简介：目的：检测抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）转基因山羊外源基因的拷贝数及ATⅢ蛋白的表达量,分析拷贝数与蛋白表达量的相关性。方法：用Primer5.0软件设计外源基因ATⅢ及山羊管家基因GAPDH的引物,以倍比稀释的标准品进行实时荧光定量PCR,制作标准曲线,通过标准曲线计算外源基因拷贝数;通过酶显色底物法检测ATⅢ蛋白的含量。结果：依据ATⅢ和GAPDH基因标准曲线方程计算得到的山羊个体间外源基因的拷贝数相差很大,最少的为5,最多为25,且不同转基因山羊间ATⅢ表达水平的差别达10倍以上。结论：外源基因表达水平在受到拷贝数的影响外,也受到整合位点等其他因素的重要影响。

简介：目的利用TALE-TFs,在小鼠成纤维细胞中激活β-酪蛋白基因启动子,为检测β-酪蛋白基因启动子—目的基因表达框的表达结果,提供一种检测途径。方法将构建的TALE-TFs和β-酪蛋白基因启动子—Red报告基因质粒电转染进入小鼠成纤维细胞,通过荧光显微镜直接观察报告基因表达情况。结果与结论利用TALE人工转录因子,在小鼠成纤维细胞中能够激活β-酪蛋白基因启动子表达框,为替代乳腺上皮细胞表达验证系统提供了新的途径。

简介：目的：利用巴斯德毕赤酵母表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）纤突糖蛋白S。方法：根据GenBank中猪TGEV纤突糖蛋白S全基因设计一对引物，并在5’引物和3’引物中引入EcoRI、NotI酶切位点，2。2kb的目的基因S经PCR扩增后克隆于pBS-T载体，再将S基因经双酶切从T载体切下并与穿梭质粒pPIC9k连接，SalI线性化重组穿梭质粒pPIC9k—S，电转化于毕赤酵母GS115感受态细胞，G418筛选鉴定阳性重组子，经甲醇诱导，SDS—PAGE检测诱导后上清。结果：对pPIC9k—S重组酵母表达载体的测序证实已成功克隆了猪TGEVS基因；重组酵母菌诱导表达后，SDS-PAGE检测结果显示表达产物的相对分子质量为为82×10^3，且S蛋白以可溶性形式分泌表达于胞外。结论：利用巴斯德毕赤酵母真核表达系统成功表达了猪传染性胃肠炎病毒（河北分离株）纤突糖蛋白S。

简介：目的评价嗜肺巴氏杆菌外膜蛋白(OMP)和脂多糖(LPs)作为血清学诊断抗原的敏感性和特异性.方法用OMP、LPS和全菌(WC)作为Westernblot和ELISA的诊断抗原检测自然感染和实验感染嗜肺巴氏杆菌小鼠相应的IgG抗体滴度,同时测定3种抗原与实验动物常见致病菌的交叉反应.结果与嗜肺巴氏杆菌自然感染和实验感染小鼠血清的ELISA反应中,不同时期,LPS作为诊断抗原时血清抗体阳性率最高,WC次之,OMP最低.自然感染小鼠群中,出生4周LPS抗体阳性率即可达80%,而同期的WC和OMP仅为25%和20%,故LPS敏感性最高.与实验动物常见致病菌免疫血清和阴性种鼠血清的ELISA反应中,WC抗原表现出较高的吸光度(A)值,经Westernblot证实,其反应为非特异性反应,LPS抗原特异性最强,OMP抗原次之.结论混合多株具有型或种特异性的OMP或LPS作为ELISA的诊断抗原,无论从特异性和敏感性上均高于全菌抗原.

简介：应用prima蛋白加农药马拉硫磷对橘小实蝇进行防治，每8d点喷一次，共喷5次。试验结果表明：prima蛋白与马拉硫磷混合后点喷对橘小实蝇的诱杀效果显著，保果率达到64．71％左右，卡方检验的结果为P=0．027〈0．05，表明点喷prima蛋白与马拉硫磷的混合溶液对柚子的保果效果显著。

简介：目的：筛选1型人免疫缺陷病毒（HIV-1）中国流行株中包膜蛋白gp41的优势抗原片段,构建具有区域流行代表性的HIV-1gp41重组抗原,为改进现有HIV-1初筛试剂盒中使用的同类抗原奠定基础。方法：利用免疫斑点杂交和生物信息学方法,从收集自重庆、广州、上海的区域代表性150份HIV-1感染者血清标本中筛选gp41抗原性强的候选样本,利用RT-PCR及巢式PCR方法扩增包含重要抗原表位决定蔟的gp41基因片段,与原核表达载体pQE30连接,转化大肠杆菌M15构建gp41重组抗原表达菌株,表达后经亲和层析纯化、SDS-PAGE和Western印迹鉴定。结果：兔源HRP标记的gp41多抗能识别标本中gp41抗原性差异,得到候选样本,扩增包含gp41主要抗原表位片段;构建了包含gp41抗原表达簇的重组原核表达质粒,表达、纯化后经His标签抗体Western印迹鉴定为阳性。结论：高纯度的重组优势gp41抗原的构建和鉴定,为进一步改进现有HIV初筛诊断奠定了基础。

简介：传统的蛋白质组定量策略主要是通过双向凝胶电泳来进行相对定量.由于该方法不能对相对分子质量极高或极低、等电点极酸或极碱和含量低的蛋白质以及膜蛋白质等进行有效分离和检测,所以已不能适应目前蛋白质组研究深入发展的需要.近年来,定量蛋白质组学的发展主要是以同位素亲和标签试剂为代表的、以质谱检测为核心的稳定同位素化学标记方法.稳定同位素化学标记结合质谱技术,使定量蛋白质组的分析更趋简单、准确和快速,具有良好的发展前景.本文对稳定同位素化学标记结合质谱技术在定量蛋白质组学中的研究进展进行了评述.

简介：在最近发表在《MolecularPsychiatry》杂志上的一项研究中。科学家们检测了阿兹海默症患者在发病过程的不同阶段大脑中tau蛋白沉积样的扩散特征。这一结果表明沉积斑块的的大小以及其扩散的速度具有明显的个体差异性，而大脑中tau蛋白的水平与记忆损伤的严重程度之间也有明显的相关性。

简介：目的：检测Y2HGold酵母株中表达的hPROKR2C端蛋白是否有毒性及自激活,为后期利用酵母双杂交技术研究hPROKR2C端相互作用蛋白奠定基础。方法：构建酵母双杂交载体pGBKT7-hPROKR2-Ct质粒,将其转入酵母感受态中验证其是否表达并计算转化率;通过观察SD/-Trp平板上酵母菌落生长状态进行hPROKR2C端蛋白的毒性检测;通过观察SD/-Trp、SDO/-Trp/X、SDO/-Trp/X/Aba平板上酵母菌落生长状态进行hPROKR2C端蛋白自活性检测。结果：构建了酵母双杂交载体pGBKT7-hPROKR2-Ct,将其转入酵母感受态中,转化率为8.5×104cfu/μg;毒性及自活性检测均显示hPROKR2C端蛋白对酵母菌株无毒性、不具有自活性。结论：可以利用酵母双杂交系统研究hPROKR2C端相互作用蛋白。

简介：Fibrillin11（FBN11）是植物质体中FBN蛋白家族的重要成员之一,比其他成员多300～500个氨基酸残基,说明其可能存在某些特异性结构和功能。本研究在水稻幼苗中扩增获得到了一个受非生物逆境胁迫诱导的OsFBN11基因的全长cDNA,该基因含有12个内含子和13个外显子。其编码蛋白的分子量为72.36kD,pI值为9.26。生物信息学分析结果表明,该蛋白含有无规则卷曲、α螺旋和β-折叠3种氨基酸二级结构,不含有跨膜结构域,蛋白亲水性强,PSORT软件预测该蛋白可能定位于叶绿体中。进一步对14种植物FBN11蛋白的同源性和5个物种该蛋白的保守结构域分析,发现该蛋白兼有典型的PAP-Fibrillin结构域和蛋白激酶PKc结构域。水稻全生育期芯片分析显示该基因主要在愈伤组织、叶片和根系中高水平表达。RT-PCR检测结果显示,该基因在水稻幼苗中受ABA、NaCl和干旱胁迫处理上调表达。上述结果表明,OsFBN11可能在水稻质体发育和抗非生物胁迫反应中发挥重要作用。

简介：根据我国流行的2型肾综合征出血热病毒（HFRSV）代表毒株汉滩型（HTNV）76-118株和汉城型（SEOV）R22株M节段的核苷酸序列,设计2型共同引物,建立了逆转录-聚合酶链反

简介：目的：探讨老年非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer,NSCLC）患者抗癌治疗前血浆纤维蛋白原（fibrinogen,FIB）和D-二聚体（D-dimer）的预后意义。方法：测定97例肺癌患者（肺癌组）及36例健康体检者（对照组）血浆D-dimer、FIB水平并进行比较,并分析其与NSCLC临床病理因素之间关系及预后价值。结果：肺癌组血浆FIB、D-dimer水平高于健康对照组（P〈0.05）。肺癌组FIB与TNM分期有关,D-dimer与淋巴结转移和TNM分期有关。单因素分析提示FIB、D-dimer、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期与总体生存时间（overallsurvival,OS）和无进展生存时间（progressionfreesurvival,PFS）相关,而多因素分析仅提示D-dimer、FIB是老年NSCLC患者的独立危险预后因素。结论：检测老年NSCLC患者抗癌治疗前纤维蛋白原和D-二聚体可以指导预后,为肺癌个体化治疗提供一定的参考价值。

简介：目的：探讨声辐射力脉冲成像（ARFI）技术与尿β2-微球蛋白（β2-MG）检测联合诊断高尿酸肾病（HUAN）的临床价值。方法：回顾性分析和比较192例原发性高尿酸血症患者（PHUA组）、162例HUAN患者（HUAN组）和360例健康体检者（对照组）的血尿酸（UA）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Cr）及尿β2-MG水平、二维超声检测结果及ARFI技术检测的肾皮质、髓质和肾窦SWV值,分析HUAN患者的SWV值与临床分期的相关性,其肾实质、肾窦SWV值与尿β2-MG水平的相关性。结果：162例HUAN患者中,肾实质回声增强76例（46.91%）,肾窦增宽89例（54.94%）,肾皮质髓质结石49例（30.25%）;192例PHUA患者和360例健康体检者肾皮质和髓质回声均无明显异常,肾窦结石分别为3例（0.83%）和5例（2.60%）。HUAN组肾皮质、髓质和肾窦SWV值分别为3.32±0.45m/s、3.02±0.51m/s和1.58±0.45m/s;PHUA组分别为2.92±0.64m/s、2.51±0.51m/s和1.41±0.35m/s;对照组分别为2.73±0.58m/s、2.26±0.43m/s和1.21±0.21m/s;三组SWV值均为肾皮质〉肾髓质〉肾窦（P〈0.05）。HUAN组尿β2-MG水平明显高于PHUA组和对照组（P〈0.05）。HUAN

简介：目的：观察Kozak序列（＋4G）对稳定转染的人淀粉样前体蛋白（hAPP751）-EGFP融合真核表达载体在CHO细胞中表达的影响,为APP的水解代谢研究提供细胞模型。方法：分别将含Kozak序列（＋4G）和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段亚克隆入pEGFP-N1表达载体,得到pEGFP-hAPP751（＋4G）和pEGFP-hAPP751重组质粒,转染CHO细胞,通过G418筛选稳定转染细胞株,再用倒置荧光显微镜挑取绿色荧光强的细胞进行亚克隆,并观察融合蛋白的表达强度和细胞定位,最后用EGFP抗体通过Western印迹检测融合蛋白。结果：PCR、酶切和测序证明将含Kozak序列（＋4G）和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段分别连入了真核表达载体pEGFP-N1中;荧光显微镜下观察pEGFP-hAPP751（＋4G）稳定转染细胞的细胞膜和细胞质产生较强的绿色荧光,其中在细胞质中成不均匀颗粒状分布,Western印迹检测到相对分子质量约156000的融合表达蛋白,与预期相符;pEGFP-hAPP751转染细胞,其绿色荧光十分微弱且在整个细胞均匀分布,Western印迹检测到相对分子质量约26000的EGFP,但检测不到预期的hAPP751-EGFP融合表达蛋白。结论：Kozak序列（＋4G）可以明显促进hAPP751的表达,获得稳定转染且高水平融合表达hAPP751-EGFP的细胞株。

简介：目的：探讨健胃愈疡颗粒对大鼠胃溃疡模型溃疡愈合及胃组织IL-1β蛋白表达的影响。方法：用Okabe改良法复制SD大鼠胃溃疡模型，观察溃疡指数，采用免疫组织化学法观察胃粘膜组织形态及IL-1β蛋白表达的变化。结果：①健胃愈疡组的溃疡指数明显低于模型组和法莫替丁组；②HE染色法显示健胃愈疡组较模型组及法莫替丁组黏膜厚度增加，溃疡床及溃疡周围炎性细胞浸润明显减少，纤维排列较为整齐。③IL-1β在正常胃组织呈阴性或偶有阳性信号表达，造模型7d后表达显著增加，健胃愈疡组和法莫替丁组低于模型组（P〈0.01）；14d后各组的阳性信号表达均降至接近正常。结论：健胃愈疡颗粒能保护大鼠胃粘膜组织，降低胃溃疡大鼠模型溃疡指数，改善溃疡愈合质量，减少胃组织IL-1β蛋白的表达，促进溃疡愈合。

简介：目的：构建一个牛dSl酪蛋白调控序列指导人溶菌酶（hLYZ）基因组序列的杂合基因座。方法：采用本实验室发明的连续3步缺口修复技术。将6个无痕连接的同源臂插入以pBR322为载体的骨架中，构成能进行3次连续基因抓捕的载体，利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术，分别抓捕牛aSl酪蛋白3’端调控序列（9kb）、hLYZ基因座序列（5kb）、牛axSl酪蛋白5’端调控序列（20kb），使这3个基因片段自动无痕地连接在基因抓捕载体上，形成牛oLSl酪蛋白一hLYZ杂合基因座。结果：实验经过PCR扩增、限制性内切酶酶切验证和序列测定，验证了hLYZ的基因组序列对牛仪S1酪蛋白编码基因组序列的精确置换。结论：这种修复技术为乳腺生物反应器高效表达大载体的制备提供了可行的思路及方法。

简介：绿脓杆菌是烧伤及外科手术感染的主要病原菌之一,而绿脓杆菌外毒素A(PEA)是该菌的最主要的毒力因子之一,极微量的PEA便可引起肝、肾等组织细胞死亡,进而导致肝、肾等多器官功能衰竭,这是临床上绿脓杆菌感染后高死亡率的主要原因。同时,PEA还严重影响创口的愈合。目前临床上对于绿脓杆菌感染的控制以及对PEA毒血症的防治尚无有效的方法与手段。本实验是利用基因工程手段克隆表

简介：目的观察豚鼠频闪光诱导性近视和形觉剥夺近视模型中短波视蛋白（S-opsin）表达差异,并初步探讨原因。方法36只普通级2周龄豚鼠随机分成三组：频闪组（FLM组,n=13）,形觉剥夺组（FDM组,n=12）,对照组（n=11）。FLM组,饲养笼具安装有频闪仪（频率0.5Hz）,笼具内装有发光二极管;FDM组豚鼠右眼用半透明眼罩遮盖,并确保豚鼠眼睑能正常活动;对照组豚鼠不予特殊处理。在造模第1天（0周）和第6周测量豚鼠右眼屈光度、眼轴长度和角膜曲率半径,并通过免疫荧光法观察S-opsin表达。结果第0周,FLM、FDM组与对照组屈光度、眼轴长度、角膜曲率半径差异均无显著性（P〉0.05）。造模6周后,与对照组相比,FLM组、FDM组屈光度变化值、眼轴长度变化值差异均有显著性（P〈0.05）,而角膜曲率半径变化值差异无显著性（P=0.358）,提示成功建立近视模型。FLM组与FDM组相比,屈光度变化值、眼轴长度变化值、角膜曲率半径变化值差异均无显著性（P〉0.05）。免疫荧光结果显示：FLM组视蛋白灰度值〉对照组视蛋白灰度值〉FDM组视蛋白灰度值,任意两组进行比较,差异均有显著性（P〈0.001）。结论频闪光和形觉剥夺均能建立近视模型,频闪光诱导性近视模型中S-opsin产生增加,而形觉剥夺性近视模型中S-opsin产生减少,说明两种近视模型的发生机制可能不同。

简介：研究了取食转Bt-cry1Ah基因玉米花粉对龟纹瓢虫Propylaeajaponica（Thunberg）体内解毒酶和中肠蛋白酶活性的影响。利用饲喂结合比色方法,比较龟纹瓢虫取食转Bt-cry1Ah基因玉米花粉和非转基因玉米花粉后体内α-乙酸萘酯酶、乙酰胆碱酯酶、谷胱甘肽-S-转移酶、中肠总蛋白酶、类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶的酶活性。结果发现：在解毒酶方面,取食Bt玉米花粉的龟纹瓢虫4龄幼虫和蛹的α-乙酸萘酯酶活性显著低于取食非Bt玉米花粉的龟纹瓢虫（对照组）,取食Bt玉米花粉的龟纹瓢虫的乙酰胆碱酯酶和谷胱甘肽-S-转移酶活性在各个发育时期与对照相比均无显著差异。在中肠蛋白酶方面,与对照组相比,取食Bt玉米花粉的龟纹瓢虫的总蛋白酶和强碱性类胰蛋白酶活性在各个发育时期均无显著差异;但取食Bt玉米花粉的龟纹瓢虫的弱碱性类胰凝蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性在蛹期显著低于取食非Bt玉米花粉的龟纹瓢虫。由此可见,龟纹瓢虫取食含有Cry1Ah杀虫蛋白的玉米花粉后,体内代谢解毒酶和中肠蛋白酶与Cry1Ah杀虫蛋白相互作用,可能会引起某些酶活性的变化。因此,转cry1Ah基因玉米花粉对龟纹瓢虫的潜在影响还需要进一步的研究。

简介：目的：研究严重急性呼吸系统综合征冠状病毒（SARS-CoV）N蛋白对甘油三酯和总胆固醇含量的影响。方法：检测分析144例SARS患者甘油三脂和总胆固醇含量在发病后的变化;将小鼠随机分组,分别注射生理盐水和SARS-CoVN蛋白,连续给药9d后检测小鼠血清中甘油三酯和总胆固醇含量的变化。结果：SARS患者的甘油三酯和总胆固醇含量随发病时间有升高变化（P〈0.05）,在发病40d前后甘油三酯和总胆固醇含量超标的病例数占本时间段内的病例数的比例显著高于其他时间段,而且超标的含量也明显升高。SARS-CoVN蛋白使小鼠体重明显高于对照组（P〈0.05）,甘油三酯含量在39和51d明显高于对照组（P〈0.05）,总胆固醇含量在21和39d也明显高于对照组（P〈0.05）。结论：SARS-CoVN蛋白可以升高小鼠的甘油三酯和总胆固醇的含量,其升高最为明显的时间段与SARS患者的甘油三酯和总胆固醇含量升高的时间段基本一致。由此推测,SARS-CoVN蛋白可能是促使SARS患者发病后甘油三酯和总胆固醇含量升高的重要原因。