简介：摘要目的建立一种灵敏、特异的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)，用于快速、准确地检测西藏环状病毒(Tibet orbivirus, TIBOV)。方法收集GenBank数据库中全部TIBOV基因序列，利用Clustal X 2.1软件进行比对，根据分析结果选择TIBOV VP4基因保守区域设计特异性引物、探针；以体外转录的RNA为标准品，建立检测TIBOV的TaqMan RT-PCR方法，绘制荧光定量标准曲线；对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价。结果引物与探针具有良好的特异性，对多种虫媒病毒无交叉反应。检测反应灵敏度为1.0×102拷贝/反应，在1.0×102～8拷贝/反应模板范围内具有良好的扩增曲线，同一样品重复检测循环阈值(Ct)的变异系数均小于1.5%。对西藏自治区、云南省、湖南省和广东省采集的蚊虫样本进行筛查，结果均为阴性。TIBOV模拟样本检出率为100%。结论该方法灵敏度高、特异性强，可用于TIBOV的常规监测。

简介：目的建立不同水源中GⅡ型诺如病毒(NoVGⅡ)实时荧光逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法,对某市疾病预防控制中心送检的10份疑似引起诺如病毒中毒的水样进行NoVGⅡ检测。方法以瓶装水、河水和生活污水为研究对象,采用硝酸纤维素膜-聚乙二醇(PEG)沉淀法富集病毒,对取样体积、病毒洗脱条件、PEG终浓度及PEG沉淀条件等进行了优化,提取病毒RNA、建立实时荧光RT-PCR检测方法;通过外加MS2计算方法的回收率,评价所建方法对水样中诺如病毒的回收效果。结果建立的方法对瓶装水、河水和生活污水中NoVGⅡ的平均回收率分别为(60.1±8.0)%、(22.0±6.5)%和(35.7±8.1)%,10份送检水样中3份检出NoVGⅡ。结论建立的实时荧光RT-PCR方法适用于瓶装水、河水和生活污水中NoVGⅡ的检测,饮用水被NoVGⅡ是引发某市人员中毒的原因之一。

简介：摘要DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。随着科学技术以及经济的发展，微生物的检验准确性在临床和生活健康以及饮食上都有着不可忽视的作用。本研究主要通过对聚合酶链式反应进行介绍，针对其特点深入研究其在微生物检验中的应用。

简介：

简介：摘要本文主要是聚合酶链式反应（PCR技术）进行了相关概述，然后就该技术在微生物检测中的具体应用进行了分析，最后提出了该技术在实际应用过程中所存在的问题以及具体的解决方式，希望能够以此来进一步提高聚合酶链式反应在微生物检测中的价值。

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简介：摘要目的探讨荧光定量聚合酶链式反应(QF-PCR)在快速产前诊断中的临床应用价值。方法应用QF-PCR技术对2018年5月7日至2019年5月7日于扬州市妇幼保健院产前诊断中心行产前诊断的1 190例产前羊水样本进行13、18、21、X及Y的非整倍体产前诊断并与核型分析结果对比。结果1 190例羊水QF-PCR共诊断出33例各种染色体异常，包括21-三体20例；18-三体4例及性染色体异常9例。结论作为常见的快速诊断方法，QF-PCR诊断结果快速、准确，但还不能完全代替传统的核型分析。

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简介：摘要目的探讨荧光定量聚合酶链式反应联合检测性传播疾病病原微生物的临床价值。方法选取来我院妇科、皮肤科和泌尿外科等就诊的疑有性传播疾病患者100例作为研究对象，用实时定量PCR（FQ-PCR）方法，对淋球菌（NG）、解脲支原体（UU）、人乳头瘤病毒（HPV）6/11型以及16/18型四种性传播疾病病原微生物进行定量检测，并与定性PCR结果比较。结果100例标本均对四种性传播疾病病原微生物进行FQ-PCR检测，结果按感染率从高到低依次排列为UU（36.00%）、HPV6/11（23.00%）、HPV16/18（13.00%）和TP（10.00%）；随机抽取50例标本，并对其分别进行FQ-PCR与PCR检测，结果显示两种检测方法之间对于四种性传播疾病病原微生物的阳性率并无明显差异（P>0.05）。结论临床上利用荧光定量聚合酶链式反应联合检测性传播疾病病原微生物具有快速便捷以及高效的优点，对监测、预防和控制以及预后评估等方面都具有较高的临床价值，值得广泛推广应用。

简介：建立免疫磁珠分离(ImmunomagneticSeparation,简称“IMS”)联合荧光定量聚合酶链式反应PCR(PolymeraseChainReaction,简称“PCR”)快速检测阪崎肠杆菌的方法。制备以生物素介导偶联的链霉亲和素免疫磁珠,优化偶联和捕获条件。合成阪崎肠杆菌ITS(InternalTranscribedSpacer简称“ITS”)靶基因序列的引物和探针,同时构建内参质粒(InternalAmplificationControl,简称“IAC”),建立能够实时监控反应过程的荧光定量PCR反应体系。在1mL体系中添加粒径为80nm的链霉亲和素免疫磁珠0.3mg,孵育30min,可获得80.5%以上的捕获效率。建立的基于内参的荧光PCR体系针对质粒检测时,Ct值(Cyclethreshold,简称“Ct值”)与模板拷贝数有着良好的线性关系(R2=0.998),IMS-PCR检测体系对阪崎肠杆菌菌液的检测灵敏度为33.3CFU/mL,可在3h内完成。针对4株阪崎肠杆菌标准菌株和5株非阪崎肠杆菌菌株的检测也显示出较好的特异性和稳定性,人工模拟样品的检测结果与采用国标法检测的结果完全一致,可用于快速检测样品中的阪崎肠杆菌和疾病预防。

简介：这个读dao,这个读chuan。王大光指着手机屏上的"氘"和"氚"两个字给儿子王加文说。儿子的脑袋汗津津的,他伸出手去撸了一把,自己的手便有些黏兮兮的,心下突然有些焦躁。儿子又问,爸爸,什么是链式反应?王大光记得在百度上查到过链式反应的含义:事件结果包含有事件发生条件的反应。虽然只是简单的一句话,可是要解释给还在上小学三年级的儿子听就有些费劲

简介：本文试验水芹、龙胆、旋复花、人黄、黄芪5种中药粗提物对鸭乙型肝炎病毒逆转酶(DHBV-RT)和DNA聚合酶(DHBV-DNAP)的抑制作用。结果表明,药物对DHBV-RT和DHBV-DNAP的抑制特性类似。5种中药粗提物对上述两种酶都有不同程度的抑制作用,按强弱顺序依次为水芹、旋复花、龙胆、大黄和黄芪。阳性对照药-膦羧基甲酸钠(PFA)对DHBV-RT和DHBV-DNAP的抑制作用均较强。提示,水芹等5种中药可能有抗乙肝病毒作用。

简介：目的：利用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ—RT—PCR)检测强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)mRNA的表达水平，并进行疾病的活动性相关分析。方法：用PrimerExpressv2．0软件，根据GenBank提供的序列，在人IL-2RαmRNA的第2和第3外显子之间设计一对引物和一条TaqMan探针。提取总RNA，加入已优化的一步法FQ—RT—PCR反应体系，扩增产物经凝胶电泳后切胶回收，并与pUCm—T载体连接。制备好的重组质粒转化感受态细胞进行克隆。经测序分析确定为特异性片段后，用T7RNA聚合酶转录为cRNA，作为FQ—RT—PCR系列浓度标准品。评价FQ—RT—PCR检测IL-2RαmRNA的特异性、线性、精密度和探针稳定性等。定量测定HLA—B27阳性活动组与阴性非活动组强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞IL-2RαmRNA基因的表达水平，结合血浆可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)浓度，探讨与炎症活动的相互关系。结果：成功构建了cRNA标准品。该方法的线性范围为7～107cells／ml，其批内CV8．4％，批间CV9．6％；扩增产物克隆的双向测序结果经BLAST比较、分析，证实为IL-2RαmRNA特异性片段。对各30例HLA—B27阳性与阴性的强直性脊柱炎的测定表明：与正常人对照组结果比较，HLA—B27阳性组与HLA—B27阴性组IL-2RαmRNA和sIL-2R都有明显增加(P<0．01)。IL-2RαmRNA对炎症活动评价的灵敏度为96．7％。结论：FQ—RT—PCR具有灵敏、特异、结果重复性好等优点；IL-2RαmRNA与sIL-2R比较更能反映强直性脊柱炎患者的免疫状态，可能为免疫药物的疗效评价和药物筛选提供基因表达水平上的信息。

简介：摘要目的研究端粒酶逆转录酶（hTERT）基因对纤维肉瘤生长的影响。

简介：摘要目的对聚合酶链反应（FQ-PCR）检测乙型肝炎病毒进行分析，了解其临床应用价值。方法用中山医科大学达安基因诊断中心设计的HBV-FQ-PCR试剂盒对101份临床血清标本同时进行PCR荧光定量和ELISA肝炎标志物检测，对检测结果进行分析。结果经过FQ-PCR检测，24份HbsAgHbeAgHbcAb都阳性的标本，其血清HBV-DNA也全部阳性，HBV-DNA拷贝数范围在1.4×105-7.0×109/ml之间；32份HbsAgHbeAbHbcAb都阳性的标本，阳性率为46.9%，HBV-DNA拷贝数范围在0-8.1×107/ml之间；14份HbsAb阳性的标本，阳性率为7.1%，HBV-DNA拷贝数范围在0-5.0×104/ml之间；18份全阴性的标本，阳性率为5.6%,HBV-DNA拷贝数范围在0-4.9×105/ml之间。结论FQ-PCR定量检测HBV-DNA灵敏度，特异性较高，能基本反映乙肝病毒在体内的真实复制情况，具有较高的临床应用价值。

简介：目的建立食品中沙门菌聚合酶链反应（PCR）的快速检测方法。方法根据沙门菌invA基因序列设计引物；氯化镁孔雀绿选择性增菌0到8h后，煮沸法提取DNA，用PCR扩增电泳。结果PCR法能特异性检测出食品中的沙门菌，扩增片段为389bp，增菌前的检出限为10^2CFU／g，增菌后为2CFU／25g。结论应用PCR检测沙门菌具有快速、特异、灵敏和简便的特点。

简介：摘要聚合酶链反应(PCR)是一种在试管进行的简便而快速的特异性DNA体外扩增技术，其基本原理与细胞内DNA复制的相似，但反应体系相对比较简单。主要应用于传统培养方法不能及时准确检出或敏感性太低或培养时间长的病原体的检测。PCR扩增能力极强、灵敏性极高，微量的样品污染便有可能导致假阳性结果的出现，为此，在实验操作中应谨防污染的发生，并设置严格的对照，以提高PCR结果的正确性。

简介：在本文中主要针对医学检验中聚合酶链反应的应用和进展做出了深入的探讨与分析，聚合酶链技术具有精准度高、操作方便等特点，在医学检验领域中得到广泛应用，文中主要从医学检验的不同的领域研究聚合酶链反应的具体应用，并且提出聚合酶链反应在医学检验中的具体要求，以此来进一步对医学检验中聚合酶链反应的应用进行优化，推动本次研究发展的同时，为相关工作人员提供良好的参考依据。

简介：目的：探讨人类端粒酶逆转录酶（hTERT）基因位点（rs2736100、rs2853676）单核苷酸多态性（SNP）与青岛地区人群乙肝肝癌的易感性。方法：采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCRRFLP）检测来自青岛地区的肝癌患者165例、非肝癌乙肝病毒感染者195例、健康对照者402例hTERT基因型分布。结果：（1）肝癌组患者rs2736100位点GG基因型频率显著高于对照组、非肝癌HBV感染者及所有非HCC者（均P〈0.05）,携带GG基因型者罹患肝癌的风险分别增加至2.13倍、2.17倍和2.14倍。（2）肝癌组患者rs2853676位AA基因型频率显著高于对照组、非肝癌HBV感染者及所有非HCC者（均P〈0.05）,携带AA基因型者罹患肝癌的风险分别增加至3.42倍、2.39倍和3.02倍。结论：hTERTrs2736100和rs2853676位点基因多态性与肝癌易感性相关。

简介：摘要目的分析放弃抗逆转录酶治疗的原因，为提高服药依从性提供科学的依据。方法采用回顾性调查分析的方法对某县放弃抗逆转录酶治疗患者治疗数据库中所有数据进行描述性统计分析。结果对该县数据库中放弃抗逆转录酶治疗患者中的96例治疗病例进行逐一回顾性分析，结果显示男性患者放弃治疗比例明显高于女性，同性恋途径感染放弃治疗比例高于其他感染途径患者，青壮年放弃治疗比例高于其他年龄组，因为职业原因居家治疗放弃治疗比例低于流动职业患者。结论提高服药依从性要从四个方面着手设立治疗随访期间的服药依从性的长期跟踪教育机制；要从提供或者设立稳定、牢固的职业岗位入手来提高服药的方便性和依从性；设立县级抗逆转录酶治疗药品储备库，提高药品的可及性；将纳入基本药品保障目录，设立抗逆转录酶治疗药品自购报销机制，提高患者服药的自律性。