简介:选择毕赤酵母GS115作为表达宿主,对抗菌肽Spinigerinα的突变体Spinigerinα′的基因进行胞外分泌表达,并选用致病性大肠杆菌、致病性的肠炎沙门氏菌、金黄色葡萄球菌作为敏感菌株,采用琼脂空穴扩散法对表达液进行抑菌效果的研究,并将其抑菌效果与突变前的抗菌肽Spinigerinα进行对比。结果表明,抗菌肽Spinigerinα′-1的抑菌活性降低,Spinigerinα′-2抑菌活性稍有增加,Spinigerinα′-3的抑菌活性最强,而Spinigerinα′-4和5酵母表达的蛋白无抑菌活性。为抗菌肽抑菌效果提高的研究奠定重要的基础。
简介:采用pGAPZαA为表达载体,SMD1168毕赤酵母为受体系统,构建分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因,共设计4对引物,采用SOE—PCR法合成Brazzein基因,构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA—Bra。将重组质粒线性化,电转导人Pichia.pastorisSMD1168中,用高浓度的Zeocin筛选高拷贝转化子。将重组菌株接种于YPD培养基诱导表达,进行SDS—PAGE分析。成功构建了分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌,SDS—PAGE表明,目标蛋白的相对分子量与理论值一致,诱导72h后的目的蛋白表达量达0.12dE。
简介:南瓜中富含的果胶,占南瓜干物质的7%~17%,尤其是南瓜皮,其中的果胶含量可达20%以上,南瓜皮是一种理想的低酯果胶原料。研究了从南瓜皮中提取果胶的一种全新思路,既可以废物利用,变废为宝,提高经济效益,又可以减少环境污染。采用盐析法从南瓜皮中提取食用果胶,在单因素试验的基础上用正交试验进行工艺参数的优化,得到其较佳工艺条件:液料质量比为1:70,萃取液pH值为2.0,萃取温度为90℃,萃取时间为90min,并选用硫酸铝作沉淀剂。在此工艺条件下,南瓜皮的果胶提取率达14.30%。与其他方法相比,盐析法提取果胶具有成本底、得率高和果胶制品纯度高等特点。因此采用盐析法从南瓜皮中提取果胶是一种技术上可行的生产工艺。