简介：目的体外诱导成人骨髓间充质干细胞（MSCs）向神经元样细胞分化，并探讨分化过程中多效蛋白（PTN）mRNA的表达。以了解MSCs向神经元样细胞分化的特性和机制。方法密度梯度离心加贴壁培养法分离成人MSCs，原代和传代培养。取第6代MSCs设对照和试验组进行诱导，诱导后30min至3d，观察细胞形态并计数。免疫细胞化学法和反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定分化后细胞神经细胞特异性表面标志神经元烯醇化酶（NSE）、微管相关蛋白（MAP）-2，胶原酸性蛋白（GFAP）和诱导前、诱导后12hPI’NmRNA的表达。结果接种24h后MSCs开始贴壁，呈圆形或椭圆形。3d后可见梭状细胞呈集落状生长，10～14d融合。第5～6代时呈现较均一的成纤维细胞样形态。诱导后胞体向胞核收缩；出现双极及多极细胞。12h变形细胞增多，细长突起相互连接。24h后变形细胞增多不明显。诱导后12h大部分细胞表达NSE（6439±0．07）％、MAP-2（60．05±0．09）％，未检测到GFAP的表达，RT-PCR半定量检测有NSEmRNA的表达（O．66±O．15）。实验组诱导后12h细胞有PrNmRNA的表达（0．689＋0．017）。结论建立了稳定的成人MSCs培养增殖体系，MSCs可体外诱导分化为神经元样细胞，在分化过程中有外观形态变化和特异性标志物NSE和MAP-2的表达，同时有PINmRNA的表达。提示PTN可能参与调控了MSCs向神经元样细胞的分化。

简介：目的观察BMSCs对胚胎腹侧中脑前体细胞（VMP）体外扩增和定向分化的影响,并分析其可能的营养机制.方法分别取胎龄11d大鼠胚胎VMP、成年大鼠BMSCs进行体外培养,并建立二者的共培养体系.体外扩增7d的VMP分为对照组、BMSCs分化液组、BMSCs＋VMP共培养分化液组,分别加入普通分化液、BMSCs分化液、BMSCs＋VMP共培养分化液进行诱导分化.观察细胞生长情况.分化期末行免疫荧光染色,分析比较3组细胞中酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞占总细胞数的比例.结果诱导分化7d后,对照组、BMSCs分化液组和BMSCs＋VMP共培养分化液组中细胞数分别较培养前扩增（44.13±4.75）倍、（60.63±5.25）倍、（64.00±7.63）倍,TH阳性细胞比例分别为（18.76±5.20）%、（23.49±4.10）%、（28.08±5.42）%,比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论BMSCs能够通过分泌营养因子有效促进VMP增殖并定向分化为多巴胺能神经元.

简介：目的对表达hTERT基因的大鼠骨髓间充质干细胞（Bonemesenchymalstemcells,BMSCs）进行成瘤风险评估及类肝样细胞分化能力的鉴定.方法将表达hTERT基因的大鼠BMSCs进行裸鼠致瘤试验评估成瘤风险,通过序贯法诱导成肝分化,于诱导后观察细胞形态变化、检测ALB和AFP的表达、糖原染色鉴定糖原储备能力.结果裸鼠致瘤实验提示表达hTERT基因的大鼠BMSCs无成瘤风险.成肝诱导后,细胞形态逐渐变为圆形;ALB仅在诱导第21天部分阳性表达,AFP在诱导第14天起阳性表达;糖原染色阳性.结论表达hTERT基因的大鼠BMSCs无致瘤风险,且具有类肝样细胞的分化能力.

简介：目的：通过研究Notch信号上调的人骨髓间充质干细胞（humanBoneMarrowMesenchymalStemCells，hBMSCs）对破骨细胞增殖调控的机制，探讨Notch信号在成骨-破骨偶联中的作用。方法用装载Notch信号胞内域NICD1的慢病毒载体（Lentivirus，Lv）转染hBMSCs，收集其分泌的条件培养液（ConditionedMedium，CM）。培养前破骨细胞系RAW264.7，模拟共培养环境。定量RT-PCR和ELISA测定转染前后hBMSCs表达和分泌的M-CSF的情况。cck-8和单板克隆试验测定RAW264.7的增殖情况。结果转染慢病毒后，hBMSCs表达和分泌的M-CSF均有所上调（分别为P＜0.01和P＜0.05）；CCK-8和单板克隆试验的结果显示hBMSCs分泌的CM使RAW264.7的细胞数量增加（均为P＜0.01）。结论Notch信号上调的hBMSCs可以通过影响M-CSF的表达和分泌，作用于破骨前体细胞，促进其增殖。

简介：目的体外培养成人脂肪间充质千细胞（ADMSCs），并应用血小板衍生生长因子-BB（PDGF—BB）诱导ADMSCs分化为平滑肌细胞。方法采用酶消化法和贴壁培养法分离培养ADMSCs，流式细胞仪对第5代细胞进行表面抗原和细胞周期的检测，然后对第5代细胞进行PDGF—BB诱导。于诱导后2周进行免疫组织化学鉴定。结果体外培养的ADMSCs呈梭形。细胞形态均一，传代稳定。干细胞相关标志CD29，CD44表达阳性。内皮细胞相关标志CD31和造血千细胞相关标志CD34表达阴性。ADMSCs中G0/G1，S，G2/M期的细胞分别占90．14％，3．77％，6．09％。定向诱导后倒置显微镜下观察细胞呈长梭状，胞膜清晰，无空泡，可重叠生长，融合后细胞形成“峰”和“谷”状，免疫荧光化学显示诱导组细胞α平滑肌肌动蛋白表达阳性。结论成人脂肪组织中含有间充质干细胞．且可经PDGF—BB诱导分化为平滑肌细胞。

简介：【摘要】目的：探究TBX18腺病毒是否能够成功转染骨髓间充质干细胞，并使其向心肌细胞分化。方法：取成年SD大鼠的四肢骨髓将其分离培养为骨髓间充质干细胞，构建重组腺病毒-绿色荧光蛋白Ad-TBX18载体，转染后的骨髓间充质干细胞设为试验组，并将只是转染绿色荧光蛋白的空载病毒组和空白对照组进行比较。应用免疫组化技术检测诱导后三组细胞肌钙蛋白I（cTnI）、α-横纹肌肌动蛋白（α-SCA-actin）阳性表达情况，并应用Western blot法检测cTnI、α-SCA蛋白表达水平。结果：骨髓间充质干细胞的转染效率高达95%。试验组的cTnI、α-SCA阳性表达率以及其蛋白表达水平均显著高于空载病毒组、空白对照组（P

简介：摘要目的探索骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell，BMMSC）来源凋亡囊泡对小鼠巨噬细胞系RAW264.7极化状态的影响及对牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）诱导的促炎状态巨噬细胞的调控，为牙周炎治疗提供依据。方法使用Operetta CLS高内涵分析系统动态观察星形孢菌素（staurosporine，STS）诱导的BMMSC的凋亡过程；使用场发射扫描电镜、动态光散射技术、流动电势法测量凋亡囊泡相关表征；使用Operetta CLS高内涵分析系统动态观察小鼠巨噬细胞系RAW264.7对5-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯（5-carboxy-tetramethylrhodamine，succinimidyl ester，5-TAMRA-SE）标记的凋亡囊泡的吞噬作用；采用实时荧光定量PCR检测精氨酸合酶-1（arginase-1，Arg-1）mRNA相对表达量；采用细胞免疫荧光、蛋白质印迹法检测凋亡囊泡对Pg来源的脂多糖（lipopolysaccharide from Pg，Pg-LPS）诱导的RAW264.7中诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）表达的影响；采用酶联免疫吸附测定法检测Pg-LPS诱导的促炎状态RAW264.7培养上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factro-α，TNF-α）的分泌情况。结果0.5 μmol/L STS处理12 h后小鼠BMMSC形态皱缩，周围有明显的凋亡囊泡产生；凋亡囊泡的粒径为100~1 000 nm，平均Zeta电势为-16.6 mV；RAW264.7可以通过伪足吞噬小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡；小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡联合白介素-4（interleukin4，IL-4）刺激的RAW 264.7 Arg-1 mRNA表达量（261.97±15.91）较单独IL-4刺激的 mRNA表达量（115.29±15.42）显著升高（P<0.01）；凋亡囊泡与Pg-LPS共同作用下，RAW 264.7 iNOS阳性细胞数量［（39.33±4.70）个］显著低于Pg-LPS单独诱导的RAW 264.7 iNOS阳性细胞数量［（95.33±4.70）个］（P=0.007），RAW264.7 iNOS蛋白相对表达量（5.84±1.05）显著低于Pg-LPS单独诱导的RAW 264.7 iNOS蛋白相对表达量（14.91±3.87）（P<0.01），RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α含量［（21 899.71±409.73） ng/L］显著低于Pg-LPS单独诱导下RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α含量［（71 296.50±2 344.22） ng/L］（P =0.003）。结论小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡可以调控巨噬细胞极化状态，并可减轻Pg-LPS诱导下巨噬细胞的促炎状态。

简介：摘要目的探索骨髓间充质干细胞（MSCs）对放射性肠炎（RE）肠黏膜修复的途径。方法体外分离、培养大鼠骨髓MSCs。将RE模型的大鼠采用随机数字表法分为治疗组[经尾静脉注射干细胞悬液1 mL（细胞浓度为1×106个/mL）]和对照组（注射等量生理盐水，每日1次，连续3 d），每组10只。每日观察两组大鼠的活动量、进食和进水量、体质量变化等。1周后处死大鼠获取小肠标本，HE染色观察肠黏膜的修复情况，电镜观察上皮细胞的超微结构，免疫组化染色观察小肠隐窝Bmi-1阳性干细胞增殖情况，采用Image-Pro Plus 6.0软件对Bmi-1阳性细胞数量进行分析。组间差异的比较采用t检验。结果成功分离得到大鼠骨髓MSCs，流式细胞仪鉴定：CD29、CD90、CD34、CD45阳性细胞比例分别为98.6﹪、99.6﹪、0.56﹪、0.89﹪。与对照组相比，治疗组大鼠移植1周后，体质量增加（190.30 g ± 13.23 g比235.00 g±14.30 g）；大鼠小肠黏膜上皮得到修复，绒毛高度增高（627.50 μm ± 40.55 μm比984.33 μm ± 61.80 μm）；上皮细胞超微结构较完整、清晰，隐窝Bmi-1阳性干细胞增殖数量增多[（60.67±9.63）个/mm2比（87.33 ±5.47）个/mm2]，差异具有统计学意义（P < 0.05）。结论骨髓MSCs能促进RE模型的大鼠肠黏膜的修复，这一作用可能是通过促进小肠隐窝干细胞的增殖发挥。

简介：目的建立以家兔为对象的胎龄期BMSC研究动物模型。方法通过人工授精方法,获得孕期3周的孕兔4只,行剖腹产术取出胎兔20只,冲取胎兔骨髓,以贴壁培养法进行体外扩增培养。测量第3代胎兔BMSC的生长曲线,克隆形成率,并进行成骨、成脂及成软骨诱导分化。另外,将原代细胞冻存30d后复苏,测量其第3代生长曲线,对冻存前后增殖能力的变化进行观察。扫描电镜观察胎兔BMSC与β-TCP形成细胞材料复合物的体外形态。将BMSCs-β-TCP复合物植入裸鼠皮下,于术后1、3、6个月分别取材,行HE、VG、Masson染色观察。结果胎兔来源的BMSC于倒置相差显微镜下观察,细胞饱满均匀,呈梭形或倒三角形状;传代后各代细胞形态未发生明显变化,生长曲线相差不大;成骨、成脂以及成软骨诱导观察到钙结节、脂肪空泡、黏多糖。冻存30d后复苏,其第3代生长曲线与冻存前相比未见明显变化。电镜下观察,与β-TCP复合7d后,细胞能均匀紧密贴合于材料上,伸展良好分布均匀。植入裸鼠皮不同时间点取材行HE、VG、Masson染色,均显示有新生骨组织生成。结论以家兔为研究动物模型,可以在胎龄期获取并分离得到BMSC,并可在异位构建组织工程骨,是间充质干细胞动物研究的新选择。

简介：目的建立c-Met慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞（hUMSC）,为治疗肝衰竭作为种子细胞.方法培养hUMSC,经流式细胞技术检测细胞表面表型,转染c-Met慢病毒载体,在荧光显微镜下观察转染效率,确定最佳多重感染复数（MOI）.采用嘌呤霉素抗性筛选稳定表达c-Met的hUMSC细胞系,采用Western-blot法检测细胞c-met蛋白表达量.结果P5代细胞高表达CD44、CD90和CD105抗原,不表达CD31、CD45和CD34相关造血细胞抗原,符合人脐带间充质干细胞的特性;构建成功的c-Met慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞最佳MOI=80,经嘌呤霉素筛药,在荧光显微镜下观察发现荧光阳性率为100%,且经Western-blot法检测证实该细胞过表达c-Met蛋白.结论成功构建过表达c-Met基因的脐带间充质干细胞,为进-步实验打下了基础.

简介：摘要：阿尔茨海默症是一种神经退行性疾病，目前还没有找到有效的治疗方法。间充质干细胞作为一种有着广泛应用前景的细胞治疗技术，近年来引起了研究人员的关注。间充质干细胞是一种具有自我更新和多向分化潜能的细胞，它们还能分泌多种细胞因子，这些因子有助于促进神经再生和修复。本文就间充质干细胞治疗阿尔茨海默症的研究进展做一综述，以期为未来的临床应用提供更深入的了解和指导。

简介：摘要宫腔粘连是由多种原因引起的子宫内膜基底层损伤，子宫内膜再生修复障碍并伴有纤维化的常见妇科疾病，严重危害女性的生育功能。间充质干细胞因其多向分化和自我更新等特性用于修复损伤的子宫内膜，在临床探索性研究中取得了一定的进展；间充质干细胞促进损伤子宫内膜的修复以改善患者的生育结局成为近年研究的热点。因此，本文聚焦不同来源的间充质干细胞在改善宫腔粘连患者生育结局中的作用，并分析其研究现状及存在的问题。

简介：摘要目的利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选与大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)特异性结合的核酸适配子(apt)，探讨apt与BMSCs的结合方式及能力。方法利用SELEX技术，以大鼠BMSCs为靶点，从构建的核酸文库中反复筛选、克隆、测序及分析，获得候选apt。流式细胞术测定和软件分析获得不同浓度(0、4、8、16、32、64、128、256 nmol/L)候选apt与BMSCs的结合曲线及平衡解离常数。胰酶消化实验探究apt与BMSCs结合的靶点，并观察apt体外捕获BMSCs的能力。结果流式细胞术与荧光共聚焦实验表明SELEX筛选第9轮文库与BMSCs结合能力最高。经序列分析适配子apt7与BMSCs的亲和力最高，平衡解离常数为(11.79±0.72) nmol/L。胰酶消化实验表明当胰酶消化细胞时间超过10 min后，apt7与BMSCs的亲和力下降甚至消失。体外捕获实验表明固定于培养皿上面的apt7能体外捕获骨髓细胞液中的大鼠BMSCs。结论本研究通过SELEX技术成功分离出能高亲和力、高特异性结合大鼠BMSCs的特异性适配子apt7，为进一步将适配子应用于组织工程支架表面招募循环干细胞研究提供了实验依据。

简介：摘要间充质干细胞(MSC)是一类具有自我更新和分化潜能的成体多能干细胞，可以调控造血微环境，具有低免疫原性及独特的免疫调节特性，可安全应用于免疫抑制和缓解疾病进展。免疫相关血液系统疾病的发病机制主要涉及免疫调节系统紊乱及造血微环境异常，基于MSC的免疫调节特性和造血调控能力，MSC在该类病的防治方面呈现出极大的临床应用潜力。为进一步优化MSC的临床应用策略，笔者拟就其在移植物抗宿主病(GVHD)、再生障碍性贫血(AA)、免疫性血小板减少症(ITP)、嗜血细胞综合征(HPS)等多种免疫相关血液系统疾病中应用的研究现状进行阐述。

简介：摘要支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)是早产儿的一种慢性肺部疾病，是导致早产儿预后不良的重要原因，BPD发病机制涉及多种影响未成熟肺发育的产前和产后因素。BPD的综合作用可导致肺的形态发生改变，破坏肺泡中的毛细血管气体交换，并导致BPD的病理和临床特征。目前临床上治疗BPD的手段仍然难以改善其预后。间充质干细胞(mesenchymal stem/stromal cell，MSC)是治疗多种疾病的一种有前途的创新疗法，因为MSC易于提取，并且具有低免疫原性、抗炎特性和再生能力。近年来，许多实验及临床研究证明MSC移植对BPD有一定疗效，因此MSC可能成为未来较有希望的治疗BPD的方法。然而，MSC可能促进肿瘤生长、异质细胞群的存在导致疗效不同，以及在治疗中的伦理问题等，使其在实际应用中仍存在一些挑战。该文综述MSC应用于BPD的作用机制、治疗方法以及使用MSC治疗BPD的研究进展。

简介：摘要终末期肝病(ESLD)指各种急慢性肝损伤所致的肝病晚期阶段，其中，失代偿期肝硬化及肝衰竭最为常见。目前肝移植是ESLD最有效的治疗方法，但应用受到多种因素限制。间充质干细胞(MSCs)因具备多向分化、旁分泌及免疫调节等生物特性，抗炎、抗凋亡和抗纤维化等治疗特性使其成为ESLD的候选治疗方法，但治疗效果受归巢率低、定植性差以及转化率低等影响。研究者旨在通过基因修饰、化学或缺氧预处理及三维培养等多种方式改良MSCs。现就MSCs优化方式及其在ESLD治疗中的研究现况进行综述，并进一步分析目前存在的问题。

简介：摘要重症急性胰腺炎病情进展快、并发症多、病死率高，目前临床治疗方法较为局限，有效控制和治疗其导致的器官功能衰竭及远期并发症具有重要意义。间充质干细胞可以通过促进组织再生、抗氧化、调节自噬、分泌抗炎因子等途径发挥作用。本文总结目前间充质干细胞干预重症急性胰腺炎的相关研究，展望外泌体的应用以及巨噬细胞极化的调控，为重症急性胰腺炎的治疗提供新思路和新靶点。

简介：摘要角膜病是全球最重要的致盲性眼病之一，所导致的角膜混浊严重损害视功能，如发生角膜溃疡可导致穿孔，甚至可丧失眼球。尽管角膜移植是临床上常规的治疗方法，但我国不仅角膜供体严重缺乏，与临床需求差距巨大，同时移植手术后的各类并发症难以避免。近年来，随着再生医学的飞速发展，人们发现间充质干细胞在适宜的诱导条件下可以分化为包括角膜组织在内的多种功能细胞，具有广阔的临床应用前景，在诸多方面为角膜病治疗和角膜盲复明提供新的思路和方法。本文旨在对间充质干细胞在各学科的诱导方法及角膜方面的研究状况进行综述。

简介：摘要多项临床研究已证实间充质干细胞治疗SLE患者安全且有效。为了规范间充质干细胞的临床应用，专家组对间充质干细胞治疗SLE的适应证、用法、输注次数及细胞数、输注前用药以及输注后合并用药，以及在合并妊娠、感染和肿瘤等情况时的应用制定了推荐意见。

简介：摘要骨质疏松症是一种系统性的代谢性骨骼疾病，其特征是骨量减少和骨微结构退化，导致骨骼脆性和骨折风险的增加。在成人中，骨髓间充质干细胞在骨骼中主要分化为成骨细胞和脂肪细胞，当其分化失衡，分化的脂肪细胞增多，成骨细胞减少，最终会演变成骨质疏松症。骨质疏松症越来越被认为是一个主要的公共健康问题，对全世界超过2亿人有影响，每年造成超过890万的骨折，其中以髋骨骨折为主。随着人口老龄化的加剧，花费在骨质疏松症的个人和社会成本逐年增加，这对公共卫生保健体系提出了挑战。因此，早期预防和诊断骨质疏松症的重要性不言而喻。此外，由于间充质干细胞有成骨潜能，且被发现可用于骨骼的修复和维护，自体、异体或转基因骨髓间充质干细胞移植可有效增加骨量和骨密度，增加骨机械强度，纠正骨代谢失衡，其有望成为骨质疏松症治疗的新策略和方法。本文将围绕骨质疏松症的诊断、治疗和间充质干细胞的应用现状展开如下综述。