简介:摘要目的制备脂质体包裹胞嘧啶(CytosineC)鸟嘌呤(GuanineG)含量低离启动子位置较近的99Tcm–HYNIC(联肼尼克酰胺)–survivinASODN(Antisenseoligodeoxynucleotide反义寡脱氧核苷酸),行荷人肝癌SMMC-7721裸鼠体内分布研究,探讨此反义药物制备过程及动物体内的分布,筛选出最佳反义制剂碱基序列,提高诊断和治疗效果。方法以survivin为靶序列制备G、C含量均为10%的20个碱基单链ASODN和SODN,偶联HYNIC,99Tcm标记后经CellufineGH-25纯化后脂质体包裹。对荷瘤裸鼠行生物学分布,ASODN和SODN两组计量资料比较均通过SPSS13.0统计软件,所有数据均采用均数标准差,用两样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果此反义药物经优化筛选序列,HYNIC耦联,99Tcm标记-脂质体包裹-cellufineGH-25纯化后稳定性较好,在血清中培育前后标记率无明显变化,放化纯均可高达95%。在4h时荷瘤鼠内肝、肾%ID/g值分布相对较低分别为肝内ASODN,2.470.02;SODN,2.050.04;肾内ASODN,1.500.06;SODN,1.960.03;T/NT值ASODN较高为4.730.02;SODN为1.480.03二者差异有统计学意义(t=3.622p<0.05)。结论反义序列的选择是反义药物制备的关键,该研究使用全长基因寻靶技术并使G、C含量少、离启动子位置近的碱基序列制备出的反义药物具有肿瘤聚集率高,副作用少的优点,可进一步指导临床,提高诊断与治疗效果,减少副作用。
简介:摘要长链非编码RNA(long non-coding RANs,lncRNAs)是指长度超过200个核苷酸且无编码蛋白质功能的一类非编码RNA。近年来研究发现,lncRNAs广泛参与各种生物学过程,如调控细胞的分化、增殖、转移和凋亡等。lncRNAs的异常表达与人类各种疾病尤其与恶性肿瘤密切相关。其中反义lncRNAs是从编码或非编码基因的反义链转录生成的一类lncRNA。在哺乳动物细胞中,反义lncRNAs约占全部lncRNAs的20%,该类lncRNAs能通过调控其附近基因的转录影响细胞的生物学活动,参与包括胃癌在内的肿瘤的发生和发展,相关研究已成为当今肿瘤研究领域的热点。本文拟结合国内外最新研究报道,对近年来在胃癌研究中已经明确有差异变化的反义lncRNAs及其功能加以综述。
简介:目的:观察端粒酶基因hTRT反义表达对癌细胞生物学行为的影响,探讨人端粒酶逆转录酶反义基因治疗对肝癌细胞恶性表型的逆转作用.方法:含620bp端粒酶反义hTRT基因的PBSTRT质粒用SalⅠ、BamHⅠ酶切后,插入真核表达载体pCDNA3BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点,构建成含反义hTRT基因的真核表达重组子.反义hTRT基因转染肝癌细胞株HepG1-6,观察其对肿瘤细胞生长的影响.结果:成功构建hTRT反义真核表达载体,并导入肝癌细胞株HepG1-6中,获表达hTRT反义基因的细胞系(HepG1-6/pCDNA3-反义hTRT),该细胞系出现显著生长抑制现象,端粒酶活性明显下降,G0/G1期细胞增加,S和G2M期细胞减少,而HepG1-6/pCDNA3细胞则无明显变化.结论:反义hTRT基因治疗可以明显抑制HepG1-6细胞的增殖,部分细胞受阻于G1期,提示hTRT基因可以作为治疗肿瘤的靶基因.
简介:目的探讨Bcl-2反义核酸治疗Burkitt's淋巴瘤的疗效。方法将不含EB病毒的人类BL的细胞株-CA46移植到BAB/C裸鼠体内,受用体内体外交替传代的方式,建立BL裸鼠模型。并将荷瘤裸鼠随机分为反义治疗(A组),无义对照(B组)和空白对照(C组)三个组,每组5只,A组注射Bcl-2反义核酸,B组注射无义寡核苷酸,C组不注射任何制剂;治疗剂量为5mg/kg/d,给药方式为瘤内局部注射,每天注射一次,连续给药15天。结果A组肿瘤的生长明显受到抑制,其中一只裸鼠的肿瘤消失,其余4只的瘤块明显小于B组和C组,A组对C组的肿瘤抑制率为89.5%;A组对B组的肿瘤抑制率为83.3%。二者无显著差异(P>0.05);而B组对C组的抑制率为36.9%,与前二者差异非常显著(P<0.01)。结论Bcl-2反义核酸对具有Bcl-2反义核酸对具有Bcl-2高表达的Burkitt's淋巴瘤具有明显的疗效。具有潜在的临床应用价值。
简介:目的研究提高和阻断端粒酶活性对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及分化的影响。方法采用直接贴壁法分离、培养SD大鼠BMSCs.流式细胞仪检测BMSCs表面标记。阳离子脂质体介导hTERT正、反义表达载体转染BMSCs.RT—PCR和免疫组化方法检测TERT表达,并对转染前后BMSCs的生长增殖能力、神经细胞方向的分化能力和大鼠颅内移植存活情况进行研究。结果大鼠BMSCs表面CD29、CD44、CD90阳性,CD31、CD34、CD45阴性,转染正义hTERT后BMSCs增殖速度明显提高,而其向神经元和星形胶质细胞诱导分化及异体海马移植后的存活能力未受影响,转染反义hTERT后BMSCs增殖速度减慢,5-6周内死亡。结论BMSCs存在端粒酶低表达,提高或阻断端粒酶活性对BMSCs的增殖分别起到促进或抑制作用。
简介:目的:探讨hTERT反义寡核苷酸(ASODN)抑制CM-319细胞端粒酶活性对脊索瘤细胞的细胞周期及增殖的影响。方法:用脂质体介导hTERT正义寡核苷酸(SODN)和反义寡核苷酸(ASODN)转染CM-319脊索瘤细胞株72小时后,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率变化。结果:hTERT的ASODN转染细胞的端粒酶活性及细胞生长都明显受到抑制。流式细胞仪检测显示:ASODN组细胞出现早期凋亡峰,细胞阻滞于S期,而hTERT的SODN则无此作用。ASODN组细胞凋亡率为16.01%,而hTERT的SODN组为2.3%。结论:端粒酶hTERT为靶点的反义寡核苷酸可明显抑制脊索瘤细胞的增殖,且具有促凋亡作用。
简介:摘要目的研究小鼠脊髓中miR-365表达水平的变化规律与骨癌痛发生和发展的关系,及连续鞘内注射miR-365反义锁核酸(LNA-anti-miR-365)对骨癌痛小鼠疼痛行为的影响。方法(1)将48只SPF级C3H/HeJ雄性小鼠,按照随机数字表法将其随机分为假手术组(Sham组)和肿瘤组(T组),每组24例。两组小鼠分别于右侧股骨远端骨髓腔内注射不含肿瘤细胞的α-MEM和纤维肉瘤细胞NCTC 2472。采用Real-time-RTPCR方法在建模前1 d,建模后4、7、10、14、21 d分别检测Sham组和T组小鼠脊髓miR-365的表达情况。(2)另取24只SPF级C3H/HeJ雄性小鼠随机分为4组:L组(鞘内注射LNA-anti-miR-365),L'组(鞘内注射LNA'-negative control),C组(鞘内注射溶媒无核酸酶水)和S组(假手术处理),每组6只。建模前l d,建模后4、7、10、14 d监测小鼠疼痛行为指标,包括自发抬足次数和机械缩足阈值(PWMT)。建模后14 d,每日分别给L组、L'组、C组小鼠鞘内注射LNA-anti-miR-365、LNA'-negative control和无核酸酶水各5 μl,连续注射7 d,每日测小鼠疼痛行为指标,至建模后2l d。结果与基础值比较,Sham组建模后4~21 d脊髓水平miR-365差异均无统计学意义(P均>0.05);与基础值和Sham组相比,T组小鼠脊髓水平miR-365在建模后7 d(3.45±0.58)、10 d(4.11±0.23)、14 d(3.21±0.67)、21 d(4.82±0.55)均明显升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。从建模后19~21 d,与L'组和C组比较,L组小鼠PWMT明显升高[19 d(1.11±0.14)g,20 d(1.15±0.20)g,21 d(1.29±0.23)g](P均<0.05),自发抬足次数明显降低[19 d(8.6±1.1)次,20 d(8.6±1.4)次,21 d(8.5±1.1)次](P均<0.05)。相比给药前,L组小鼠建模后19~21 d的PWMT明显升高(P均<0.05),自发抬足次数明显降低(P均<0.05)。结论骨癌痛发生发展过程中,miR-365脊髓表达量有所升高,连续鞘内注射LNA-anti-miR-365可缓解小鼠骨癌痛。