简介：摘要目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征（ALI/ARDS）中的作用及可能的发病机制。方法①体内实验：将24只SPF级野生C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组、ALI/ARDS模型组、丙酮酸乙酯（EP）治疗组和EP对照组，每组6只。采用腹腔注射20 mg/kg LPS制备ALI/ARDS模型，正常对照组和EP对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水；之后EP治疗组和EP对照组小鼠分别腹腔注射40 mg/kg HMGB1抑制剂EP。6 h后处死小鼠取肺组织，采用免疫荧光技术检测小鼠肺组织硫酸乙酰肝素（HS）、多配体蛋白聚糖-1（SDC-1）、乙酰肝素酶（HPA）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达。取小鼠眼眶血，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清HMGB1含量。②体外实验：将人脐静脉内皮细胞（HUVECs）随机分为正常对照组、HUVECs损伤组（1 mg/L LPS处理6 h）、HMGB1组（1 μmol/L重组HMGB1处理6 h）、HMGB1+EP组（重组HMGB1处理1 h后加入1 μmol/L EP处理6 h）、LPS+EP组（LPS处理1 h后加入1 μmol/L EP处理6 h）和EP组（1 μmol/L EP处理6 h）。采用免疫荧光技术检测内皮细胞HS、SDC-1、HPA和MMP-9的表达。结果①体内实验：光镜下显示，LPS制模后肺泡间隔增厚，肺泡间隙有大量炎症细胞浸润。与ALI/ARDS模型组相比，EP治疗组小鼠肺组织HS和SDC-1表达量均明显升高〔HS（荧光强度）：0.80±0.20比0.53±0.02，SDC-1（荧光强度）：0.72±0.02比0.51±0.01，均P<0.05〕，HPA和MMP-9表达量均明显降低〔HPA（荧光强度）：2.36±0.05比3.00±0.04，MMP-9（荧光强度）：2.55±0.13比3.26±0.05，均P<0.05〕；EP对照组上述指标表达量均无明显变化。与ALI/ARDS模型组相比，EP治疗组血清HMGB1含量明显降低（μg/L：131.88±16.67比341.13±22.47，P<0.05）；EP对照组无明显变化。②体外实验：与HMGB1组相比，HMGB1+EP组内皮细胞HS和SDC-1表达量均明显升高〔HS（荧光强度）：0.83±0.07比0.56±0.03，SDC-1（荧光强度）：0.80±0.01比0.61±0.01，均P<0.05〕，HPA和MMP-9表达量均明显降低〔HPA（荧光强度）：1.30±0.02比2.29±0.05，MMP-9（荧光强度）：1.55±0.04比2.50±0.06，均P<0.05〕；EP组HS、SDC-1、HPA和MMP-9表达量均无明显变化。结论HMGB1参与LPS所致内皮细胞多糖包被的损伤，导致肺通透性增加，抑制HMGB1可减轻肺损伤。

简介：摘要目的探究在脂多糖（lipopolysaccharide ，LPS ）诱导的大鼠膀胱炎中核因子-κB (nuclear factor kappa B ，NF-κB）信号通路的激活对膀胱中胶原蛋白分泌的影响。方法选用体重200~230 g的健康雌性SD大鼠48只，按数字随机法随机分为空白对照组（A组）、假手术组（B组）、LPS灌注2周组（C组）、LPS灌注4周组（D组）、抑制剂对照组（E组）和抑制剂组（F组），每组8只。用LPS对C、D、E、F组大鼠进行反复灌注诱导大鼠膀胱炎的发生，用二硫代氨基甲酸吡咯烷（pyrrolidin-edithiocarbamic acid ，PDTC）作为NF-κB抑制剂。所有大鼠处死前均进行6 h内的排尿次数记录。对膀胱标本进行HE染色评估膀胱的炎症情况，再通过免疫组化染色检测膀胱组织中NF-κB p65、磷酸化p65、Col1和Col3A1蛋白的含量表达。结果LPS灌注组大鼠膀胱的HE染色结果显示黏膜下层水肿、黏膜上皮增生、糜烂，炎症细胞浸润明显。LPS灌注组中膀胱上皮中Col1和Col3A1蛋白的表达均较对照组升高，差异有统计学意义（P<0.05）。NF-κB p65及磷酸化p65在LPS灌注组中的表达也均较空白对照组及pH7.4磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline，PBS）灌注组升高，差异有统计学意义（P<0.05 ）。在抑制剂组中，大鼠膀胱中NF-κB p65的活化受到了抑制；同时，大鼠膀胱的炎症浸润及尿频症状均比对照组有所改善；而在胶原蛋白表达方面，抑制剂组膀胱上皮中Col1蛋白的含量比对照组降低，差异有统计学意义（P<0.05），Col3A1蛋白的含量未见降低，差异无统计学意义（P> 0.05）。结论NF-κB信号通路为大鼠膀胱炎症刺激膀胱胶原沉积过程中的重要信号通路，该通路的激活可能是纤维化过程的重要因素；而PDTC作为一种NF-κB抑制剂，不仅能有效改善大鼠的膀胱炎症情况及尿频症状，还能一定程度上抑制膀胱上皮细胞的胶原蛋白的合成分泌，延缓纤维化进程。

简介：摘要目的探讨双环醇对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肾损伤(AKI)的肾保护作用及其相关机制。方法选择2018年5月至2018年6月自武汉大学动物实验中心购买的雄性SD大鼠48只，随机分为五组：对照组(12只)、LPS诱导组(LPS组，12只)和三个双环预处理组(LPS+双环醇组，24只)，其中低剂量组(LPS+BL组)、中剂量组(LPS+BM组)、高剂量组(LPS+BH组)各8只。在LPS+双环醇组中，大鼠连续3 d接受3种不同剂量的双环醇灌胃。在最后一次给药后3 h，LPS组和LPS+双环醇组接受腹腔注射LPS诱导AKI模型。采用血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、组织学检查评估肾损伤。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平。行TUNEL染色评估肾细胞凋亡，采用Western blot法测定Bax、Bcl-2、Caspase-3、TLR4、NF-κB/p65和p-IκBα蛋白的表达。结果与LPS组比较，双环醇预处理各组的BUN和Scr水平均显著降低(均P<0.01)；与LPS组比较，双环醇预处理各组的血清TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平均降低(均P<0.05)，IL-10表达水平显著升高(P<0.001)；与LPS组比较，双环醇预处理各组的肾损伤评分均明显降低(均P<0.05)。与LPS组比较，双环醇预处理各组的凋亡细胞数量均明显减少(均P<0.05)。与LPS组比较，双环醇预处理各组的Bax和裂解Caspase-3的蛋白表达水平均明显降低(均P<0.05)；与LPS组比较，双环醇预处理各组的TLR4、核NF-κB/p65和p-IκBα蛋白表达水平均明显降低(均P<0.05)。结论双环醇对LPS诱导的AKI具有肾保护作用，其相关机制与通过TLR4/NF-κB信号通路调节炎性细胞因子的产生和Bax/Bcl-2依赖的凋亡级联有关。

简介：摘要目的探讨中性粒细胞颗粒蛋白（NGP）对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞生成一氧化氮（NO）的影响及其调控机制。方法体外培养NGP高表达小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞（NGP/RAW）、阴性对照空载体RAW264.7细胞（NC/RAW）、NGP敲除RAW264.7细胞（NGP KO/RAW）和野生型RAW264.7细胞（WT/RAW），取对数生长期细胞分别给予10 mg/L的LPS（LPS组）或磷酸盐缓冲液（PBS组）进行刺激。用Griess方法检测上清中NO含量；用定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的mRNA表达；用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测iNOS蛋白及磷酸化转录激活因子1（p-STAT1）蛋白表达。结果与PBS组相比，在LPS刺激后各时间点，4组细胞中iNOS mRNA表达和NO产生量均明显增加，iNOS mRNA表达于LPS刺激后12 h达峰值（2-ΔΔCt：NC/RAW细胞为38.45±1.34比1.00±0.00，NGP/RAW细胞为56.24±2.41比1.45±0.30，WT/RAW细胞为37.84±1.52比1.00±0.00，NGP KO/RAW细胞为5.47±0.62比0.98±0.40，均P<0.05），NO产生量于LPS刺激后24 h达峰值（μmol/L：NC/RAW细胞为24.15±1.26比0.15±0.04，NGP/RAW细胞为58.80±2.11比0.18±0.02，WT/RAW细胞为25.04±1.80比0.16±0.02，NGP KO/RAW细胞为2.42±0.38比0.12±0.03，均P<0.05）。给予LPS刺激后，NGP/RAW细胞内iNOS mRNA表达和NO生成量较NC/RAW细胞明显增加〔iNOS mRNA（2-ΔΔCt）：2 h为8.42±0.59比4.63±0.37，6 h为27.16±1.60比14.25±1.02，12 h为56.24±2.41比38.45±1.34；NO（μmol/L）：6 h为4.12±0.25比2.23±0.17，12 h为16.50±1.52比6.35±0.39，24 h为58.80±2.11比24.15±1.26，均P<0.05〕；同时，p-STAT1和iNOS蛋白表达明显增强（p-STAT1/GAPDH：0 h为4.26±1.84比1.00±0.32，2 h为20.59±4.97比0.93±0.21，6 h为141.99±10.99比11.17±2.11；iNOS/GAPDH：0 h为1.27±0.86比1.00±0.22，2 h为7.94±1.94比2.01±0.92，6 h为24.24±4.88比3.72±1.11，均P<0.05），说明NGP可以通过促进转录激活因子1（STAT1）通路磷酸化来增加iNOS表达，进而使NO生成增多。LPS刺激后，NGP KO/RAW细胞内iNOS mRNA表达和NO生成量较WT/RAW细胞明显减少〔iNOS mRNA（2-ΔΔCt）：2 h为2.46±0.31比4.22±0.18，6 h为3.61±0.44比13.02±1.34，12 h为5.47±0.62比37.84±1.52；NO（μmol/L）：6 h为1.22±0.19比2.01±0.12，12 h为1.60±0.44比5.15±0.62，24 h为2.42±0.38比25.04±1.80，均P<0.05〕。说明NGP敲除后iNOS活化减少，进而使NO生成减少。结论NGP可通过激活STAT1/iNOS通路正向调控活化巨噬细胞中NO的生成。

简介：摘要目的探究牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激巨噬细胞后，髓样细胞触发受体-1（triggering receptors expressed on myeloid cells-1，TREM-1）表达与M1、M2型极化的关系，进一步探讨巨噬细胞TREM-1在牙周炎发生发展中的作用机制。方法使用豆蔻酰佛波醇乙酯诱导人单核细胞系THP-1分化为巨噬细胞，予以0（空白对照组）和1 μg/ml 的 Pg-LPS（LPS组）刺激，同期加入终质量浓度为0.1 μg/ml的TREM-1抑制剂LP17（LPS+LP17组）或对照肽（LPS+对照肽组），培养24 h后用实时荧光定量PCR（real-time quantitative-PCR，RT-qPCR）检测TREM-1和巨噬细胞M1、M2型极化标志物（分别为CD86、CD206）及其极化相关细胞因子［分别为肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-10］mRNA表达变化，蛋白质印迹法检测TREM-1、CD86、CD206蛋白含量，酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β及IL-10的表达。结果细胞培养24 h后，LPS组巨噬细胞中TREM-1相对 mRNA表达量（1.40±0.14）及蛋白表达量（3.85±0.24）均较空白对照组（分别为1.01±0.18、1.00±0.05）显著升高（P<0.05），同时M1型极化标志物CD86 mRNA及蛋白表达（分别为1.42±0.01、1.55±0.07）均较空白对照组（分别为1.00±0.09、1.00±0.10）显著上调（P<0.01），且M1型极化相关细胞因子TNF-α、IL-1β mRNA及蛋白表达量均显著增加（P<0.05）；加入TREM-1阻断剂LP17后，与LPS组相比，TREM-1 mRNA及蛋白表达水平差异均无统计学意义（P>0.05），CD86 mRNA（0.96±0.00）和蛋白（1.36±0.02）表达水平均显著下降（P<0.05），TNF-α、IL-1β mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。对于M2型极化标志物CD206及极化相关细胞因子IL-10，细胞培养24 h后，CD206 mRNA（0.56±0.05）及蛋白表达（0.25±0.04）均较空白对照组（分别为1.02±0.25、1.00±0.10）显著下调（P<0.01），IL-10 mRNA较空白对照组表达显著上调（P<0.05），其蛋白表达水平与空白对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）；LPS+LP17组CD206、IL-10 mRNA表达均较LPS组显著下调（P<0.05），CD206、IL-10蛋白表达在两组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论TREM-1及其下游信号通路可能参与了Pg-LPS介导的巨噬细胞M1型极化，从而在牙周炎发生发展中发挥促炎作用；尚无证据表明TREM-1是否参与调控Pg-LPS介导的巨噬细胞M2型极化。

简介：摘要目的探讨人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）对脂多糖（LPS）活化的小胶质细胞功能表型的影响。方法实验设未诱导对照组（加入PBS无LPS诱导的BV-2细胞），LPS诱导组（加入1.0 μg/mL的LPS诱导BV-2细胞向M1型分化），按比例加入不同浓度hUCMSCs进行干预（LPS+低、中、高浓度hUCMSCs干预组hUCMSCs与BV-2细胞比例分别为：1:100、1:10、1:1），分别于24、48、72 h观察BV-2形态变化，Griess法检测细胞培养上清中M1表型产物一氧化氮（NO）的浓度；将hUCMSCs与BV-2细胞在不同条件下（LPS+/LPS-）共培养，qRT-PCR检测BV-2细胞M2表型标记物精氨酸酶1表达变化。数据分析采用重复测量资料的方差分析，组间比较采用Tukey分析。结果BV-2细胞经LPS诱导后活化，细胞变大，呈"煎饼状"、"阿米巴状"变化，呈经典的M1表型分化；与未诱导对照组相比，LPS诱导组48、72 h BV-2细胞NO含量升高[48 h：（0.507±0.012）μg/mL比（5.183±0.171）μg/ mL；72 h：（0.934±0.024）μg/ mL比（12.498±0.168） μg/mL，P均< 0.01]，与LPS诱导组比较，LPS+低、中、高浓度hUCMSCs干预组72 h [（12.498±0.168）μg/mL比（11.852±0.149）μg/ mL、（9.796±0.048）μg/mL、（1.876±0.063） μg/mL]及LPS+中、高浓度hUCMSCs干预组48 h NO含量[（5.183±0.171） μg/ mL比（3.921±0.066）μg/mL、（1.202±0.012）μg/ mL]降低，且呈干预浓度依赖性NO含量下降，差异均有统计学意义（P均< 0.01）。精氨酸酶1 qRT-PCR结果显示：与未诱导组比较，单纯高浓度hUCMSCs干预组3个时间点精氨酸酶1的相对表达量均升高（1.046±0.057比19.266±0.641，1.114±0.093比16.977±0.749，1.139±0.118比16.959±0.625），与LPS诱导对照组（0.000）比较，未诱导对照组（1.046±0.057，1.114±0.093，1.139±0.118）及LPS+高浓度hUCMSCs干预组精氨酸酶1表达（0.879±0.077，1.023±0.081，1.121±0.078）升高，差异具有统计学意义（P均< 0.01）。结论LPS可诱导小胶质细胞BV-2炎症反应，而hUCMSCs可抑制活化小胶质细胞的炎症反应，抵消LPS对BV-2的诱导效应，促进小胶质细胞由促炎的M1型向抗炎的M2型转变。

简介：摘要目的探讨人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cell，HPDLSC）经低剂量脂多糖作用后，对巨噬细胞促炎因子表达的影响及其机制。方法培养原代HPDLSC，并以磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS）、100 μg/L或10 mg/L 脂多糖处理48 h，收集各自条件培养基（conditioned medium，CM），分别与人单核白血病细胞（human monocyte leukemic cell，THP-1）源性巨噬细胞共培养48 h，对应实验分组为PBS处理的HPDLSC条件培养基（PBS-treated HPDLSC-derived CM，CM-C）组、低剂量脂多糖处理的HPDLSC条件培养基（low dose lipopolysaccharide-treated HPDLSC-derived CM，CM-L）组和高剂量脂多糖处理的HPDLSC条件培养基（high dose lipopolysaccharide-treated HPDLSC-derived CM，CM-H）组。实时荧光定量PCR检测各组巨噬细胞促炎因子相关基因白介素（interleukin，IL）-6、IL-8、IL-12、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）mRNA表达；CM-C、CM-L组核因子E2相关因子2 ［nuclear factor （erythroid-derived 2）-like 2，NRF2］及其下游抗氧化基因谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基（glutamate-cysteine ligase catalytic subunit，GCLC）、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（磷酸）：醌氧化还原酶1［NAD（P）H quinone dehydrogenase 1，NQO1］及血红素加氧酶1（heme oxygenase 1，HO-1）mRNA的表达。同时以蛋白质免疫印迹法检测CM-C和CM-L组巨噬细胞胞质与胞核NRF2蛋白、GCLC及HO-1蛋白表达；2′，7′-二氯荧光素探针检测CM-C和CM-L组巨噬细胞内活性氧水平，以平均荧光强度（mean fluorescent intensity，MFI）表征结果。结果CM-H组巨噬细胞内促炎因子IL-6、IL-8、IL-12及TNF-α mRNA表达（2.332±0.594、3.601±0.639、2.120±0.677、2.468±0.236）均较CM-C组（1.000±0.321、1.000±0.151、1.000±0.059、1.000±0.095）显著上调（P<0.05）；而CM-L组巨噬细胞内IL-6、IL-12及TNF-α mRNA表达（0.056±0.002、0.215±0.024、0.567±0.071）均较CM-C组（1.000±0.209、1.000±0.220、1.000±0.220）显著下调（P<0.05）。在mRNA水平，NRF2表达在CM-L组（1.864±0.198）较CM-C组（1.000±0.094）显著上调（P<0.05）；在蛋白水平，CM-L组巨噬细胞胞质及胞核NRF2表达（1.175±0.104、1.308±0.082）均较CM-C组（1.000±0.025、1.000±0.049）显著升高（P<0.05）。CM-L组巨噬细胞NRF2下游抗氧化基因GCLC、NQO1 mRNA表达（1.786±0.278、1.444±0.078）均较CM-C组（1.000±0.139、1.000±0.226）显著上调（P<0.05），且CM-L组GCLC、HO-1蛋白水平（1.159±0.036、1.412±0.075）均显著高于CM-C组（1.000±0.050、1.000±0.013）（P<0.05）。同时CM-L组巨噬细胞活性氧水平（MFI：123 419±1 302）较CM-C组（MFI：139 193±1 241）显著降低（P<0.05）。结论低剂量脂多糖可以诱导HPDLSC激活巨噬细胞NRF2信号通路调控氧化应激反应，下调巨噬细胞促炎因子表达。

简介：摘要目的探讨环状RNA VMA21(circ_VMA21)对脂多糖(LPS)诱导的血管内皮细胞损伤和氧化应激的影响及其机制。方法人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)随机分为Control、LPS、LPS+pcDNA-circ_VMA21、LPS+pcDNA、LPS+微小RNA(miR)-122-5p inhibitor、LPS+anti-miR-NC、LPS+pcDNA-circ_VMA21+miR-122-5p mimic组；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circ_VMA21和miR-122-5p的表达水平；细胞计数检测细胞活性；流式细胞术检测细胞凋亡；蛋白质印迹法检测蛋白表达；酶联免疫吸附法检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活性；双荧光素酶报告实验检测circ_VMA21和miR-122-5p的靶向关系。两组间均数比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析(组间两两比较采用LSD-t检验)。结果LPS诱导的HUVEC中circ_VMA21表达水平降低(0.17±0.02比1.00±0.00)，miR-122-5p表达水平升高(3.76±0.09比1.00±0.00)，细胞活性降低(0.41±0.02比1.22±0.07)，细胞凋亡率(24.17±0.93比7.62±0.39)及裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)表达水平升高(0.80±0.06比0.13±0.01)，MDA含量[(736.11±27.21) nmol/ml比(159.37±14.93) nmol/ml]及LDH活性升高[(486.45±16.07) U/L比120.58±9.00) U/L]，SOD活性降低[(46.25±4.44) U/L比238.49±11.23) U/L，t＝9.721、13.122、15.321、22.472、10.817、38.123、18.237、25.522，P<0.05]；与LPS组和LPS+anti-miR-NC组比较，LPS+miR-122-5p inhibitor组miR-122-5p表达水平降低，细胞活性升高，细胞凋亡率及cleaved-Caspase-3表达水平降低，MDA含量及LDH活性降低，SOD活性升高(F＝2 564.169、693.501、540.990、704.667、41 336.059、1 170.734、414.559，P<0.05)。与LPS+pcDNA-circ_VMA21组比较，LPS+pcDNA-circ_VMA21+miR-122-5p mimic组miR-122-5p表达水平升高，细胞活性降低，细胞凋亡率及cleaved-Caspase-3表达水平升高，MDA含量及LDH活性升高，SOD活性降低(F＝810.792、298.432、376.370、279.806、634.476、528.520、343.420，P<0.05)。结论circ_VMA21通过下调miR-122-5p抑制脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤和氧化应激。

简介：摘要目的探讨重组人突触融合蛋白4(STX4)对脂多糖(LPS)诱导的胰岛β细胞INS-1损伤影响。方法胰岛β细胞INS-1分成Control组(空白对照)、LPS组(LPS处理)、LPS+NC组(转染阴性对照载体，LPS处理)、LPS+STX4组(转染pcDNA-STX4，LPS处理)，RT-qPCR和Western blot检测STX4 mRNA和蛋白质表达，流式细胞术检测凋亡，DCFHDA法检测活性氧簇(ROS)水平、黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平、比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平、钼酸铵比色法检测过氧化氢酶(CAT)水平、硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平，ELISA法检测细胞分泌的白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和葡萄糖条件下胰岛素分泌水平，Western blot法检测Cleaved Caspase-3、Bax、p65蛋白质表达。用NF-κB信号通路激活剂处理上调STX4后的胰岛β细胞INS-1，给予LPS刺激，同样利用上述方法测定细胞凋亡、ROS、SOD、GSH-Px、CAT、MDA水平和分泌的IL-1β、TNF-α、胰岛素水平以及Cleaved Caspase-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p65蛋白质水平。结果与Control组比，LPS组胰岛β细胞中STX4 mRNA和蛋白质表达均减少，细胞凋亡率、ROS水平、MDA水平均升高，SOD、GSH-Px、CAT水平均降低，细胞分泌的IL-1β、TNF-α水平均升高，细胞分泌的胰岛素水平降低，Cleaved Caspase-3、Bax、p65蛋白质表达水平也升高。NF-κB信号通路激活剂处理逆转上调STX4对LPS条件下胰岛β细胞凋亡、ROS、SOD、GSH-Px、CAT、MDA水平和分泌的IL-1β、TNF-α、胰岛素水平以及Cleaved Caspase-3、Bax、p65蛋白质水平影响。结论上调STX4抑制LPS诱导的胰岛β细胞氧化损伤、细胞凋亡和炎症因子释放，机制与降低NF-κB信号通路激活水平有关。

简介：摘要目的探讨线粒体融合蛋白1(mitofusin 1，MFN1)对脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的小鼠Raw264.7巨噬细胞焦亡的调控作用，为预防巨噬细胞功能障碍导致的炎症和纤维化提供新的研究靶点和理论参考。方法体外培养小鼠单核巨噬细胞Raw264.7，构建LPS诱导的细胞焦亡模型。CCK-8、PI染色、LDH释放、Western blot等验证LPS诱导Raw264.7细胞发生焦亡；Western blot筛选异常表达的线粒体相关蛋白MFN1；DCFH-DA探针检测细胞总活性氧生成情况、Mito-SOX探针检测线粒体活性氧水平、JC-1线粒体膜电位荧光探针检测线粒体膜电位变化以反映线粒体受损情况；利用Ubibrowser数据库预测出MFN1蛋白可与多种E3泛素连接酶结合，通过免疫荧光、免疫共沉淀(co-immunoprecipitation，CO-IP)试验等验证MFN1蛋白是否受泛素化调控；采用Lipofectamine2000试剂转染MFN1过表达质粒检测MFN1蛋白对细胞焦亡和线粒体功能的影响。结果LPS诱导Raw264.7细胞发生线粒体功能障碍和焦亡。LPS刺激后MFN1蛋白表达减少。CO-IP试验证明MFN1蛋白发生泛素化修饰。泛素化抑制剂MG-132处理后抑制LPS诱导的细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Pro-caspase-1、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达上调并且改善线粒体功能。MFN1过表达后缓解LPS导致的线粒体稳态失衡和巨噬细胞焦亡。结论LPS通过影响MFN1泛素化修饰调节线粒体功能障碍，进而导致巨噬细胞焦亡，本研究为治疗巨噬细胞诱导的炎症及相关疾病提供了潜在靶点。

简介：摘要目的分析心房颤动（房颤）患者肠道菌群脂多糖合成功能的变化特点及其可能的作用。方法本研究为前瞻性、横断面研究。选取2016年3月至2018年12月在首都医科大学附属北京朝阳医院住院的非瓣膜性房颤患者作为房颤组，并选取同期遗传背景匹配的体检者作为对照。收集所有研究对象的临床基线资料及粪便样本，提取肠道细菌DNA，采用Illumina novaseq进行宏基因组学测序。基于宏基因组学测序数据，分析脂多糖合成过程中的同源基因簇（KEGG orthology，KO）、合成酶的编码基因及含有这些酶基因的细菌的丰度。基于LASSO分析，筛选与房颤相关的参与脂多糖合成的关键因子，并采用受试者工作特征（ROC）曲线分析、中介分析和logistic回归分析评价其在房颤发病中可能的作用。结果房颤组50例，年龄66.0（57.0，71.3）岁，男性32例（64%）。对照组50名，年龄55.0（50.5，57.5）岁，男性41例（82%）。有20个参与脂多糖合成的KO、7个脂多糖合成酶的编码基因和89个同时可编码9个脂多糖合成酶的肠道细菌在对照组与房颤组间存在差异。LASSO回归分析显示，有5个KO、3个酶基因及9个种层级物种被筛选为关键因子，其中富集在房颤组的因子包括：2个KO（K02851和K00972），3个酶基因（LpxH、LpxC和LpxK），7个种层级物种（Intestinibacterbartlettii、Ruminococcussp. JC304、Coprococcuscatus、unculturedEubacteriumsp.、Eubacteriumsp. CAG：251、Anaerostipeshadrus、Dorealongicatena）。基于上述关键因子构建回归模型，ROC曲线分析示：KO、酶基因、物种分值识别房颤的曲线下面积（AUC）和95%CI分别为0.957（0.918~0.995）、0.940（0.889~0.991）和0.972（0.948~0.997）。中介分析的结果显示，参与脂多糖合成的肠道细菌的变化可影响房颤发病，其中有35.17%是通过富集相应的KO所介导。多因素logistic回归分析结果显示，KO分值绝对值增大，房颤的发生风险增加（OR值<0.001，95%CI：<0.001~0.021，P<0.001）。结论房颤患者肠道内富集了参与脂多糖合成的细菌，其通过编码脂多糖合成酶基因，使得房颤患者脂多糖合成功能有所上调。

简介：摘要目的以坏死性凋亡为切入点，探讨肝纤维化抵抗D-氨基半乳糖/脂多糖（D-GalN/LPS）诱导致死性损伤的新机制。方法建立四氯化碳（CCl4）诱导的肝纤维化小鼠模型，于纤维化6周时以致死剂量的D-GalN/LPS进行攻击，以同样处理的正常小鼠作为对照。即实验共分为4组：对照组（Control）、急性损伤（D-GalN/LPS）组、肝纤维化（Fib）组、肝纤维化+急性攻击（Fib+D-GalN/LPS）组。定量PCR和免疫荧光法分析坏死性凋亡（necroptosis）关键信号分子受体相互作用蛋白（RIPK）1、RIPK3、混合谱系激酶结构域蛋白（MLKL）和/或P-MLKL在各组中的表达。给予正常小鼠以靶向necroptosis关键信号分子的抑制剂，再给予急性攻击，根据转氨酶水平及肝组织学的变化来评估抑制necroptosis对D-GalN/LPS触发急性肝损害的影响。建立肝纤维化自发消融模型，再给予急性攻击，免疫组织化学法分析和比较各组小鼠肝组织中necroptosis关键信号分子的表达。组间差异的比较采用t检验或方差分析。结果定量PCR和免疫荧光检测结果显示，D-GalN/LPS攻击触发了RIPK1、RIPK3、MLKL和/或P-MLKL的明显上调。抑制necroptosis信号的关键分子可明显减轻D-GalN/LPS诱导的肝损害，表现为血清丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶水平的显著降低以及肝组织学的明显改善。纤维化肝脏中necroptosis信号分子的表达明显受到抑制。肝纤维化对D-GalN/LPS触发necroptosis的抑制随着纤维消融而逐渐削弱。结论肝纤维化可能通过抑制D-GalN/LPS触发的necroptosis而保护小鼠抵抗急性致死性损伤的攻击。

简介：摘要目的探讨14－3－3σ基因在调控内毒素/脂多糖(LPS)引发人肺上皮细胞炎症反应中的机制。方法(1)取培养的对数生长期人正常肺上皮细胞BEAS－2B，按照随机数字表法分为对照组、PCMV6－14－3－3σ组，每组3孔。对照组细胞转染空载质粒，PCMV6－14－3－3σ组细胞转染PCMV6－14－3－3σ质粒。转染48 h，蛋白质印迹法检测细胞内14－3－3σ蛋白表达。(2)取培养的对数生长期人正常肺上皮细胞BEAS－2B，按照随机数字表法分为对照组、PCMV6－14－3－3σ组、PCMV6－14－3－3σ＋LPS组、LPS组，每组3孔。对照组细胞转染空载质粒孵育42 h，PCMV6－14－3－3σ组细胞转染PCMV6－14－3－3σ质粒孵育42 h，PCMV6－14－3－3σ＋LPS组细胞转染PCMV6－14－3－3σ质粒42 h后加入LPS(终质量浓度1 μg/mL，下同)刺激6 h，LPS组细胞仅加入LPS刺激6 h。蛋白质印迹法检测Bax、B淋巴细胞瘤－2基因(Bcl－2)的蛋白表达，计算两者比值；流式细胞仪检测细胞凋亡率；实时荧光定量反转录PCR技术检测细胞内肿瘤坏死因子α(TNF－α)、白细胞介素1β(IL－1β)mRNA表达量；酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中TNF－α、IL－1β含量。对数据行t检验、单因素方差分析、LSD检验。结果(1)与对照组(0.78±0.04)比较，转染48 h PCMV6－14－3－3σ组细胞14－3－3σ蛋白表达水平(1.05±0.03)明显升高(t＝5.41, P<0.01)。(2)与对照组比较，PCMV6－14－3－3σ组细胞Bax/Bcl－2比值、细胞凋亡率、TNF－α mRNA及IL－1β mRNA表达量、细胞上清液中TNF－α及IL－1β含量均无明显变化(P>0.05)，LPS组细胞上述指标均明显升高或增加(P<0.01)。与LPS组比较，PCMV6－14－3－3σ＋LPS组细胞上述指标明显下降或减少(P<0.01)。结论14－3－3σ是调控细胞凋亡的重要因子，通过调节凋亡调控因子Bax/Bcl－2比值，抑制人肺上皮细胞凋亡，从而减轻LPS诱导的炎症反应。

简介：摘要目的观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导肺成纤维细胞及肺组织有氧糖酵解关键酶6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2, 6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3, PFKFB3）表达及其与有氧糖酵解的关系，探讨在LPS诱导肺纤维化过程中肺成纤维细胞和肺组织有氧糖酵解的潜在机制。方法将人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞系采用随机数字表法分为PBS对照组（PBS组）和LPS组（每组3孔），Western blot检测LPS刺激细胞6h后PFKFB3表达情况，同时免疫荧光显示PFKFB3在细胞内的定位情况；于LPS刺激后48 h采用海马细胞能量代谢仪检测细胞耗氧率（oxygen consumption rate, OCR）和产酸率（extracellular acidification rate, ECAR ），并采用比色法检测有氧糖酵解产物乳酸产生情况，同时Western blot检测LPS刺激48 h后Ⅰ型胶原蛋白合成情况。将24只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为生理盐水对照组（C组）、LPS组（L组），每组12只，L组、C组连续5d分别腹腔注射5 mg/kg LPS、等容量生理盐水；每组各6只于造模后第7天无痛处死小鼠，取血浆和肺组织，Western blot和免疫荧光检测各组肺组织中PFKFB3表达情况，比色法检测各组小鼠血浆中乳酸的含量；剩余小鼠于造模后第28天取肺组织，一侧肺通过Western blot检测肺组织Ⅰ型胶原蛋白合成情况，另一侧肺做石蜡切片进行病理学检测。结果与PBS组比较，LPS刺激细胞6h后PFKFB3表达明显升高（P<0.05）；LPS刺激细胞48 h后，与PBS组比较，LPS组细胞耗氧率降低、产酸率增加，代谢产物乳酸含量明显升高（P<0.05），同时细胞Ⅰ型胶原蛋白合成显著增加（P<0.05）。与C组比较，L组小鼠腹腔注射LPS 7 d后肺组织中PFKFB3表达明显升高（P<0.05），血浆乳酸含量明显升高（P<0.05）；LPS注射28 d后，L组小鼠Ⅰ型胶原蛋白表达明显升高（P<0.05），肺组织出现明显纤维化。结论在LPS诱导的肺纤维化过程中，LPS可诱导肺成纤维细胞和肺组织中PFKFB3蛋白表达，该过程与其有氧糖酵解过程相关，PFKFB3的表达上调可能是LPS诱导肺成纤维细胞和肺组织有氧糖酵解和肺纤维化的关键环节。

简介：摘要目的探讨牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）的致病因子脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激巨噬细胞和破骨细胞后的免疫应答反应。方法获取C57BL/6小鼠骨髓单核细胞，利用条件培养基将其分别诱导为骨髓来源的巨噬细胞（bone marrow derived macrophages，BMM）和破骨细胞。实验分为空白对照组和实验组，空白对照组为不加Pg-LPS组，实验组采用Pg-LPS（10 μg/ml）分别刺激BMM和破骨细胞，检测两种细胞表达Toll样受体2（Toll-like receptor-2，TLR-2）和TLR-4的mRNA水平、蛋白水平以及分泌炎症因子的情况，并观察Pg-LPS对BMM分化为破骨细胞过程的影响。结果小鼠骨髓单核细胞成功诱导为BMM及成熟的破骨细胞。在Pg-LPS的作用下，BMM组的TLR-2 mRNA水平（41.41±13.07）较空白对照组（1.03±0.31）显著上调（P<0.01），TLR-4 mRNA无明显改变；破骨细胞组的TLR-2 mRNA（2.24±0.23）和TLR-4 mRNA水平（4.83±1.07）均较空白对照组显著上调（P<0.05，P<0.01）。流式细胞术检测结果显示，BMM组的TLR-2蛋白表达显著上调（P<0.01），平均荧光强度空白对照组为39.85±5.27，实验组为221.57±13.13；破骨细胞组的TLR-2亦有显著增加（P<0.01）：平均荧光强度空白对照组为83.31±2.69，实验组为108.65±6.32；两组细胞的TLR-4均无明显激活（P>0.05）。BMM和破骨细胞分泌的肿瘤坏死因子α和白细胞介素6水平均显著升高（P<0.01），其中破骨细胞的炎症因子增幅水平显著低于BMM（P<0.01）。此外，Pg-LPS显著抑制破骨细胞形成的数目及大小，面积百分比较对照组减少47%。结论Pg-LPS能激活BMM产生明显的免疫炎症反应，而破骨细胞对Pg-LPS的免疫应答较弱；Pg-LPS可抑制BMM分化为破骨细胞。

简介：摘要目的探讨布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）在内毒素/脂多糖（LPS）诱导烫伤小鼠肠道细胞焦亡中的作用。方法采用实验研究方法。将128只6~8周龄的雄性C57BL/6小鼠分成假伤组、单纯烫伤组、烫伤+LPS组、烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组，假伤组8只，其余5组分别为24只。烫伤5组小鼠造成背部10%体表总面积Ⅲ度烫伤，假伤组小鼠背部模拟致伤。伤后0 h（即刻），假伤组、单纯烫伤组小鼠腹腔注射生理盐水，烫伤+LPS组小鼠腹腔注射LPS，其余3组小鼠腹腔注射LPS及相应剂量的LFM-A13。假伤组小鼠于伤后0 h处死，收集肠道组织和血清；烫伤5组分别于伤后0、12、24 h，每组取8只小鼠处死，收集肠道组织及伤后12 h血清。采用免疫组织化学法检测小鼠肠道组织BTK磷酸化情况。采用蛋白质印迹法检测小鼠肠道组织磷酸化BTK和剪切型胱天蛋白酶1（caspase-1）、caspase-11蛋白表达情况。采用酶联免疫吸附测定法检测小鼠肠道组织和血清白细胞介素1β（IL-1β）含量。对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果6组小鼠伤后0 h及单纯烫伤组小鼠伤后12、24 h肠道组织未见明显BTK磷酸化情况。伤后12、24 h，烫伤+LPS组小鼠肠道组织BTK磷酸化较单纯烫伤组明显增加，烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠肠道组织BTK磷酸化较烫伤+LPS组明显下降，且随着LFM-A13剂量的增加，下降程度逐渐增加。与假伤组（0.130±0.010）及单纯烫伤组（0.120±0.040、0.110±0.040）比较，烫伤+LPS组小鼠伤后12、24 h肠道组织磷酸化BTK蛋白表达明显升高（0.470±0.090、0.430±0.080，P<0.01）。与烫伤+LPS组比较，烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后24 h及烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后12、24 h肠道组织磷酸化BTK蛋白表达明显下降（0.280±0.060，0.300±0.120、0.150±0.050，0.280±0.090、0.140±0.040，P<0.05或P<0.01）。与烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组比较，烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后24 h肠道组织磷酸化BTK蛋白表达明显下降（P<0.01）。与假伤组和单纯烫伤组比较，烫伤+LPS组小鼠伤后12、24 h肠道组织剪切型caspase-1、caspase-11蛋白表达明显增加（P<0.01）。与烫伤+LPS组比较，烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组小鼠肠道组织伤后12 h剪切型caspase-1和伤后12、24 h剪切型caspase-11蛋白表达及烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后12、24 h肠道组织剪切型caspase-1、caspase-11蛋白表达明显减少（P<0.01）。与烫伤+LPS+3 mg/kg LFM-A13组比较，烫伤+LPS+10 mg/kg LFM-A13组、烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠伤后12、24 h肠道组织剪切型caspase-1、caspase-11蛋白表达明显减少（P<0.05或P<0.01）。伤后12 h，烫伤+LPS组小鼠肠道组织、血清IL-1β含量明显高于假伤组和单纯烫伤组（P<0.01），烫伤+LPS+30 mg/kg LFM-A13组小鼠肠道组织、血清IL-1β含量明显低于烫伤+LPS组（P<0.01）。结论BTK的磷酸化与烫伤脓毒症小鼠肠道组织剪切型caspase-1、caspase-11和血清、肠道的IL-1β含量增加有关。BTK的磷酸化介导了LPS诱导的烫伤小鼠肠道细胞焦亡，抑制BTK磷酸化可减轻烫伤小鼠肠道细胞焦亡，对肠道具有保护作用。

简介：摘要目的观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激对小鼠肾脏及人肾小管上皮细胞沉默信息调节因子3（silent information regulator 3，Sirt3）和线粒体动力学相关蛋白表达的影响，探讨Sirt3在LPS诱导的肾小管上皮细胞线粒体动力学异常中的作用。方法无特定病原体（SPF）级雄性C57BL/6小鼠18只，随机分为对照组、LPS 24 h组和LPS 48 h组，对照组腹腔注射生理盐水（0.1 ml/10 g），LPS 24 h组和LPS 48 h组腹腔注射LPS（10 mg/kg）溶液。全自动生化分析仪检测小鼠肾功能，HE染色观察肾组织病理变化，Western印迹法检测线粒体分裂相关蛋白线粒体动力相关蛋白1（dynamin-related protein-1，Drp1）、融合相关蛋白视神经萎缩相关蛋白A1（optic atrophy type 1，Opa1）及Sirt3的表达，免疫组化检测肾组织中Sirt3的表达及分布。体外培养人肾小管上皮细胞（HK-2），Western印迹法检测10 μg/ml LPS刺激24 h后Drp1、Opa1及Sirt3的表达变化，Hoechst-33342染色检测细胞凋亡。pcDNA3.1-Sirt3重组质粒转染HK-2细胞过表达Sirt3后同上方法检测Sirt3、Drp1、Opa1的表达变化及细胞凋亡。结果（1）LPS组小鼠血肌酐、尿素氮明显高于对照组（均P<0.05），并出现典型病理改变。（2）LPS组小鼠肾组织线粒体分裂相关蛋白Drp1表达明显高于对照组，融合相关蛋白Opa1表达明显低于对照组（均P<0.05）。（3）LPS组小鼠Sirt3蛋白表达明显低于对照组（P<0.05），免疫组化结果表明Sirt3主要表达在肾小球血管内皮细胞和肾小管上皮细胞中。（4）LPS刺激可诱导HK-2细胞Drp1表达升高（P<0.05），Opa1及Sirt3表达下降（P<0.05），细胞凋亡增加（P<0.05）。（5）pcDNA3.1-Sirt3重组质粒转染HK-2细胞过表达Sirt3可减轻LPS诱导的线粒体动力学紊乱及细胞凋亡。结论LPS可诱导Sirt3表达下调及线粒体动力学紊乱，Sirt3可能通过调控线粒体动力学在LPS诱导的急性肾损伤中发挥保护作用。

简介：摘要目的探讨轻度炎症状态下人牙髓干细胞（human dental pulp stem cell，hDPSC）产生的外泌体与基质细胞衍生因子-1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）联合应用对牙髓组织再生的影响。方法分离培养hDPSC，脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激hDPSC，超速离心法提取hDPSC经LPS刺激后产生的外泌体（exosomes from lipopolysaccharide-stimulated hDPSC，L-EXO）和正常状态下分泌的外泌体（exosome from normal hDPSC，N-EXO），通过透射电镜和蛋白质印迹法鉴定提取物。将40只6~8 周龄的SD 大鼠通过随机数字表法分为S组（单独应用SDF-1）、L+S组（SDF-1 与L-EXO 联合应用）、N+S组（SDF-1与N-EXO联合应用）和空白对照组（根管内不植入任何物质），每组10只。以双侧下颌第一磨牙为实验牙，建立大鼠无髓根管模型，根据分组分别在根管内植入不同的内容物。植入后30 d过量麻醉处死所有大鼠，取大鼠双侧下颌骨组织，应用HE、Masson及免疫组织化学染色法进行组织学评价。结果HE染色结果显示，除空白对照组外，其他3组根管内均可见新生牙髓样组织，其中L+S组根管内新生组织的量及组织中的细胞数量最多，S组最少。Masson染色结果显示，L+S组矿化组织沿根管壁纵向排列，胶原纤维有序排列，N+S组呈无规律紊乱分布。定量分析各组新生血管面积，结果显示L+S组血管密度［（2.03±0.65）%］显著高于S组［（0.65±0.05）%］及N+S组［（1.06±0.38）%］（F=5.879，P<0.05）。免疫组织化学结果显示，S 组及L+S组的趋化因子受体4表达量显著低于N+S 组（F=8.633，P<0.01）。结论hDPSC分泌的外泌体联合SDF-1可提高根管内新生组织的量和组织中的血管密度，L-EXO的作用较N-EXO强，并且新生组织中胶原纤维及矿化组织的排列更规律有序。

简介：摘要目的研究脐带间充质干细胞上清液对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的急性肺损伤（acute lung injury, ALI）的保护作用及机制。方法选择6周龄C57BL/6雄性小鼠共40只，随机数字法分为假手术（sham）组，LPS模型组，LPS+人脐带间充质干细胞上清液（HucMSC-cm）（LPS+cm）治疗组，LPS+HucMSC-cm+Compound C（LPS+cm+cc）干预组，每组10只。通过气管内注射LPS 5 mg/kg构建ALI模型，4 h后予以气管内注射HucMSC-cm 50 μL/只构建治疗组；干预组在LPS及HucMSC-cm前30 min予腹腔注射Compound C 15 mg/kg；72 h后留取小鼠外周血检测中性粒细胞比例，并处死小鼠留取肺组织。通过苏木精-伊红染色检测小鼠肺组织病理学改变，Western Blot及免疫组化法分析肺组织中IL-6、ICAM-1、VCAM-1和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（phosphate AMP-activated protein kinase, p-AMPK）的表达。体外培养人肺微血管内皮细胞（HuLEC-5a），将细胞分为三组：control组、LPS组（10 μg/mL）、LPS+HucMSC-cm组。处理24 h后，Western Blot检测p-AMPK及AMPK蛋白表达水平，RT-PCR检测IL-6及IL-8的mRNA表达。多组间比较采用单因素方差分析，两组比较采用Tukey法检验。结果与sham组相比，LPS组小鼠肺组织充血水肿加重，肺间隔增厚和炎性细胞浸润增多，肺组织IL-6（P=0.003）、ICAM-1（P<0.001）及VCAM-1（P=0.001）蛋白水平明显上升，p-AMPK蛋白水平表达下降（P=0.013），外周血中性粒细胞比例上升（P<0.001），LPS+HucMSC-cm组肺组织充血水肿及病理学损伤较LPS组得到改善，肺组织中IL-6（P=0.003）、ICAM-1（P=0.001）及VCAM-1（P=0.006）蛋白水平下降，p-AMPK蛋白水平表达上升（P=0.002），外周血中性粒细胞比例下降（P<0.001），而LPS+cm+cc组肺组织病理学损伤较LPS+HucMSC-cm组再次加重，肺组织IL-6、ICAM-1及VCAM-1蛋白水平明显上升，p-AMPK蛋白水平表达下降，免疫组化法得到与蛋白相一致的结果。体外实验中，LPS处理后，IL-6（P<0.001）及IL-8（P=0.027）的mRNA表达较control组上升，且p-AMPK蛋白水平下降（P=0.005）；LPS+HucMSC-cm组较LPS组IL-6（P=0.003）及IL-8（P=0.002）的mRNA表达下降，p-AMPK蛋白水平上升（P=0.003）。结论人脐带间充质干细胞上清液通过激活AMPK活性改善LPS诱导的ALI。

简介：摘要目的探讨α-防御素（DEFA）和脂多糖（LPS）对老年髋关节置换术后假体周围感染及无菌性松动的预测价值。方法选取2015年2月至2018年2月凉山彝族自治州第二人民医院骨科收治的105例接受人工髋关节置换术老年患者作研究对象，根据术后1年是否发生并发症将患者分为对照组（36例）、无菌松动组（41例）和感染组（28例）。采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定系统对抽取的关节滑液进行菌株鉴定，使用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定关节滑液中DEFA水平，采用免疫透射比浊法检测LPS水平。使用受试者工作特征曲线（ROC）分析术后关节滑液DEFA和LPS水平对并发无菌性松动及假体周围感染的预测价值。结果28例感染组患者关节液中共分离出31株病原菌，其中革兰阳性菌18株（58.06%），以凝固酶阴性葡萄球菌所占比例最高（5/31、16.13%）；革兰阴性菌13株（41.94%），以铜绿假单胞菌所占比例最高（4/31、12.90%）。各组研究对象关节滑液DEFA和LPS水平差异均有统计学意义（F = 141.328、84.922，P均< 0.001），其中无菌松动组和感染组患者关节滑液DEFA[（3.70 ± 1.18）mg/L、（8.14 ± 2.65）mg/L]和LPS[（0.47 ± 0.14）ng/ml、（0.69 ± 0.22）ng/ml）]水平均显著高于对照组[（1.52 ± 0.49）mg/L、（0.21 ± 0.06）ng/ml）]（tDEFA= 10.324、14.701；tLPS= 10.334、12.531，P均< 0.001）；感染组患者关节滑液DEFA[（8.14 ± 2.65）mg/L]和LPS[（0.69 ± 0.22）ng/ml]水平均显著高于无菌松动组[（3.70 ± 1.18）mg/L、（0.47 ± 0.14）ng/ml]（tDEFA= 9.465、tLPS= 5.080，P均< 0.001）。革兰阳性菌感染组患者关节滑液DEFA水平[（8.50 ± 2.19）mg/L]高于革兰阴性菌感染组[（6.89 ± 1.31）mg/L]（t = 2.114、P = 0.044），LPS水平[（0.57 ± 0.09）ng/ml]低于革兰阴性菌感染组[（0.80 ± 0.10）ng/ml]（t = 6.231、P < 0.001）。术后关节滑液DEFA和LPS水平预测无菌性松动的ROC曲线下面积分别为0.934和0.873，预测假体周围感染的ROC曲线下面积分别为0.941和0.895。术后关节滑液DEFA联合LPS水平预测无菌性松动的ROC曲线下面积为0.986，敏感性和特异性分别为95.10%和94.40%；预测假体周围感染的ROC曲线下面积为0.990，敏感性和特异性分别为100.00%和92.70%。结论老年髋关节置换术后关节滑液DEFA联合LPS水平对预测假体周围感染及无菌性松动具有较高地敏感性和特异性。