0.05〕，ERK、JNK的磷酸化水平及12/15-LOX蛋白表达水平均受到抑制，JNK磷酸化水平的降低以50 μmol/L ML355作用12 h更显著（p-JNK/JNK：0.96±0.04比1.20±0.04，P<0.05），而25 μmol/L和50 μmol/L ML355作用12 h后ERK的磷酸化水平均明显降低（p-ERK/ERK：1.49±0.18、1.40±0.07比2.04±0.07，均P<0.05）。结论ML355对小鼠经LPS诱导的炎症反应具有拮抗效应，其机制可能是通过抑制12/15-LOX、p-ERK、p-JNK的蛋白表达水平来实现的。

简介：摘要目的评价铁死亡在脂多糖（LPS）诱导小鼠巨噬细胞线粒体损伤模型中的作用。方法常规培养小鼠RAW264.7细胞，按随机数字表法将培养的细胞分为4组（n=6）：对照组（Con组）、脂多糖组（LPS组）、脂多糖+铁死亡激动剂Erastin组（LPS+E组）和脂多糖+铁死亡抑素Ferrostatin-1组（LPS+F组）。LPS组给予终浓度为1 μg/ml的LPS进行孵育6 h；LPS+E组给予终浓度为1 μg/ml的LPS和浓度为1 mmol/L的含Erastin培养液进行孵育6 h；LPS+F组给予终浓度为1 μg/ml的LPS和浓度为1 mmol/L的含Ferrostatin-1培养液进行孵育6 h。采用Clark氧电极法及JC-1法分别测定线粒体呼吸控制率（RCR）及线粒体膜电位（MMP），透射电镜下观察细胞内线粒体改变情况，采用Western blot法测定细胞内铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、长链酯酰辅酶A合成酶4（ACSL4）的表达，采用荧光探针法测定活性氧族（ROS）和Fe2+含量，采用硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（MDA）含量。结果与Con组比较，LPS组RCR和MMP均降低（P均<0.05），GPX4表达下调（P<0.05），ACSL4表达上调（P<0.05）；线粒体出现线粒体膜增厚、线粒体皱缩、线粒体嵴消失等铁死亡表现，细胞内Fe2+含量升高（P<0.05），ROS含量升高（P<0.05），MDA含量升高（P<0.05）。与LPS组比较，LPS+E组RCR和MMP降低（P<0.05），GPX4表达下调（P<0.05），ACSL4表达上调（P<0.05），Fe2+含量、ROS含量和MDA含量均升高（P均<0.05）。LPS+F组RCR和MMP升高（P<0.05），GPX4表达上调（P<0.05），ACSL4表达下调（P<0.05），出现铁死亡变化的线粒体增加（P<0.05），Fe2+含量、ROS含量和MDA含量均降低（P均<0.05）。结论铁死亡增强LPS致小鼠巨噬细胞线粒体损伤。

简介：摘要目的探讨成纤维细胞焦亡在创面愈合中的作用及虎杖苷对其的影响。方法以5 μg/ml脂多糖（LPS）刺激成纤维细胞建立实验模型，并随机分为4组：对照组细胞不接受任何处理；实验组细胞接受5 μg/ml LPS处理；治疗组细胞接受5 μg/ml LPS及50 μmol/L虎杖苷处理；抑制剂组细胞接受5 μg/ml LPS及100 nmol/L VX-765处理。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖；试剂盒检测caspase-1活性；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养基白细胞介素（IL）-1β、IL-18及Ⅲ型胶原蛋白含量。结果与对照组比较，实验组caspase-1活性及IL-1β、IL-18含量分别显著增加为（475.4±39.9）%、（254.9±19.4）pg/ml及（212.6±22.4）pg/ml，细胞增殖及Ⅲ型胶原蛋白含量分别显著下降为（72.5±3.4）%及（0.06±0.01）μg/L（均P＜0.05）；与实验组比较，治疗组caspase-1活性及IL-1β、IL-18含量分别显著下降为（292.1±28.5）%、（167.5±11.8）pg/ml及（165.5±19.9）pg/ml，细胞增殖及Ⅲ型胶原蛋白含量分别显著增加为（86.8±5.5）%及（0.10±0.02）μg/L（均P＜0.05）；与实验组比较，抑制剂组caspase-1活性及IL-1β、IL-18含量分别显著下降为（185.5±16.1）%、（127.4±16.5）pg/ml及（129.5±17.2）pg/ml，细胞增殖及Ⅲ型胶原蛋白含量分别显著增加为（83.1±7.7）%及（0.09±0.01）μg/L（均P＜0.05）。结论抑制LPS诱导的成纤维细胞焦亡可以促进其增殖并分泌胶原蛋白，虎杖苷可能通过抑制成纤维细胞焦亡促进创面愈合。

简介：摘要目的探讨LINC00472对脂多糖(LPS)诱导的血管内皮细胞氧化损伤的影响及其机制。方法LPS诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)建立血管内皮细胞氧化损伤模型，将si-NC、si-LINC00472、微小RNA(miR)-NC、miR-496 mimics、si-LINC00472与anti-miR-NC(共转染)、si-LINC00472与anti-miR-496分别转染至HUVECs；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LINC00472和miR-496表达；检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量；流式细胞仪检测细胞凋亡率；双荧光素酶报告实验检测LINC00472与miR-496的靶向关系；蛋白质印迹法检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(cleaved-Caspase-9)蛋白表达。两组间比较行t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果LPS组HUVECs中LINC00472的表达量高于Con组(2.77±0.25比0.93±0.02)，miR-496的表达低于Con组(0.35±0.03比0.91±0.03)，差异有统计学意义(t＝21.231、64.789，P<0.05)。LPS+si-LINC00472组LDH的活性和MDA表达低于LPS+si-NC组[LDH活性(212.58±17.33) U/L比(662.85±29.17) U/L、MDA(3.93±0.32) nmol/mg比(13.42±1.26) nmol/mg]，SOD活性高于LPS+si-NC组[(58.31±5.76) U/mg比(17.87±1.65) U/mg]，差异有统计学意义(t＝52.399、42.608，P<0.05)。LPS+si-LINC00472组细胞凋亡率、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9蛋白表达低于LPS+si-NC组[(9.86±0.85)%比(26.49±2.17)%、0.31±0.03比0.67±0.06、0.21±0.02比0.58±0.05]，差异有统计学意义(t＝41.245、35.291、19.738，P<0.05)。LPS+miR-496组细胞LDH活性、MDA水平、细胞凋亡率、cleaved-Caspase-3和cleaved-Caspase-9蛋白表达低于LPS+miR-NC组[(254.91±21.97) U/L比(651.05±26.25) U/L、(5.64±0.47) nmol/mg比(14.17±1.05) nmol/mg、(12.92±1.13)%比(25.18±2.16)%、0.37±0.03比0.68±0.05、0.29±0.02比0.57±0.03]，SOD活性高于LPS+miR-NC组(49.01±4.12比18.02±1.53)，差异有统计学意义(t＝34.718、22.245、21.154、15.088、15.949、23.297，P<0.05)。LPS+si-LINC00472+anti-miR-496组细胞LDH活性、MDA水平、细胞凋亡率、cleaved-Caspase-3和cleaved-Caspase-9蛋白表达高于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组[(594.06±27.59) U/L比(206.34±21.91) U/L、(9.48±0.77) nmol/mg比(3.88±0.25) nmol/mg、(19.64±1.18)%比(9.34±0.71)%、0.57±0.04比0.29±0.03、0.47±0.04比0.20±0.02]，SOD活性低于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组(27.52±2.53比56.58±5.44)，差异有统计学意义(t＝33.015、20.752、14.531、22.438、16.800、18.112，P<0.05)。结论LINC00472可通过促进miR-496表达来抑制氧化应激及细胞凋亡，并减轻LPS诱导的血管内皮细胞氧化损伤。

简介：摘要目的探讨虎杖苷对脂多糖（LPS）诱导的皮肤成纤维细胞凋亡、氧化应激及炎性反应的保护作用。方法2021年1月至4月，以5 mg/L LPS刺激成纤维细胞建立实验模型，并随机分为4组：正常对照组细胞不接受任何处理；药物对照组细胞接受50 μmol/L虎杖苷处理；实验组细胞接受5 mg/L LPS处理；治疗组细胞接受5 mg/L LPS及50 μmol/L虎杖苷处理。细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活力；末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法［terminal dexynucleotidyl transferase（TdT）-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL］检测细胞凋亡；试剂盒检测细胞丙二醛（malonaldehyde，MDA）及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）含量；酶联免疫吸附剂测定（ELISA）检测培养基肿瘤坏死因子（TNF）-α及白介素（IL）-6含量。结果与正常对照组比较，实验组细胞凋亡率、MDA含量、培养基TNF-α及IL-6含量分别显著增加为（12.70±0.11）%、（3.38±0.29）nmol/（mg·pr）、（483.5±38.4）ng/L及（784.4±49.6）ng/L，细胞活力及SOD含量分别显著下降为（78.00±5.90）%及（11.5±1.3）U/（mg·pr）。与实验组比较，治疗组细胞凋亡率、MDA含量、培养基TNF-α及IL-6含量分别显著下降为（7.50±0.08）%、（2.18±0.19）nmol/（mg·pr）、（283.6±25.3）ng/L及（518.5±42.2）ng/L，细胞活力及SOD含量分别显著增加为（89.00±7.50）%及（19.1±2.2）U/（mg·pr）。结论虎杖苷显著抑制LPS诱导的成纤维细胞凋亡、氧化应激及炎性反应，并促进细胞增殖。

简介：摘要目的通过脂多糖刺激小鼠以及人单核细胞THP-1诱导的急性炎症模型，探索罗汉果醇促进AMPK磷酸化后靶向调控炎症通路的作用以及相关机制，为罗汉果醇（MO）能否对急性肺损伤的临床治疗中得到应用提供研究证据。方法动物实验：取用24只6~8周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠，采用随机（随机数字法）法将小鼠分为对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组，每组各分配6只。对照组小鼠腹腔注射生理盐水（30 mL/kg）,MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg),脂多糖组小鼠腹腔注射脂多糖（10 mg/kg），脂多糖+MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg)，30 min后另一侧腹腔注射脂多糖（10 mg/kg）。经过12 h后，处死小鼠取材，并进行病理学、分子生物学检测。细胞实验：取用状态良好的THP-1细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中培养24 h后，用100 ng/mL PMA诱导分化成巨噬细胞，设置对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组。药物刺激结束后收集各组细胞悬液，所得细胞及培养基上清液用于后续检测。结果与对照组相比，脂多糖组的损伤程度明显，组织切片的H&E染色结果中可见肺泡腔结构破坏，炎症细胞浸润增多，且有出血以及肺泡腔间隔明显增厚；在加入MO干预下，小鼠肺组织的损伤程度大幅度改善，MPO、肺湿/干重比等也有了显著的降低。肺组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平也同样在MO的干预下显著下调[(2.96±0.10) vs. (5.53±0.14)，(8.62±0.17) vs. (12.31±0.09)，(3.01±0.09) vs.(4.85±0.36)]。在脂多糖组小鼠肺组织中炎性小体的主要成分蛋白NLRP3、caspase-1 p20、GSDMD-N、ASC表达量显著高于对照组,而脂多糖+MO组中AMPK磷酸化水平提高，焦亡相关蛋白的表达均得到有效地抑制[(0.58±0.09) vs.(0.89±0.15)、(0.19±0.08) vs. (0.93±0.16)、(0.65±0.09) vs. (0.86±0.14)、(0.30±0.12) vs. (0.47±0.10)，均P<0.05]；同时通过ELISA法测得在组织中焦亡的主要标志物炎症因子IL-1β、IL-18的分泌同样可以被MO缓解。而细胞实验中MO同样促进了AMPK的磷酸化，抑制NLRP3炎症小体相关成分蛋白表达，同时明显提高了细胞活力。结论MO通过促进AMPK的磷酸化抑制NLRP3介导的细胞焦亡，进而缓解脂多糖诱导的急性肺损伤。

简介：摘要目的探索脂多糖（LPS）对大鼠心脏微血管内皮细胞（rCMECs）转录组的调节作用。方法对照组（正常培养rCMECs），LPS组（100 ng/mL LPS处理6 h的rCMECs），每组进行3个生物学重复转录组测序。得到差异基因后，使用实时定量PCR对部分差异基因mRNA的表达进行验证。分别对上调和下调基因进行GO和KEGG富集，并对差异基因进行共表达网络分析。采用独立t检验进行统计学分析。结果LPS处理后，265个基因表达上调，118个基因的表达下调。前10个最显著上调基因为：Mt2a、Cyp7b1、Sod2、Icam1、Ccl2、AC128848.1、Mt1、Cebpd、Serpinb2和Tnfrsf11b。前10个最显著下调基因为：Cavin2、Ankrd1、Edn1、Prss35、Lmod1、Dhrs3、Ttc22、Sema6a、Map2k3和Sema7a。定量PCR的结果表明Mt2a、Sod、Ccl2、Cxcl1、Icam1和Vcaml基因的表达得到了上调（P均< 0.01）；而Cavin2、Ankrd1、Edn1和Prss35基因表达下调（P均< 0.05）。GO和KEGG富集的结果表明，上调基因与内皮细胞对炎性免疫细胞的趋化作用和黏附作用密切相关；而下调基因则是与钙离子信号和G蛋白相关通路以及内皮通透性增加有关。此外，差异基因进行共表达网络分析发现Sod2处于核心位置，提示其可能与LPS诱导的rCMECs的各种变化密切相关。结论LPS调控了rCMECs中大量与炎性免疫细胞进入心肌组织相关基因的表达。

简介：摘要目的探讨瓜氨酸（citrulline, Cit）对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）导致的小鼠急性肺损伤（acute lung injury, ALI）是否具有保护作用。方法42只7~9周的C57雄性小鼠，进行2批实验，每批小鼠按完全随机分组法分为3组（每组7只）：正常对照组（Con组）、LPS组和LPS+Cit组。首先对小鼠腹腔注射Cit 900 mg·kg−1·d−1（LPS+Cit组）或等容量生理盐水（Con组、LPS组）进行预处理7 d，第8天腹腔注射LPS 10 mg/kg（LPS组、LPS+Cit组）或等容量生理盐水（Con组），LPS干预后6 h麻醉插管检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid, BALF）中蛋白浓度和细胞数量，测定肺组织湿/干重比（wet/dry weight ratio, W/D），观察肺组织病理改变，Western blot法检测肺组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NOD-like receptor pyrin domain containing 3, NLRP3）炎性体、半胱氨酸蛋白酶-1（cysteine aspartate-specific protease-1, caspase-1）蛋白水平，ELISA法检测肺组织中IL-1β、IL-18水平。结果与Con组比较，LPS组BALF中蛋白浓度、细胞数量及肺组织W/D明显升高（P<0.05），NLRP3、caspase-1蛋白水平及IL-1β、IL-18蛋白含量明显升高（P<0.05）；与LPS组比较，LPS+Cit组BALF中蛋白浓度、细胞数量及肺组织W/D明显降低（P<0.05），NLRP3、caspase-1蛋白水平及IL-1β、IL-18蛋白含量明显降低（P<0.05）。结论Cit可能通过抑制NLRP3炎性体激活，降低炎症因子释放，从而发挥对肺损伤的保护作用。