简介：摘要目的探讨SD鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源外泌体(Exos)修复骺板缺损的相关机制。方法通过超离心提取鼠BMSCs来源的Exos，制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)负载的Exos(PLGA-Exos)支架，扫描电镜对支架进行表征。提取鼠软骨细胞，探究PLGA-Exos/RAW264.7细胞/软骨细胞共培养体系中巨噬细胞及软骨细胞相关基因的表达。将24只SD大鼠随机均分为A、B、C 3组，构建胫骨近端骺板缺损模型，将PLGA负载的BMSCs-Exos缓释棒(A组)及无Exos负载的PLGA棒(B组)分别填塞于骺板缺损区，C组为对照组(无填塞)。术后6周获取鼠胫骨标本，通过影像学X线分析、苏木精-伊红(HE)染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及巨噬细胞表型蛋白[M1型：诱导型一氧化氮合酶(iNOS)；M2型：Arg-1]染色，评估骺板缺损的修复效果。两组间比较采用独立样本t检验。结果PLGAs支架为三维多孔结构，孔隙分布均匀，具有较高的连通性。Exos被成功加载至PLGA中。PCR结果发现，在炎症微环境中，与对照组比较，BMSCs-Exos调控巨噬细胞高表达M2表型蛋白Arg-1(7.12±1.01比1.00±0.03，t＝10.47，P<0.01)，且促进软骨细胞COL-2及Sox9基因mRNA表达(8.25±0.74比1.00±0.12，t＝16.84，P<0.01；4.64±0.16比1.00±0.01，t＝38.64，P<0.01)。术后6周胫骨标本影像学及组织学分析显示，A组骺板缺损区可见结构致密、与正常骺板结构及功能相似新生透明软骨组织，B组骺板缺损区新生组织由大量的纤维组织及少量的透明软骨组成，C组骺板缺损区骨桥形成。骺板损伤区巨噬细胞相关的表型蛋白免疫组织化学染色显示，A组M2型巨噬细胞表型蛋白Arg-1染色呈阳性显色反应，M1型巨噬细胞表型蛋白iNOS染色为阴性；B组少量细胞质基质被Arg-1抗体染为弱阳性，iNOS染色为阴性；C组Arg-1抗体染色为阴性，而iNOS染色呈阳性反应。结论在炎症微环境中，BMSCs-Exos调控巨噬细胞向M2型编程，促进骺板缺损修复。

简介：摘要间充质干细胞（MSCs）是一种来自于中胚层的多能干细胞，具有高度的自我更新及多向分化潜能，并在适宜的条件下具有诱导分化为肌细胞、软骨细胞、成骨细胞、成脂细胞等多种细胞的能力。MSCs不仅具有多向分化潜能，而且还具有免疫调节功能，可抑制多种免疫细胞的性能，调节免疫应答。近年来，研究发现，来源于MSCs的外泌体（MSCs-Exo）具有与MSCs相似的组织损伤修复和再生功能。外泌体（exosome）是多种细胞分泌的膜外小囊泡，直径30 ~ 200 nm，可以转运核酸、脂质和蛋白质，参与细胞间的信息交流。与MSCs相比，外泌体用于临床疾病的治疗更加稳定，体内同种异体给药后免疫排斥反应的可能性较低，并可为各种疾病提供替代疗法。MSCs-Exo逐渐成为新的研究热点，本文将对MSCs-Exo的生物学特性、免疫调节作用和在临床疾病治疗中的研究进行综述。

简介：摘要外泌体能够通过运送核酸、蛋白质和脂质等多种活性物质介导细胞间的相互作用。间充质干细胞（MSCs）来源外泌体能够通过其携带的活性物质发挥促进肝脏修复再生、抑制肝脏炎症和肝纤维化、调控肿瘤进展等重要作用，为临床肝病的治疗提供新策略。现就MSCs来源外泌体在肝脏疾病中的研究进展进行综述。

简介：摘要目的探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）分泌的外泌体对损伤后肌腱细胞修复的影响及其机制。方法组织块贴壁法分离并纯化筛选出能稳定传代培养的hUC-MSCs，倒置荧光显微镜观察细胞形态，通过流式细胞术检测hUC-MSCs的免疫表型。应用诱导培养基诱导hUC-MSCs向成骨细胞、成软骨细胞和脂肪细胞分化并进行鉴定。运用高速离心法提取MSCs的分泌物外泌体（MSCs外泌体），用Western blot技术和电镜检测外泌体，用PKH67染色荧光法检测外泌体膜融合能力。40只Wistar鼠按随机数字表法分为肌腱损伤组和正常组，每组20只。肌腱损伤组：切断跟腱1周后用100 mg/kg戊巴比妥钠处死，取跟腱组织用胰蛋白酶消化得到损伤肌腱细胞。正常组：不做任何处理直接处死，与损伤组并行处理得到正常肌腱细胞。将外泌体与体外培养的肌腱细胞共培养，12，24，48，72 h后通过细胞计数CCK-8检测肌腱细胞增殖情况。hUC-MSCs外泌体处理细胞24 h后，采用Western blot、qPCR、免疫荧光方法检测外泌体对肌腱细胞转化生长因子-β（TGF-β）、骨形态发生蛋白（BMP）、血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）和炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。结果鉴定了hUC-MSCs，并成功分离hUC-MSCs外泌体。分离培养的MSCs呈梭形，丙氨酸氨肽酶（CD13）、整联蛋白β-1（CD29）、ecto-5'-核苷酸酶（CD73）、胸腺细胞表面抗原（CD90）和内皮素（CD105）呈阳性，人类白细胞DR抗原（HLA-DR）、造血祖细胞抗原（CD34）、白细胞共同抗原（CD45）呈阴性。分离出的外泌体经PKH67染色鉴定证实，在电镜下呈直径30~100 nm的圆盘、内部凹陷结构，Western blot检测高表达移动相关蛋白-1（CD9）和溶酶体相关膜蛋白3（CD63）。处理肌腱细胞后，CCK-8检测12，24，48，72 h细胞活性，结果表明肌腱损伤组显著高于正常组（P < 0.01），qPCR结果表明肌腱损伤组TGF-β（1.850 ± 0.127）、BMP（2.133 ± 0.398）、FGF（1.610 ± 0.223）、VEGF（2.207 ± 0.059）的mRNA表达显著高于正常组TGF-β（1.004 ± 0.105）、BMP（1.007 ± 0.145）、FGF（1.007 ± 0.140）、VEGF（1.001 ± 0.065）（P < 0.05），而肌腱损伤组IL-1β（0.102 ± 0.009）、TNF-α（0.130 ± 0.013）的表达显著低于正常组IL-1β（1.004 ± 0.113）、TNF-α（1.006 ± 0.134）（P < 0.01）。Western blot检测结果与qPCR检测趋势一致。结论hUC-MSCs分泌的外泌体通过上调生长因子TGF-β、BMP、VEGF、FGF的表达，抑制炎性因子IL-1β、TNF-α的表达，促进肌腱细胞生长，促进肌腱细胞损伤修复。

简介：摘要外泌体是来自细胞旁分泌的一种细胞外囊泡，因其含有多种生物活性因子，在细胞间通讯、诱导细胞分化中起重要作用。间充质干细胞来源的外泌体能够影响骨组织细胞增殖、通过信号通路调控诱导成骨、减少免疫炎性反应来促进骨缺损再生。近年来，外泌体与骨缺损再生之间的关系引起研究者的注意。本文对此方面的研究进展进行综述。

简介：摘要间充质干细胞(MSCs)是一种具有自我更新及多向分化能力的多能干细胞，MSCs来源的外泌体(MSC-EXOs)运载各种生物活性成分，如蛋白质、脂质、信使RNA(mRNA)、微小RNA(miRNA，miR)、长链非编码RNA(lncRNA)、环状RNA(circRNA)、DNA等，这些物质可以作用于邻周或远处的细胞，从而介导细胞各种生物学作用，如通过影响血管内皮细胞诱导血管再生。本文就间充质干细胞来源外泌体的生物发生和在各组织中促进血管再生的研究现状进行综述。

简介：摘要间充质干细胞(MSCs)具有免疫调节和促血管生成的特性，在细胞治疗中具有广泛的应用前景。外泌体是一类具有脂质双分子层结构的纳米级小囊泡。近年研究表明，外泌体具有与MSCs类似的生物学功能，可替代MSCs用于多种疾病的治疗。间充质干细胞来源外泌体(MSCs-exo)被广泛应用于包括葡萄膜炎、青光眼、视网膜和眼表疾病在内多种眼科疾病的治疗研究。然而，MSCs-exo内容物复杂，功能多样，为避免被免疫系统快速清除、提升靶向细胞特异性、减少不良反应，需要对外泌体进行不同策略修饰。如MSCs-exo内容物修饰后，使治疗因子过度表达，可最大限度地发挥其对特定眼病治疗的潜力和疗效，有望成为眼病治疗的新选择。本文重点阐述MSCs-exo应用和外泌体修饰的策略和现状，并探讨MSCs-exo修饰在眼病治疗中的潜在应用前景。

简介：摘要子痫前期是妊娠期常见并发症，严重威胁母婴健康，目前临床上尚无有效治疗方法。间充质干细胞来源的外泌体（mesenchymal stem cell-derived exosomes，MSC-exos）是纳米级别微粒子，携带有蛋白质、脂质和核酸等生物活性物质，是细胞间通讯的媒介。MSC-exos可参与免疫调节、促进细胞增殖与迁移、促进血管生成等多种重要生理过程，在组织修复和疾病治疗中发挥重要作用。近年来MSC-exos在治疗缺血性疾病、免疫功能障碍、炎性疾病等领域已逐渐成为研究热点。本文从MSC-exos的生物学功能出发，针对子痫前期重要发病机制如滋养细胞和内皮细胞功能障碍、母胎界面免疫失衡及氧化应激，阐述其治疗子痫前期的可行性，并归纳了近年来MSC-exos治疗子痫前期的动物实验研究进展。最后总结展望了MSC-exos作为一种新型无细胞治疗策略的优势与挑战。

简介：摘要间充质干细胞(MSCs)是一种具有自我更新与多向分化潜能的祖细胞，在特定条件下可分化成各种成体细胞，是再生医学研究中应用范围最广的细胞源。随着研究的不断深入，MSCs在组织修复与再生中的相关机制可能与其旁分泌活性有关，尤其是具有关键调控作用的外泌体(exosomes)，而外泌下、细胞外囊泡释放的多种生物活性物质可能是MSCs发挥各项生理功能的核心要素之一。本文将对MSCs来源外泌体在皮肤修复与再生中的研究进展进行综述，总结外泌体提高皮肤损伤修复速度与质量的机制与潜能。

简介：摘要干细胞移植在缺血性卒中的治疗领域颇具潜力，尤以骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）研究最为广泛。研究表明，BMSCs主要以旁分泌方式发挥其功能，其释放的外泌体表现出类似BMSCs的生物活性。BMSCs外泌体作为无细胞疗法，在缺血性卒中的研究领域已取得诸多进展。文章就BMSCs外泌体治疗缺血性卒中的研究进展进行了综述。

简介：摘要卵巢癌的发病率位居女性恶性肿瘤第三位。间充质干细胞（MSC）是肿瘤微环境中的重要组成部分，研究表明MSC可通过分泌多种细胞因子，促进上皮-间质转化（EMT）并增加肿瘤干细胞的比例等抑制或促进卵巢癌细胞增殖、侵袭和转移；MSC能够产生大量外泌体，其分泌的外泌体具有与MSC相似的生物学功能，是介导细胞间信息交流及传递的重要因素，但MSC来源外泌体对肿瘤的作用及机制仍不清楚。因此研究卵巢癌、MSC及其外泌体之间相互作用的机制可能会揭示治疗卵巢癌的新方法。

简介：摘要骨关节炎作为常见的关节慢性退行性病变，致残率随人口老龄化、肥胖率的上升及不合理锻炼等原因逐年升高。以间充质干细胞为种子细胞的软骨组织工程是目前治疗骨关节炎最具潜力的方法。越来越多的研究表明，间充质干细胞分泌的外泌体是其能够介导软骨修复及再生的主要原因。本文主要对间充质干细胞外泌体的产生、生物学特征及在软骨修复、再生中的作用做一总结，以期更好的阐明间充质干细胞外泌体治疗骨关节炎的机制。

简介：摘要尽管围生医学和新生儿医学已经取得了较大进展，但早产儿相关并发症的发病率及死亡率仍较高。目前支气管肺发育不良、脑损伤、坏死性小肠结肠炎、早产儿视网膜病变等早产儿相关并发症的防治仍是临床难点。在实验水平上，基于间充质干细胞的再生医学已经被证明是治疗这些疾病有前景的方法，但是其存在致瘤性、免疫排斥等潜在的风险。研究表明，外泌体是间充质干细胞发挥作用的关键介质。因此，近年来，外泌体已经成为治疗早产儿相关并发症的新选择。现对间充质干细胞来源的外泌体治疗早产儿并发症的研究进展作一综述。

简介：摘要目的探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）来源的外泌体移植后，对糖尿病大鼠创面愈合及炎症因子的影响。方法全骨髓贴壁法分离BMSCs，超速离心法提取BMSCs外泌体。选取清洁SD大鼠30只构建糖尿病大鼠创伤模型，成功建模后，将存活大鼠分为对照组（n＝13）、外泌体组（n＝14）；采取尾静脉途径，予外泌体组大鼠0.2 mg/ml外泌体悬液1 ml，同时予对照组等剂量PBS溶液注射；采用Image J软件分析大鼠的创面愈合率，并通过HE染色评估创面组织中炎症程度；采用酶联免疫分析法（ELISA）检测大鼠创面组织中TNF-α、IL-1β、IL-10的浓度；采用Western blot检测创面组织中TLR-4的表达。结果流式细胞术鉴定BMSCs表面抗原，CD29、CD90高表达，CD40低表达；超速离心法获取的BMSCs外泌体直径分布于60～160 nm；与对照组比较，外泌体组大鼠创面愈合率较高，且组织中炎性因子浓度较低，TLR-4表达较低（均P<0.05）。结论BMSCs外泌体可通过调控TLR-4的表达降低糖尿病大鼠创面组织的炎症程度。

简介：摘要目的探讨人脐带间充质干细胞来源的外泌体（human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosome, hucMSC-ex）对缺血缺氧神经细胞增殖、迁移、凋亡、自噬等的影响及其机制。方法培养原代神经胶质细胞，建立氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation, OGD）模型，hucMSC-ex孵育之后，MTT检测细胞增殖抑制率，流式细胞技术检测细胞凋亡，RT-PCR检测凋亡基因mRNA表达水平及Western blot检测其对凋亡蛋白、自噬蛋白及PI3K/AKT信号表达变化。计量资料多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。结果MTT实验结果显示OGD可抑制细胞增殖，hucMSC-ex孵育2 h后，细胞增殖抑制率较对照组下降（P<0.05）；流式细胞技术检测结果显示hucMSC-ex孵育之后可以减少细胞凋亡（P<0.05）；细胞迁移实验显示OGD可降低细胞迁移能力（P<0.01），外泌体孵育之后细胞迁移能力增强（P<0.05）。RT-PCT技术及Western Blot检测结果显示，OGD可以诱导细胞发生凋亡与自噬，hucMSC-ex可激活PI3K/Akt信号通路，抑制Bax与Caspase-3蛋白（P<0.05）及mRNA（P<0.01）表达水平，促进Bcl-2蛋白（P<0.05）及mRNA（P<0.01）表达水平；同时，hucMSC-ex可抑制Beclin-1、Atg3和LC3-Ⅱ蛋白表达水平（P<0.05）及Beclin-1、Atg3基因mRNA表达水平（均P<0.01）。结论hucMSC-ex可促进OGD神经胶质细胞的增殖、迁移，抑制其凋亡及自噬水平，对缺血缺氧损伤性神经胶质细胞具有修复能力，其保护机制与PI3K/ Akt信号通路相关。

简介：摘要目的探讨人诱导多能间充质干细胞来源外泌体（iMSC-Exos）对肺泡巨噬细胞（AM）焦亡的作用及机制。方法通过旋转超滤法提取人诱导多能间充质干细胞（iMSC）培养上清液中的外泌体，并利用透射电镜、蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）、高分辨率可调电阻脉冲对提取的外泌体进行鉴定。体外培养大鼠AM细胞株NR8383，取对数生长期细胞分为3组：对照组在AM上清液中加入等量磷酸盐缓冲液（PBS）；脂多糖/三磷酸腺苷（LPS/ATP）组AM经500 μg/L的LPS刺激23 h后再加入5 mmol/L的ATP刺激1 h诱导细胞焦亡；iMSC-Exos组将100 mg/L iMSC-Exos与NR8383细胞共孵育3 h后再给予LPS和ATP刺激。采用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）和乳酸脱氢酶（LDH）分析检测细胞毒活性；采用免疫荧光法观察细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1（caspase-1）表达；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测AM释放炎性因子白细胞介素（IL-1β、IL-18）水平；采用Western blotting法检测NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体途径及焦亡相关蛋白消皮素D（GSDMD）表达。结果提取的外泌体经透射电镜观察为圆形囊泡，Western blotting显示外泌体标志物CD63、CD9呈阳性表达，高分辨率可调电阻脉冲检测显示粒子平均直径130 nm，提示外泌体提取成功，能被AM吞噬。与对照组相比，LPS和ATP刺激后，细胞活性下降〔（0.56±0.05）%比（1.06±0.07）%，P<0.01〕，坏死物质LDH释放增加（U/L：1 218.86±22.73比188.30±1.61，P<0.01），炎性因子分泌增加〔IL-1β（ng/L）：958.91±32.78比194.63±5.14，IL-18（ng/L）：870.89±21.86比288.85±24.48，均P<0.01〕，细胞凋亡率〔（55.35±6.19）%比（12.01±1.32）%，P<0.01〕及caspase-1表达均升高（荧光强度：41.06±3.65比2.80±0.54，P<0.01），提示LPS联合ATP可成功诱导细胞焦亡。与LPS/ATP组相比，给予iMSC-Exos预处理后，AM活性增加〔（0.81±0.05）%比（0.56±0.05）%，P<0.01〕，LDH释放减少（U/L：535.05±42.55比1 218.86±22.73，P<0.01），炎性因子分泌减少〔IL-1β（ng/L）：381.82±19.50比958.91±32.78，IL-18（ng/L）：533.77±31.54比870.89±21.86，均P<0.01〕，细胞凋亡率〔（19.74±2.96）%比（55.35±6.19）%，P<0.01〕和caspase-1表达均下降（荧光强度：12.16±1.31比41.06±3.65，P<0.01），同时NLRP3炎症小体途径及焦亡相关蛋白GSDMD表达水平受到显著抑制〔NLRP3蛋白（NLRP3/β-actin）：0.62±0.06比1.89±0.11，活化的caspase-1蛋白（cleaved caspase-1/β-actin）：0.42±0.07比1.22±0.17，GSDMD蛋白（GSDMD/β-actin）：0.57±0.05比1.22±0.05，均P<0.01〕。结论iMSC-Exos抑制了LPS/ATP诱导的AM焦亡和炎性因子表达，可能与靶向抑制NLRP3炎症小体途径有关，提示iMSC-Exos能抑制AM焦亡，发挥抗炎效应。

简介：摘要脊髓损伤后继发性损伤及胶质瘢痕，使神经细胞在微环境中出现再生障碍，导致治疗困难。间充质干细胞(MSCs)具有多向分化、自我更新能力、参与免疫调节等功能，可用于治疗脊髓损伤，但存在不易通过血脊屏障、高致瘤性等缺点。MSCs外泌体是由MSCs分泌的纳米级外囊泡，包裹多种活性物质，在脊髓损伤研究中具有极强的神经修复作用，且具有易通透性、稳定性及低致瘤等优点，弥补了MSCs治疗的缺点，有望替代MSCs用于治疗脊髓损伤。笔者对MSCs外泌体的生物学特性及其在脊髓损伤治疗中的作用机制作一综述，为脊髓损伤的治疗提供参考。

简介：摘要肝衰竭是由于各种致病因素造成肝细胞大量坏死，超过肝脏的自我修复能力，是一种严重的临床综合征，病情进展迅速，病死率高。肝移植是肝衰竭最有效的治疗手段，但是存在供肝不足、费用高昂等弊端。间充质干细胞在肝衰竭的临床疗效已得到证实，但其应用也受到一定限制，基于干细胞的无细胞疗法，尤其是间充质干细胞来源的外泌体成为近年来的研究热点。现就间充质干细胞源性外泌体在肝衰竭中应用的研究进展进行综述。

简介：摘要间充质干细胞作为一种具有免疫调节功能的成体干细胞，在肺部疾病中有很高的应用价值。随着对其作用机制研究的深入，在间充质干细胞与其条件培养基的作用对比研究中，研究者发现间充质干细胞的作用主要是通过其条件培养基产生的，因此条件培养基中的重要成分外泌体成为了新的研究热点。本文综述了间充质干细胞外泌体在常见肺部疾病中的治疗作用及其可能的机制，希望为间充质干细胞外泌体在肺部疾病中的治疗应用提供参考依据。

简介：摘要目的探讨脐带间充质干细胞（ucMSC）外泌体对急性皮肤创面愈合的影响。方法用超高速离心法提取ucMSC外泌体，经透射电镜观察、Western印迹检测外泌体表面标志物CD63和TSG101和粒径分析鉴定外泌体。体外培养3~5代人皮肤成纤维细胞（HSF），分别用含0（阴性对照组）、1、2 μg/ml外泌体的高糖DMEM培养基孵育24 h（分别为1、2 μg/ml组），CCK8法检测ucMSC外泌体对HSF增殖活力的影响。取24只8周龄雄性BALB/c小鼠构建全层皮肤损伤小鼠模型，按随机数字表等分为ucMSC外泌体组和磷酸盐缓冲液（PBS）组，距创缘约1 mm处等距皮下多点注射ucMSC外泌体悬液或PBS。术后第0、4、7、10、14天观察两组小鼠创面并计算创面残余面积百分比，术后第7、14天取创面组织后行HE和Masson染色，观察皮肤组织结构变化。术后第14天收集两组小鼠创面皮肤组织，实时定量PCR和Western印迹检测Ⅰ型胶原蛋白、纤连蛋白、血管内皮生长因子mRNA和蛋白的表达水平。统计分析采用单因素方差分析、LSD-t检验、双因素重复测量方差分析及非配对t检验。结果透射电镜下，ucMSC外泌体呈椭圆形，直径约100 nm；Western印迹检测显示，ucMSC外泌体表面蛋白CD63、TSG101表达阳性；粒径分析显示，96.2% ucMSC外泌体直径30 ~ 150 nm。CCK8法检测显示，外泌体1 μg/ml组和2 μg/ml组HSF相对活力（0.97 ± 0.05、1.08 ± 0.07）均显著高于阴性对照组（0.71 ± 0.04），t值分别为2.00、7.05，均P<0.05，且2 μg/ml组HSF相对活力显著高于1 μg/ml组，t = 5.09，P<0.05。术后第4、7、10、14天，ucMSC外泌体组创面残余面积百分比均显著低于PBS组（均P<0.05）。HE和Masson染色显示，与PBS组相比，ucMSC外泌体组小鼠创面新生皮肤组织中毛囊、腺体以及肉芽组织更丰富且有新生血管形成，胶原排列也更整齐。实时定量PCR和Western印迹实验显示，ucMSC外泌体组Ⅰ型胶原蛋白、纤连蛋白、血管内皮生长因子mRNA和蛋白的表达均显著高于PBS组（均P<0.01）。结论皮下注射ucMSC外泌体可以促进小鼠急性皮肤创面愈合，可能与ucMSC外泌体促进小鼠创面组织中细胞外基质和血管内皮生长因子的合成及促进HSF增殖有关。