简介：目的比较不同孔隙率的锶磷灰石(含5at%锶的羟磷灰石,Sr-HA)陶瓷在体外培养条件下对兔骨髓成骨细胞生物学行为的影响.方法抽取健康兔的骨髓组织,体外培养,诱导分化为成骨细胞,分别与孔径约为300μm-600μm、孔隙率分别为50%、60%、70%的Sr-HA以及孔隙率为70%的纯羟磷灰石陶瓷体复合,在不同时间点利用相差显微镜及扫描电镜观察,并进行碱性磷酸酶的定量检测.结果兔骨髓成骨细胞与不同孔隙率的Sr-HA陶瓷体外培养后,表现出典型成骨细胞的形态特征和生物学特性,Sr-HA多孔陶瓷有利于细胞的贴附、生长与增殖,并对细胞的功能无不良影响.其中,孔隙率为70%的Sr-HA陶瓷更有利于细胞向材料内部爬行.结论Sr-HA多孔陶瓷是较理想的骨组织工程支架材料,成骨细胞复合Sr-HA陶瓷用于骨缺损的修复,具有广阔的临床应用前景.孔隙率为70%的Sr-HA陶瓷由于具有良好的孔隙连通性,在促进成骨细胞生长方面表现出更佳的效果,较其他孔隙率的Sr-HA陶瓷更适用于骨组织工程支架材料.

简介：目的：分别构建Livin、Survivin基因短发夹RNA（shRNA）真核表达载体，探究联合转染Livin和Survivin真核表达载体对肝癌HepG2细胞生物学行为的影响。方法：分别设计并构建针对Livin、Sur—vivin基因shRNA真核表达载体pSD11-Livin和pSD11-Survivin，脂质体法单独或联合转染肝癌HepG2细胞，分空白对照组、质粒对照组、Survivin组、Livin组和共转染组。荧光定量PCR、Westernblot分别检测Livin、SurvivinmRNA及蛋白的相对表达量，MTT法检测细胞增殖的变化，TUNEL法检测细胞凋亡率。结果：针对Livin、Survivin基因的shRNA真核表达载体构建成功。共转染组Livin、SurvivinmRNA相对表达量分别为0．120±O．022、0．325±0125，与单独转染组相比显著降低（P〈0．05）；共转染组Livin、Survivin蛋白相对表达量分别为O．412±O．099、0．473±0．051，与单独转染组相比差异具有统计学意义（P〈0．05）。共转染组转染后48、60、72h细胞生长抑制率均显著高于单独转染组（P〈O．05），转染后48h细胞凋亡率明显上升（P〈O．05）。结论：针对Livin、Survivin基因的shRNA真核表达载体构建成功。联合转染pSD11-Livin和pSD11-Survivin更有效地降低了Livin和Survivin基因在HepG2细胞中的表达，更显著地抑制了肝癌细胞的增殖，促进了肝癌细胞的凋亡。

简介：摘要目的探讨环状RNA（circular RNA，circRNA）BICD2（circ-BICD2）对口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）谷氨酰胺代谢、细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的影响和可能机制。方法纳入2016年1月至2018年1月就诊于郑州大学第一附属医院口腔科，手术切除的35例OSCC患者的肿瘤组织及其癌旁正常组织样本。通过实时定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）和蛋白质印迹法检测OSCC组织与癌旁组织、OSCC细胞（CAL27、SCC9、SCC15）与正常上皮细胞HIOEC细胞中circ-BICD2、miR-296-5p和转录球蛋白2（transgelin2，TAGLN2）的表达水平。生物信息学方法、双荧光素酶报告实验、RNA结合免疫沉淀反应（RNA binding protein immunoprecipitation，RIP）实验检测circ-BICD2与miR-296-5p、miR-296-5p与TAGLN2的靶向关系。在CAL27和SCC9细胞中分别转染circ-BICD2小干扰RNAsi-circ-BICD2#1（敲低1组）、si-circ-BICD2#2（敲低2组）及阴性对照si-NC（siRNA空白组）；在敲低1组细胞中分别转染miR-296-5p抑制物anti-miR-296-5p（抑制物组）及其阴性对照anti-miR-NC（抑制物对照组）。在CAL27和SCC9细胞中转染miR-296-5p模拟物（miR过表达组）及其阴性对照miR-NC（miR空白组）。在miR过表达组细胞中转染TAGLN2（共转染组）及空白质粒pcDNA（共转染对照组）。运用细胞计数试剂盒（cell counting kit 8，CCK-8）、集落形成实验、流式细胞术、划痕愈合实验、Transwell实验等检测OSCC生物学行为。同时检测谷氨酰胺（glutamine，gln）消耗量、α-酮戊二酸（α-ketoglutarate，α-KG）产生量和ATP浓度观察其对细胞代谢的影响。蛋白质印迹法检测各组CAL27和SCC9细胞中的细胞周期素D1（cyclinD1）和谷氨酰胺水解酶（glutamine hydrolase，GLS1）蛋白表达量。取4周龄清洁级BALB/c雌性裸鼠12只，于腋下皮肤分别注射转染sh-circ-BICD2（敲低组）和sh-NC（对照组）后的SCC9细胞单细胞悬液，建立移植瘤模型，每组6只。注射32 d时断颈处死裸鼠并切除肿瘤，检测肿瘤质量及两组的circ-BICD2、miR-296-5p及TAGLN2的表达水平。结果OSCC组织中circ-BICD2、TAGLN2表达量（分别为2.54±0.71和1.86±0.15）显著高于正常组织（分别为1.00±0.35和1.00±0.11），miR-296-5p表达量（0.56±0.23）显著低于正常组织（1.00±0.32）（P<0.05）。敲低1组CAL27和SCC9细胞活力、克隆形成数、迁移率、侵袭细胞数、S期细胞比例、gln消耗量、α-KG产生量、ATP浓度、cyclinD1和GLS1蛋白表达均显著低于siRNA空白组，细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例显著高于siRNA空白组（P<0.05）。与抑制物对照组相比，抑制物组CAL27和SCC9细胞miR-296-5p表达显著降低，细胞活力、克隆形成数、迁移率、侵袭细胞数、S期细胞比例、gln消耗量、α-KG产生量、ATP浓度、cyclinD1和GLS1蛋白表达均显著升高，细胞凋亡率、G0-G1期细胞比例显著降低（P<0.05）。与miR空白组相比，miR过表达组CAL27和SCC9细胞TAGLN2 mRNA、蛋白表达量均显著降低。与共转染对照组比较，共转染组CAL27和SCC9细胞TAGLN2 mRNA、蛋白表达量均显著升高（P<0.05）。动物实验结果显示，与对照组相比，敲低组裸鼠的肿瘤体积、质量、circ-BICD2及TAGLN2的表达水平均显著降低，miR-296-5p表达水平显著升高（P<0.05）。结论OSCC组织和细胞中circ-BICD2均为高表达，干扰circ-BICD2可抑制OSCC细胞增殖、迁移侵袭、谷氨酰胺代谢以及肿瘤生长，促进细胞凋亡，其机制与调控miR-296-5p/TAGLN2分子轴有关。

简介：目的探讨microRNA-582-5p(miR-582-5p)在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及其对A549细胞增殖、侵袭的影响,以及对Rab27a基因的靶向调控作用。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测33例行手术治疗的NSCLC患者的癌组织、对应癌旁组织以及A549细胞株、人正常支气管肺上皮细胞株BEAS-2B中miR-582-5p的表达水平。采用miR-582-5pinhibitor(anti-miR-582-5p)和miR-582-5pmimics(mim-miR-582-5p)转染A549细胞,另分别转染miRNAinhibitor无关系列(anti-NC)和miRNAmimics无关系列(mim-NC)作阴性对照。采用双荧光素酶报告实验验证Rab27a与miR-582-5p的关系。采用MTT法和Transwell小室法检测各组细胞增殖、侵袭能力;采用QPCR和Westernblotting检测各组A549细胞中Rab27amRNA和蛋白水平。结果NSCLC组织和癌旁组织中miR-582-5p表达水平分别为0.26±0.09和0.83±0.10;A549细胞株和BEAS-2B细胞株中miR-582-5p表达水平分别为0.63±0.08和1.17±0.09,差异均有统计学意义(P<0.05)。anti-miR-582-5p组A549细胞24、48、72、96h后的增殖率分别为(115.68±4.34)%、(130.48±5.48)%、(138.95±5.55)%、(147.03±5.69)%,明显高于anti-NC组;mim-miR-582-5p组A549细胞24、48、72、96h后的增殖率分别为(91.31±4.18)%、(86.74±3.23)%、(79.45±3.20)%、(75.22±4.09)%,明显低于mim-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell小室结果显示,anti-miR-582-5p组A549细胞侵袭数为189±19,明显高于anti-NC组;mim-miR-582-5p组A549细胞侵袭数为55±8,明显低于mim-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-582-5p可抑制野生型Rab27a3'-UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型Rab27a3'-UTR的荧光素酶活性无影响。anti-miR-582-5p组A549细胞Rab27amRNA和蛋白表达水平分别为2.01±0.29和0.85±0.12,高于anti-NC组;mimi-miR-582-5p组A549细胞Rab27amRNA和蛋白表达水平分别为0.35±0.08和0.21±0.05,明显低于mim-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-582-5p表达可抑制Rab27a表达,从而抑制�

简介：摘要目的探讨Wnt/β-连环链蛋白（catenin）/TCF-4通路在肾癌细胞中的作用，并初步分析其可能的机制。方法分别构建β-catenin sh和TCF-4△Nsh的真核表达载体，并分别转染肾癌786-O细胞，采用CCK8检测转染后细胞的增殖能力，吖啶橙-溴乙锭（AO-EB）染色法检测转染后细胞死亡情况，Western印迹检测转染组、空转组以及空白组细胞TCF-4、Bcl-2、bax、Caspase-3的表达情况。结果转染β-catenin siRNA病毒后，细胞的增殖能力较空转组明显降低（0.443±0.145与0.910±0.721），细胞死亡率较空转组明显增加（16.38±5.32与6.61±1.04），TCF-4的表达受抑制、凋亡蛋白Caspase 3、bax表达增加、抗凋亡蛋白Bcl-2表达减低（均P<0.05）。转染TCF-4 siRNA病毒后，细胞的增殖能力较对照组明显降低，细胞死亡率较对照组明显增加，TCF-4的表达受抑制导致凋亡蛋白Caspase 3、bax表达增加，抗凋亡蛋白Bcl-2表达减低（均P<0.05）。结论Wnt/β-catenin/TCF-4通路在786-O肾癌细胞中具有可调节肾癌细胞的增殖和凋亡的作用，其机制可能为通过调节其下游的凋亡蛋白Caspase 3、bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平来实现。

简介：目的：探讨ADAM9、ADAM10基因沉默对腺样囊性癌高转移潜能细胞生物学行为的影响。方法：采用免疫组化检测15例腺样囊性癌原发灶和相应淋巴结转移组织中ADAM9、ADAM10蛋白的表达情况;采用RNA干扰方法抑制腺样囊性癌高转移潜能细胞系ACC-M、SACC-LM中ADAM9、ADAM10基因的表达,检测该基因沉默后对肿瘤细胞周期及体外增殖、转移能力的影响。采用SPSS11.0软件包对数据进行单因素方差分析及Fisher确切概率检验。结果：ADAM9、ADAM10蛋白在腺样囊性癌淋巴结转移组织中的表达比在原发灶组织中显著增高（P〈0.05）;ADAM9、ADAM10基因沉默后细胞增殖能力下降（P〈0.05）,肿瘤细胞出现S期阻滞;并且ADAM9、ADAM10基因沉默后,肿瘤细胞的体外侵袭能力显著下降（P〈0.01）。结论：ADAM9和ADAM10基因表达与腺样囊性癌的转移有关。ADAM9、ADAM10基因沉默可改变腺样囊性癌细胞体外增殖能力、侵袭能力等生物学特性。

简介：摘要目的探讨lncRNA GPC3-AS1在非小细胞肺癌组织中的表达及对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法qPCR检测非小细胞肺癌组织和细胞中lncRNA GPC3-AS1表达；将lncRNA GPC3-AS1 siRNA及其对照siRNA转入A549细胞中，qPCR检测lncRNA GPC3-AS1表达变化，MTT测定细胞增殖，划痕实验测定细胞迁移，Transwell测定细胞侵袭，免疫印迹检测细胞中PI3K/Akt信号通路蛋白表达。结果与非小细胞肺癌癌旁组织和人肺上皮细胞BEAS-2B相比，非小细胞肺癌组织和HCC827、H1650、A549细胞中lncRNA GPC3-AS1表达明显增加（P<0.05）。NSCLC组织中lncRNA GPC3-AS1表达与性别、年龄、病理类型及分化程度均无关，而与TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移均明显相关（P<0.05）。与沉默对照组相比，沉默GPC3-AS1组A549细胞中lncRNA GPC3-AS1表达显著降低（P<0.05），细胞增殖、迁移和侵袭能力亦显著降低（P<0.05）。沉默GPC3-AS1组和抑制剂组细胞中PI3K/Akt信号通路蛋白p-PI3K、p-Akt及其下游蛋白Cyclin D1和P70S6K表达较沉默对照组和对照组显著降低（P<0.05）。结论LncRNA GPC3-AS1在非小细胞肺癌中高表达，沉默LncRNA GPC3-AS1可抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭，其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。

简介：摘要目的探讨佛甲草提取物对肾母细胞瘤细胞的生物学行为的影响及其作用机制。方法不同浓度的佛甲草提取物作用于肾母细胞瘤细胞(美国典型菌种保藏中心)后，流式细胞术检测细胞周期，Transwell检测细胞迁移和侵袭，蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中细胞核增殖抗原(Ki-67)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-183表达。转染miR-183抑制剂至肾母细胞瘤细胞下调miR-183表达后，检测细胞周期、迁移和侵袭及Ki-67、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达改变。双荧光素酶报告基因验证miR-183与第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)调控关系。多组间比较采用单因素方差分析(SNK-q检验)。结果佛甲草提取物作用细胞后细胞周期G0～G1期增加(F＝171.952，P<0.05)，S期缩短(F＝229.976，P<0.05)，细胞迁移和侵袭数显著减少(F＝229.976、414.157，P<0.05)，细胞中miR-183表达显著降低(F＝524.898，P<0.05)，Ki-67和N-cadherin的蛋白表达显著降低(F＝489.091、314.763，P<0.05)，E-cadherin的蛋白表达显著升高(F＝547.549，P<0.05)。与anti-miR-NC组比较，anti-miR-183组细胞周期G0～G1期增加(t＝18.177，P<0.05)，S期缩短(t＝17.548，P<0.05)，迁移和侵袭细胞数显著减少(t＝23.476、22.082，P<0.05)，细胞中Ki-67和N-cadherin的蛋白表达显著降低(t＝24.601、22.808，P<0.05)，E-cadherin的蛋白表达显著升高(t＝26.833，P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-183可与PTEN靶向结合。结论佛甲草提取物可能通过下调miR-183表达阻滞肾母细胞瘤细胞周期进程，抑制细胞迁移和侵袭。

简介：摘要目的探讨叉头盒蛋白P3(FOXP3)基因沉默后对人结肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭等生物学行为的影响及其机制。方法人结肠癌细胞(SW480细胞)购自美国典型培养物保藏中心。将SW480细胞分为FOXP3-小发夹核糖核酸(shRNA)组(转染FOXP3-shRNA)、NC-shRNA组(转染shRNA空载的慢病毒)及Control组(仅加入培养基处理)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡；Transwell实验检测细胞侵袭；实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测FOXP3基因信使核糖核酸(mRNA)表达；蛋白质印迹法检测Wingless及int-1家族成员3A(Wnt3a)和β-连环蛋白(β-catenin)基因蛋白表达。两组间对比行t检验，多组间比较采用单因素方差分析(组间比较采用SNK检验)。结果FOXP3-shRNA组人结肠癌细胞中FOXP3基因mRNA表达、24、48、72、96 h后吸光度值、侵袭率、Wnt3a和β-catenin蛋白表达显著低于NC-shRNA组和Control组细胞[FOXP3基因mRNA表达分别为0.11±0.04比0.98±0.05、1.05±0.07，24 h吸光度值分别为0.59±0.04比0.65±0.05、0.73±0.06，48 h吸光度值分别为0.67±0.05比0.86±0.06、0.95±0.07，72 h吸光度值分别为0.76±0.06比1.15±0.07、1.26±0.08，96 h吸光度值分别为0.87±0.06比1.34±0.08、1.45±0.09，侵袭率分别为(23.49±1.99)%比(10.38±2.56)%、(10.38±2.56)%，Wnt3a分别为0.22±0.04比0.76±0.05、0.78±0.06，β-catenin分别为0.31±0.03、0.84±0.06、0.87±0.07]，凋亡率显著高于NC-shRNA组和Control组细胞[分别为(23.49±1.99)%比(10.38±2.56)%、(10.38±2.56)%]，差异有统计学意义(F＝20.042、17.233、11.145、13.427、16.538、16.135、54.182、19.341、26.177、16.135，P<0.05)。结论FOXP3基因沉默后可显著抑制人结肠癌细胞增殖和侵袭并促进细胞凋亡，其机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路基因表达有关。

简介：目的靶向高迁移率族蛋白1(highmobilitygroupprotein,HMGBl)的小干扰RNA(siRNA)转染胃癌HGC-27细胞株抑制HMGBl基因表达,探讨其对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法将靶向HMGB1的siRNA在脂质体介导下转染胃癌HGC-27细胞,Westernblot检测转染后细胞HMGB1蛋白表达变化,通过MTT实验检测转染后细胞的增殖活性,细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果空白转染组、control-siRNA组和HMGB1干扰组HMGB1蛋白相对表达水平分别为(0.940±0.059)、(0.927±0.051)和(0.393±0.033),HMGB1干扰组蛋白表达水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT和细胞划痕实验显示,与对照组相比,HMGB1干扰组细胞增殖缓慢,细胞迁移率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论应用靶向siRNA沉默胃癌HGC-27细胞HMGB1基因表达可抑制其增殖、侵袭和迁移能力,具有抗肿瘤作用,HMGBl有望成为胃癌治疗的一个潜在靶点。

简介：摘要目的构建DEK基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒表达载体，并探讨其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法采用RNAi技术，根据DEK基因的干扰序列，合成Oligo DNA,退火形成双链DNA，将其克隆到酶切后的小干扰RNA表达载体pLKO.1上，构建重组慢病毒载体pLKO.1-sh hDEK，经293T细胞包装，收集病毒上清液，感染细胞。采用实时逆转录PCR（RT-PCR）和免疫蛋白印迹法（Western blot）检测人肝癌细胞Bel-7402、Huh-7、SMMC-7721和HepG2中DEK的表达及感染慢病毒的各组细胞中DEK的敲低效率。分别通过细胞计数试剂盒-8（CCK8）增殖实验、流式细胞术、划痕实验检测细胞增殖能力、克隆形成能力、凋亡及迁移能力。两组间均数比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）。结果酶切鉴定和DNA测序结果证实，重组慢病毒载体pLKO.1-sh hDEK1及pLKO.1-sh hDEK3构建成功。RT-PCR和Western blot结果显示，肝癌细胞Bel-7402和Huh7中DEK的表达较高，pLKO.1-sh hDEK3能更有效地抑制DEK基因的表达（P < 0.05），因此选择pLKO.1-sh hDEK3重组慢病毒感染肝癌细胞Bel-7402和Huh7进行后续的功能实验。CCK8细胞增殖实验结果显示肝癌细胞Bel-7402和Huh7感染重组慢病毒后，细胞增殖能力与空白对照及阴性对照相比减弱（P < 0.05）；细胞凋亡结果显示敲低组细胞凋亡率高于空白对照及阴性对照组（P < 0.05）；细胞划痕实验结果显示敲低组划痕愈合率低于空白对照及阴性对照组（P < 0.05），差异均有统计学意义；而空白对照及阴性对照组比较，差异无统计学意义。结论靶向沉默肝癌细胞中DEK的表达，能够抑制细胞增殖及迁移能力，并诱导凋亡，为进一步研究DEK基因在肝癌中的作用奠定基础。

简介：摘要目的探讨血管生成素1(ANGPT1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其对肺癌细胞生物学行为的影响。方法收集40例NSCLC患者肿瘤组织及癌旁组织、NSCLC细胞系(A549、HCC827、H460和H1299)和人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)行研究检测。转染ANGPT1真核表达质粒至A549细胞(pc-ANGPT1组)，设定空载表达质粒转染空载组(pcDNA组)和空白对照组(Control组)。反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测ANGPT1基因信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达。细胞计数(CCK-8)检测细胞吸光度，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell检测细胞迁移及侵袭。两组间比较行t检验，多组间比较采用单因素方差分析(组间比较采用SNK检验)。结果NSCLC患者肿瘤组织ANGPT1基因mRNA和蛋白表达显著低于癌旁组织(mRNA表达为0.17±0.04比1.03±0.05，蛋白表达为0.27±0.06比0.83±0.07)，差异有统计学意义(t＝24.145、19.381，P<0.05)。A549、HCC827、H460和H1299细胞ANGPT1基因mRNA和蛋白表达显著低于BEAS-2B细胞(mRNA表达为0.11±0.03、0.32±0.06、0.28±0.03、0.37±0.06比1.05±0.08，蛋白表达为0.23±0.02、0.29±0.05、0.27±0.04、0.35±0.05比0.79±0.06)，差异有统计学意义(F＝15.447、13.516，P<0.05)。pc-ANGPT1组A549细胞ANGPT1基因mRNA和蛋白表达、细胞凋亡率显著高于pcDNA和Control组[ANGPT1基因mRNA为4.24±0.13比1.01±0.05、1.02±0.04，ANGPT1基因蛋白为1.14±0.08比0.25±0.04、0.24±0.04，细胞凋亡率为(19.27±3.65)%比(3.89±0.78)%、(3.82±0.81)%]，48、72、96 h细胞吸光度、细胞迁移数及侵袭数显著低于pcDNA和Control组[48 h吸光度值为0.36±0.05比0.49±0.07、0.52±0.06，72 h吸光度值为0.47±0.07比0.73±0.08、0.79±0.07，96 h吸光度值为0.61±0.08比0.97±0.11、1.03±0.09，细胞迁移数为(60.34±9.42)个比(122.73±12.59)、(121.25±14.16)个，细胞侵袭数为(29.84±5.37)个比(75.31±8.65)、(78.29±8.90)个]，差异有统计学意义(F＝34.166、21.542、29.942、8.929、11.375、13.983、31.135、24.567，P<0.05)。结论ANGPT1基因在NSCLC中呈低表达，可促进NSCLC细胞凋亡并抑制增殖、迁移及侵袭。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA二磷酸腺苷依赖的葡萄糖激酶反义RNA1(lncRNA ADPGK-AS1)对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、迁移和侵袭的影响及其调控机制。方法收集2017年2月至2018年11月在驻马店市中心医院和郑州大学第一附属医院接受RB手术治疗的RB患者39例39眼的术中瘤旁组织和瘤体组织标本，采用实时荧光定量PCR法检测ADPGK-AS1和miR-623在标本组织中的相对表达量。体外培养人RB细胞Y-79，将培养细胞分为小干扰RNA正常对照组(siRNA-NC组)、siRNA-ADPGK-AS1组、微小RNA正常对照组(miR-NC组)、miR-623组、siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-NC组和siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-623组，采用MTT法检测各组细胞增生率；采用Transwell小室实验检测各组细胞迁移及侵袭数；采用双荧光素酶报告实验检测Y-79细胞中ADPGK-AS1和miR-623的靶向关系；采用Western blot法检测不同干预组细胞中Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达量。结果与瘤旁组织比较，RB组织中ADPGK-AS1相对表达量升高，miR-623相对表达量明显降低，差异均有统计学意义(t＝40.522、48.497，均P<0.01)；与siRNA-NC组比较，siRNA-ADPGK-AS1组细胞中Ki-67蛋白相对表达量明显下降，Y-79细胞增生A值显著降低，差异均有统计学意义(t＝26.833、18.522，均P<0.01)；siRNA-ADPGK-AS1组细胞中MMP-2和MMP-9蛋白相对表达量明显低于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(t＝22.123、26.183，均P<0.01)；siRNA-ADPGK-AS1组迁移细胞数和侵袭细胞数均明显少于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(t＝12.385、19.201，均P<0.01)；双荧光素酶报告实验证实ADPGK-AS1可靶向结合miR-623；miR-623组细胞中Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量明显低于miR-NC组，差异均有统计学意义(t＝22.137、22.200、21.094，均P<0.01)；与miR-NC组比较，miR-623组Y-79细胞增生A值显著降低且迁移细胞数和侵袭细胞数均明显减少，差异均有统计学意义(t＝16.398、11.400、17.846，均P<0.01)；siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-623组细胞中Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白相对表达量均明显高于siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-NC组，差异均有统计学意义(t＝20.795、17.493、23.479，均P<0.01)；与siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-NC组比较，siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-623组增生A值明显升高且迁移细胞数及侵袭细胞数明显增多，差异均有统计学意义(t＝15.600、14.495、17.855，均P<0.01)。结论敲低ADPGK-AS1基因可抑制RB细胞增生、迁移和侵袭，其作用机制与miR-623的表达上调有关。

简介：摘要目的探讨Six同源盒蛋白4(Six homeobox 4，Six4)蛋白在肝癌中表达及对肝癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响。方法选取2018年6月到2019年6月新乡医学院第一附属医院收集的169例肝癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象，采用免疫组织化学分析肝癌组织和癌旁组织中Six4蛋白表达水平；采用常间回文重复序列丛集-Cas9(CRISPR-Cas9)在人类肝癌细胞HepG2中建立Six4敲除细胞系，命名为对照组和SIX4 KO组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞增殖；采用Transwell分析两组细胞迁移；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析上皮间质标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平，计量数据比较采用t检验。结果肝癌组织中Six4蛋白表达水平(169.59±18.59)高于癌旁组织(79.43±10.43)，差异有统计学意义(t＝4.179，P<0.05)。本研究成功构建Six4敲除细胞系。Six4 KO组细胞吸光值(1.21±0.19)低于对照组(2.15±0.28)，差异有统计学意义(t＝3.441，P<0.05)。对照组细胞EdU染色阳性率(76.45±8.90)%明显高于Six4 KO组细胞(31.63±7.43)%，差异有统计学意义(t＝4.693，P<0.05)。Six4 KO组细胞迁移数量(65.64±9.99)个低于对照组(119.48±12.08)个，差异有统计学意义(t＝3.748，P<0.05)。Six4 KO组细胞E-cadherin相对表达水平(1.49±0.21)高于对照组(0.33±0.11)，差异有统计学意义(t＝5.184，P<0.05)。Six4 KO组细胞间质标记物N-cadherin和Vimentin相对表达水平(0.58±0.11、0.68±0.23)低于对照组(1.74±0.28、1.89±0.26)，差异均有统计学意义(t＝4.274、4.109，P<0.05)。结论SIX4蛋白在肝癌组织中呈高表达，参与肝癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化等恶性细胞生物学行为。

简介：摘要细胞生物学是生命科学的一门基础科学。通过教师课前充分备课，及时更新教学内容，理论联系实际，使案例、病例讨论贯穿全程教学，并教会学生自主学习，同时注重双语教学，可以提高教学效果和质量。

简介：摘要细胞生物学在19世纪以前，许多学者的工作，都着眼于细胞的显微结构方面，主要从事于形态上的描述，而对各种有机体中出现细胞的意义，均未作出理论上的阐述和概括。1838-1839年，德国植物学家施莱登和动物学家施旺根据自己研究和总结前人的工作，首次提出了细胞学，现在，细胞生物学已经成为科学的研究领域，有很大的发展前景。

简介：摘要中药可抑制肺癌干细胞（LCSCs）增殖、侵袭、迁移及耐药蛋白表达，并诱导细胞凋亡，延缓自我更新，还能通过干预其生态位、免疫微环境及有氧糖酵解等多途径发挥抗肿瘤效应，其中涉及的生物标志物主要包括CD133、CD44、ALDH及ABCG2等，而相关的信号通路有Wnt/β-catenin、Hedgehog、Notch等。中医药干预LCSCs的研究总体偏少，多集中在基础研究，且选取的实验指标重复率高，涉及的细胞类型与信号通路较少；临床试验相对缺乏，欠缺与基础实验有机衔接。今后还需提高研究质量，并深入研究具有抗肺癌干细胞效应的中药，以推动肺癌的精准化治疗。

简介：摘要肝内胆管细胞癌(ICC)起源于二级胆管以上的肝内胆管上皮细胞，其生物学行为和治疗方式不同于原发肝癌。手术治疗仍然是目前最有效的治疗手段，微创技术、联合肝脏离断和门静脉结扎的二步肝切除术、区域淋巴结清扫以及肝移植是ICC手术治疗领域的重要进展。对传统检查手段的深入挖掘，包括术前增强CT、肿瘤标志物、白蛋白、血小板等，使可切除ICC的术前评估更全面，并对术后辅助化疗和新辅助化疗的筛选提供了进一步分层的依据。随着分子生物学的进步，大量针对ICC靶向治疗及免疫治疗的临床试验正在开展，并可见靶向治疗和免疫治疗的有效报道，然而尚无专门针对ICC的靶向药物获批应用。总之，随着对ICC生物学行为认识的深入，手术方案和综合治疗均有个体化治疗的趋势。

简介：摘要目的探讨IgG1重链（IGHG1）编码基因在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞（PANC-1）增殖、迁移及侵袭的影响。方法选取2018年6月至2020年12月期间在湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院进行手术治疗的65例胰腺癌患者，手术取癌组织及癌旁正常组织，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测胰腺癌组织及癌旁组织IGHG1 mRNA表达水平，分析IGHG1表达与胰腺癌临床病理特征的相关性；将PANC-1细胞分为对照组、IGHG1阴性对照组（si-NC）和干扰IGHG1表达组（si-IGHG1），分别检测PANC-1细胞IGHG1 mRNA表达、增殖、迁移、侵袭与凋亡，及上皮间质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及Bax、Bcl-2、caspase3蛋白表达。结果胰腺癌组织中IGHG1 mRNA表达水平为（2.47±0.23），显著高于癌旁组织的（1.03±0.12）（P<0.05），IGHG1表达与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴转移有关（P<0.05）；与正常组HPDE细胞mRNA（1.05±0.14）及蛋白（0.68±0.05）比较，对照组PANC-1细胞IGHG1 mRNA（2.67±0.23）及蛋白（0.97±0.11）表达水平显著升高（P<0.05）；与对照组和si-NC组相比，si-IGHG1组PANC-1细胞的细胞凋亡率[（5.34%±0.65%）、（5.54%±0.81%） vs （45.62%±2.84%）]、Bax[（0.34±0.05）、（0.32±0.04）vs （1.13±0.12）]、caspase3[（0.43±0.05）、（0.45±0.06）vs （1.22±0.13）]、E-cadherin[（0.78±0.12）、（0.81±0.11）vs （1.34±0.08）]蛋白表达水平显著升高（P<0.05），IGHG1 mRNA[（2.67±0.23）、（2.61±0.21）vs（0.87±0.11）]及蛋白[（0.97±0.11）、（1.01±0.10）vs （0.51±0.04）]表达水平、细胞存活率[（98.21%±0.56%）、（97.89%±0.67%）vs （46.67%±1.23%）]、迁移[（76.12%±2.72%）、（74.23%±3.41%）vs （28.55%±2.63%）]及侵袭[（85.32%±3.71%）、（83.27%±3.45%）vs （37.58%±2.63%）]能力、N-cadherin[（1.12±0.13）、（1.04±0.11）vs（0.61±0.08）]、Vimentin [（1.03±0.11）、（0.97±0.09）vs（0.49±0.07）]、Bcl-2[（0.87±0.08）、（0.89±0.09）vs （0.62±0.07）]蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论IGHG1在胰腺癌中高表达，且与胰腺癌的发生发展相关，干扰IGHG1表达可抑制胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及EMT。

简介：摘要目的观察三七总皂苷(PNS)对人膀胱癌T24细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响，并探讨其诱导凋亡的机制。方法2019年9月至2020年7月，选取人膀胱癌T24细胞株(购自中国科学院上海生命科学研究院)作为研究对象。将T24细胞分为对照组(加PBS)、实验组(低浓度组100 mg/L、高浓度组200 mg/L)，检测其被不同浓度的PNS处理12、24、48 h后的细胞活力；在经过PNS(100、200 mg/L)处理48 h后，使用细胞划痕实验、Transwell评估处理后T24细胞迁移、侵袭能力的变化，通过流式细胞仪检测干预后T24细胞凋亡状况，利用蛋白质印迹法(Western blot)法检测T24细胞在处理后活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和Hippo信号通路关键蛋白TEA结构域转录子1(TEAD1)、Yes协同蛋白1(YAP1)和大肿瘤抑制基因1(LATS1)的表达水平。组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果PNS处理48 h后，实验组细胞增殖活力显著低于对照组[(63.28±5.81)%、(39.38±3.34)%比(103.00±3.30)%，F＝126.045，P<0.05]；细胞划痕实验提示PNS处理后，实验组膀胱癌T24细胞系的迁移率显著降低[(25.99±2.25)%、(9.79±0.44)%比(52.50±2.29)%，F＝398.345，P<0.05]；Transwell结果说明PNS(100、200 mg/L)能够显著减弱T24细胞株的侵袭性[(249.67±28.01)、(152.67±7.64)个比(397±30.12)个，F＝77.856，P<0.05]；流式细胞仪结果显示，PNS(100、200 mg/L)处理48 h后，实验组细胞凋亡率[(9.55±0.39)%、(15.08±0.94)%]相对于对照组[(6.86±0.68)%]明显升高(F＝105.821，P<0.05)；Western blot结果表明，实验组中抗凋亡蛋白bcl-2(0.43±0.06、0.17±0.04比0.80±0.08)和Hippo信号通路中TEAD1(0.38±0.05、0.17±0.04比0.62±0.06)和YAP1(0.40±0.04、0.23±0.06比0.53±0.02)等蛋白的表达量显著降低，而cleaved Caspase-3(0.39±0.04、0.50±0.03比0.24±0.02)、LATS1(0.51±0.07、0.73±0.04比0.28±0.05)的表达明显上调(F＝87.713、55.109、38.325、53.658、47.578，P<0.05)。结论三七总皂苷能够抑制人膀胱癌T24细胞的增殖、迁移和侵袭等能力，并能诱导T24细胞发生凋亡，其中的机制可能与激活Hippo-YAP信号通路相关。