简介：PCR-DGGE技术已经发展成为研究微生物的群落结构和遗传多样性的有效工具。在世界水产养殖业的养殖系统微生态学、肠道细菌微生态学和益生菌研究中都取得了一系列的应用成果，而在我国冷水鱼的研究中应用还较少。本文介绍了PCR-DGGE技术的特性及其在世界水产养殖业研究中的应用，分析了其在我国冷水鱼微生态学研究中的应用前景。

简介：

简介：摘要：目的：分析PCR和血清学检测在当前儿童EB病毒感染诊断中的价值。方法:本次研究于2018年9月开始，于2020年9月结束，以在研究时间内本院接收的疑似EB病毒感染患者共80例作为研究对象展开研究。为了更好的提升研究内容的准确性，本次研究将80例患儿进行年龄分组，分组依据为患儿的年龄，依次分别为婴儿组、幼儿组、学龄前组和学龄组。并分别采用荧光定量PCR法和血清学检测对患者进行检测。在这一基础上根据结果再次将患儿进行分组，分别为原发感染组、再激活组和既往感染组，将不同年龄和不同的感染组之间EBV血清学和PCR法之间差异进行对比。结果：经对比可以发现,全血阳性率明显高于血浆EBV-DNA，差异符合统计学意义的评判标准（P＜0.05）；且婴儿组的血清学阳性率更低（P＜0.05）；婴儿组、幼儿组和学龄前组的全血DNA阳性率明显高于血清学（P＜0.05）。结论：PCR和血清学在对EBV检测的过程中所得出的最终阳性感染几率和意义有一定的差异，在当前的临床EBV检测过程中需要充分将两种方式进行结合。

简介：摘要目的建立并评价一种基于COYOTE® Flash20实时荧光定量PCR仪用于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸快速检测的方法。方法通过使用靶向SARS-CoV-2 ORF1ab和N基因的特异性引物探针组构建快速反应体系，并验证体系的灵敏度和特异性。同时，使用108例新型冠状病毒肺炎(COVID-19)临床样本对该方法进行应用评估。结果该检测方法无需核酸提取、手动操作时间仅用1 min，样本进、结果出，可以在30 min完成检测。该方法最低检测限为4×102拷贝/ml；与其他人类冠状病毒(包括HCoV-229E、HCoV-NL63、HCoV-OC43、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV)以及其他引起呼吸系统疾病的病毒无交叉反应。临床样本应用评估显示，与常规需要核酸提取的RT-qPCR的总符合率为98.15%。结论通过对SARS-CoV-2快速荧光定量PCR方法的应用评价发现，该方法操作简便、快速、特异、灵敏，适用于多种场景即时快速检测需求。

简介：摘要目的建立同时检测疱疹病毒(human herpesvirus, HHV)-6A、B和核糖核酸酶P/MRP 30 kDa亚基(RPP30)的三重芯片式数字PCR(chip digital PCR，cdPCR)方法确定HHV-6A与HHV-6B感染的病毒载量，及高病毒载量的HHV-6是否由病毒整合到染色体导致。方法根据已建立的HHV-6A、HHV-6B实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, RT-qPCR)方法，建立HHV-6三重cdPCR方法。分别使用HHV-6A、HHV-6B病毒培养物进行敏感性检测，并与其他疱疹病毒进行特异性检测。随后，使用127份全血样本进行三重cdPCR方法验证。结果HHV-6 cdPCR与RT-qPCR方法检测结果的相关性良好(R2>0.97)，且与其他疱疹病毒无交叉反应。对经RT-qPCR与cdPCR检测均为阳性的14份样本，经三重cdPCR方法检测，得到HHV-6A和HHV-6B的最低检测病毒载量分别为50拷贝/ml和105拷贝/ml。并且14份样本中HHV-6病毒载量与(RPP30拷贝数/2)的比值均小于1。结论建立的三重cdPCR具有较好的敏感性和特异性，且HHV-6三重cdPCR方法可以定量检测HHV-6A、HHV-6B的病毒载量以及RPP30的拷贝数。通过检测样本中HHV-6病毒载量与(RPP30拷贝数/2)的比值，可以确定高病毒载量的HHV-6是否存在染色体整合。

简介：摘要本文介绍了PCR实验室的工艺平面布局、空调通风系统设计等内容，并结合实际案例对PCR实验室暖通空调设计过程中的压力控制问题进行探讨，为PCR实验室的设计提供参考。

简介：摘要目的对荧光定量PCR技术检测结核杆菌复合体的临床应用进行研究和探讨。方法选取在喀什地区结核病防治所（喀什地区结核病医院）进行治疗的200例呼吸系统疾病的患者，其中肺结核患者119例作为试验组，非结核病患者81例作为对照组，应用荧光定量PCR法、痰涂片法、培养法检测结核分枝杆菌。结果在本实验中，对200份标本进行检测，其中，荧光定量PCR法＞培养法＞涂片法，差异显著（P＜0.05）。在灵敏度检测中，荧光定量PCR法显阳性高于培养法和涂片法，差异显著（P＜0.05）。结论荧光定量PCR技术检测结核杆菌具有较好的效果，灵敏度较好，特异性较高。

简介：在利用ISSR技术分析齿裂菌属和皮下盘菌属遗传多样性的研究中，为获得条带清晰、重复性好的ISSR扩增结果，对影响ISSR—PCR的条件进行了筛选，确定了此类菌物ISSR—PCR反应的最适宜条件：在15μLPCR反应体系中，10倍Taq酶缓冲液1．5μL，DNA模板8ng／μL，MgCl22．5mmol／L，dNTP0．15mmol／L，引物浓度0．4μmol／L，Taq酶1．00U，ddH2O9．0μL。最佳退火温度因不同的引物而定，最佳循环次数为35次。

简介：摘要目的利用多重荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析急性下呼吸道感染患儿4种病毒：人腺病毒(HADV)、人博卡病毒(HBoV)、人偏肺病毒(HMPV)、人呼吸道合胞病毒(HRSV)的感染情况。方法收集1 045例急性呼吸道感染的住院患儿鼻咽深部分泌物标本，采用多重荧光RT-PCR进行呼吸道病毒4项指标检测，就病毒分布情况、季节因素等方面进行临床流行病学特点分析。结果1 045例患儿中有281例4种呼吸道病毒阳性，总阳性率为26.89%；其中单一病毒感染194例(69.04%)、混合病毒感染87例(30.96%)，HMPV感染最多，为120例(42.70%)、其次为HRSV感染119例(42.35%)；在各年龄组中≤3岁组阳性229例(36.06%)，4～7岁组阳性114例(42.22%)，≥8岁组阳性63例(45.00%)。从季节分布来看，春、夏、秋、冬四季的检出率分别为25.68%、28.24%、49.34%、65.57%。结论多重荧光RT-PCR法能快速检测乌鲁木齐地区儿童急性呼吸道病毒，呼吸道病毒感染主要为HMPV和HRSV感染；呼吸道病毒患儿感染率最高年龄段为≥8岁；以秋季和冬季为呼吸道病毒感染高发期。

简介：以感染病毒病的辣椒叶片为材料，分别用改进的Trizol试剂提取法、异硫氰酸胍提取法、改进的酚一SDS提取法提取总RNA，经过RT—PCR，利用CMV和TMV的病毒外壳蛋白设计特异引物检测。结果表明：改进的Trizol试剂提取法能获得较高质量和产量的总RNA，可以单人大批次提取，并在辣椒病毒病检测中能稳定而准确地进行规模化RT—PCR检测。

简介：目的了解2005--2006年度我院中枢神经系统感染患儿脑脊液病原菌谱、血清型及耐药特点。方法脑脊液细菌鉴定采用细菌培养及实时定量PCR方法。肺炎链球菌血清分型采用荚膜肿胀试验，流感嗜血杆菌及脑膜炎奈瑟菌血清分型采用乳胶凝集法。抗菌药物敏感性试验采用K—B法及E试验。结果入组的新生儿患者28例，脑脊液细菌检测总阳性率39．3％，大肠埃希菌6例，占21．4％，居首位，其中4例ESBL阳性。其次是肺炎链球菌，占7．1％（2例）。未检测到脑膜炎奈瑟菌。1个月至11岁年龄组90例．细菌检测总阳性率33．3％，第1位是肺炎链球菌，占16．7％（15例），其中5例培养阳性，菌株血清型为19F型，2例对青霉素中介。其次是脑膜炎奈瑟菌，占5．6％（5例），3例培养阳性，2例为A群，1例为C群。结论2005--2006年，我院收治的不同年龄组脑膜炎患儿病原菌分布有所不同，新生儿患儿病原菌主要是大肠埃希菌，其次是肺炎链球菌。其他年龄组患小儿以肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌为主要病原菌。部分菌株已高度耐药。采用实时定量PCR方法可提高肺炎链球菌及脑膜炎奈瑟菌检测的阳性率。

简介：目的应用多重聚合酶链反应（PCR）法在肠杆菌科细菌中检测blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因。方法收集2004年10月-2005年7月湖南地区中南大学3所附属医院临床标本分离的多重耐药肠杆菌科细菌171株，以美国临床实验室标准化研究所（CLSI）规定的方法进行超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）表型确证试验，多重PCR进-步进行blaTEM、blaSHV、blaOXA-1三种耐药基因的检测。结果171株多重耐药的肠杆菌科细菌中，142株（83．04％）ESBLs表型检测阳性，经多重PCR扩增，105株获得阳性结果。根据扩增片段大小判断：检出携带blaTEM菌株85株，携带blaSHV菌株26株，携带blaOXA-1菌株10株，其中15株菌同时携带多种耐药基因。结论多重PCR可以快速、准确地检测出ESBLs表型阳性肠杆菌科细菌是否携带blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因。

简介：摘要目的探讨数字PCR方法检测肺癌患者中血浆游离DNA中T790M突变的效果。方法收集40例经穿刺活检证实存在T790M突变的晚期肺腺癌耐药患者和20例正常人的外周血标本并提取血浆游离DNA，分别采用ARMS法和数字PCR法检测血浆游离DNA中的T790M突变情况。结果40例患者标本中数字PCR法检测到32例T790M突变阳性，ARMS发检测到27例T790M突变阳性。20例正常人标本中数字PCR和ARMS法均未检测到T790M突变。结论数字PCR法可以作为一种新的检测血浆游离DNA中T790M突变的方法。

简介：摘要目的探讨在阴道细菌检验中应用PCR检验法与细菌培养法的临床效果。方法选取92例在我院接受细菌检验的患者，就诊时间为2016年3月至2017年3月期间，符合阴道炎相关诊断标准，患者均进行PCR法和细菌培养法检测，观察检测结果。结果在本次阴道细菌检验中，PCR检验法的阳性率明显高于细菌培养法（P<0.05）；同时PCR检验法对加特纳菌和棒状杆菌的检验准确性较细菌培养法显著要高（P<0.05）。结论PCR检验法相比于细菌培养法，用于阴道细菌检验中的临床效果更好，具有临床推广价值。

简介：摘要目的探讨TP-ELISA联合PCR法在梅毒血清学检验上的检测应用效果。方法选取我院2012年1月~2014年1月收治的梅毒患者共92例采集患者样本，采用TP-ELISA、PCR以及TRUST，3种方法进行梅毒血清鉴定，对比三种方法的鉴定准确率及特异性。结果TP-ELISA、PCR以及TRUST，这三种检测方法对梅毒血清进行检验之后，其中PCR的检测准确率最高，TP-ELISA次之，TRUST准确率最低；在特异性检测方面PCR与TP-ELISA的检测特异性均为100%，TRUST的特异性最低。三组结果差异明显，具有统计学意义（P＜0.05）。结论临床上在进行梅毒血清学的检测时，可以采用TP-ELISA联合PCR法进行梅毒血清的检测，能够显著提升检测准确率及特异性，获得了非常理想的检测效果，值得在临床上大力推广。

简介：目的：对比分析酶联免疫吸附试验（ELISA）法和实时荧光定量PCR（RT-PCR）法在麻疹病毒检测中的应用。方法：由本市各医院采集并送至本中心接受麻疹病毒检测的50例疑似麻疹患者为研究对象，所有患者标本均采用ELISA法和RT-PCR法进行麻疹病毒检测。对比两种检测方式在不同出疹时间段所取标本的阳性率、检测水平。结果：在50例疑似麻疹患者中，ELISA法检测麻疹病毒IgM抗体阳性22例，IgM抗体阴性28例，阳性率为44.00%；RT-PCR法检测，麻疹病毒IgM抗体阳性26例，IgM抗体阴性24例，阳性率为52.00%，两种检测方式阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。患者出疹第1天收集的标本，采用ELISA法检测阳性率为60.00%，采用RT-PCR法检测阳性率为80.00%。随着患者采样时间不断改变，两种检测方式的阳性率均逐渐降低，两种方法检测的阳性率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。50例麻疹疑似患者同一时间段采集血清和咽拭子标本，24例患有免疫史，不伴随有免疫史亦或者是不详的共26例。结论：RT-PCR法适用于出疹时间在2d之内疑似麻疹患者的临床诊断中，而ELISA法则适合使用在出疹时间在2d或以上疑似麻疹患者的临床检测中。

简介：摘要：目的：对实时荧光定量PCR在痰标本中结核分枝杆菌检测中的应用价值进行分析。方法：本次实验对象为结核患者，实验时间集中在2018年9月-2020年9月，共计90例患者参与本次实验中来。本次实验分组依据为结核分枝杆菌检测手段，依据不同检测方法将所选患者分为甲组、乙组及丙组。甲组患者实施实时荧光定量PCR检测，乙组患者实施抗酸染色检测，丙组患者实施改良罗氏培养法检测，对三组患者检验结果进行分析及对比。结果：对本次实验进行系统的分析，甲组患者中共计16例患者检测结果为阳性，乙组患者中共计8例患者检测结果为阳性，丙组患者中共计10例患者检测结果为阳性，分别占总人数比重的53.33%、26.67%及33.33%，三组相关数据之间差异凸显，（p＜0.05）。结论：相比抗酸染色检测及改良罗氏培养法检测，实时荧光定量PCR检测在痰标本中结核分枝杆菌检测中的应用效果更加突出，其能够在一定程度上提高检测结果的准确性，而且具有操作简单、等待时间较短等优势，为疾病预防控制中心工作人员开展工作提供了极大的便利。

简介：<正>对1025份临床血清标本用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的方法进行HBVDNA定量检测,并同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行乙肝免疫学指标的对比检测。结果:HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)模式HBVDNA阳性率为99.2％(390/393),其平均拷贝数为4.65×10E8拷贝/ml:在HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式中HBVDNA阳性率为62.5％

简介：

简介：TA克隆构建含MOC1基因cDNA片段的重组质粒，作为TaqMan定量检测水稻分蘖基因MOC1mRNA的标准品，建立了检测方法。采用RT—PCR。的方法，从水稻分蘖芽总RNA中逆转录扩增总cDNA，PCR扩增MOC1基因中设计的目的片段，将纯化的目的片段与pMD19-TSimple载体连接，转化宿主菌JM-109，提取重组质粒DNA，PCR鉴定并测序分析。纯化质粒并检测260nm吸光值，确定重组质粒原液的拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品。对重组质粒进行实时荧光定量PCR实验。建立了MOC1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法，特异性好，检测灵敏度达10^2拷贝，线性范围为10^2-10^7拷贝，阈值循环数与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系（r=0．999），扩增效率高（E=92．8％）。成功建立了MOCI基因实时荧光PCR定量标准品，且TaqMan荧光定量RT—PCR的方法可对水稻分蘖基因MOC1mRNA的表达进行准确定量。