简介:鉴定合成的或通过高通量随机组合方法获得的潜在功能片段的生物学功能需要一套高效便捷的酵母表达专用载体。酵母表达载体pYES2多克隆位点处不含起始密码子,通过设计含有ATG和EcoRⅠ酶切位点的特异性引物扩增一段Intron,利用In-Fusion重组技术(Clontech)将该片段构建至酵母表达载体pYES2,得到一个含有ATG的重组酵母表达载体pYES2-ATG。为了检测该载体的功能,扩增不含起始密码子的DNA序列nlea,该序列由本实验室设计合成,具有潜在的耐盐功能。构建重组表达载体pYES2-ATG-nlea在酵母中进行功能鉴定。研究结果表明,半乳糖诱导后,含pYES2-ATG-nlea的重组酵母菌株耐盐能力明显高于含pYES2-ATG空质粒的菌株,表明在该载体系统上的添加了起始密码子的nlea成功表达,具有一定的耐盐性,同时也证明改造的载体系统可用于没有起始密码子的编码区序列的功能筛选和鉴定。pYES2-ATG酵母载体系统不影响原始载体基本功能元件的表达,同时能使不含起始密码子编码区序列在酵母中正常表达,在大规模进行多个基因的功能鉴定中具有重要的应用价值。
简介:【摘要】目的:探讨抗酿酒酵母抗体(anti-Saccharomyces cerevisiae antibody ASCA)在复发性阿弗他溃疡(recurrent aphthous ulcer,RAU)诊断中的意义。方法:收集2018年度来我院就诊患者,选取60名(男28,女32)确诊复发性阿弗他溃疡的患者和同期来我院体检的60名(男性30名,女性30名)同龄的健康人为研究对象,采用欧蒙医学诊断有限公司的ASCA-IgA、ASCA-IgG酶联免疫试剂盒分别检测,分析数据。结果:实验组ASCA-IgA阳性患者24人,阳性率38.33%;ASCA-IgG阳性患者21人,阳性率35%;双抗体联合阳性患者31人,阳性率51.7%。对照组阳性患者7人,阳性率为11.67%。结论:抗酿酒酵母抗体对复发性阿弗他溃疡的诊断具有显著临床意义。