简介:BACKGROUND:TheprogressivedegenerationofdopaminergicneuronsinParkinson’sdiseaseisassociatedwithanactivatedglialreaction,combinedwithaninflammatoryprocess.Theseresponsesleadtotheproductionofcytokines,suchasinterferon-γ,tumornecrosisfactor-α(TNF-α),andinterleukin-1β.Inaddition,14-3-3proteinisacomponentofLewybodiesinParkinson’sdisease.OBJECTIVE:Toobservetheexpressionof14-3-3γandζprotein,aswellasTNF-α,inmousemicroglia,aswellaschangesafterlipopolysaccharide(LPS)activation.Toinvestigatepossiblemechanismsofdopaminergicneuronalinjuryduetoactivatedmicroglia.ToandclarifytheimmuneresponsemechanismsofParkinson’sdisease.DESIGN:Randomizedcontrolledobservation,cellstudy.SETTING:LaboratoryofDepartmentofNeurology,theAffiliatedUnionHospitalofTongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology.MATERIALS:TheBV-2immortalizedmurinemicrogliacelllinewaspurchasedfromChinaUnitcellcenter.LPSwasprovidedbySigmaCompany.CellcultureswerepurchasedfromGibco.Phospho-(Ser)14-3-3bindingmotifantibodywaspurchasedfromSantaCruzBiotechnologies.FITCwasprovidedbyLinfeiBiotechnology,Wuhan,China.TNF-αELISAwasprovidedbyJingmeiBiotechCo,Wuhan,China.TheflowcytometerwasprovidedbyBectonDickinson,Canada.METHODS:ThepresentexperimentwasperformedattheLaboratoryofDepartmentofNeurology,theAffiliatedUnionHospitalofTongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnologyfromApriltoDecember2006.Themicroglialcellline,BV-2,wasculturedinvitroandstimulatedwithLPSfor2,6,12,and24hours.BV-2cultureswithoutLPSwereusedascontrols.MAINOUTCOMEMEASURES:Expressionof14-3-3γproteinwasdetectedbyflowcytometry.14-3-3ζpercentageexpressionandthemeanfluorescenceintensitywasdetectedbyimmunofluorescence.TNF-αexpressionwasdetectedbyELISA.RESULTS:14-3-3γproteinexpressionanalysis:followi
简介:目的分析巨噬细胞不同极化状态下14-3-3ηmRNA表达及其生物信息,并构建14-3-3η蛋白原核表达载体,为研究其在巨噬细胞活化中的作用提供实验基础。方法提取C57BL/6小鼠骨髓原代巨噬细胞mRNA,反转录后用实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测14-3-3ηmRNA水平的改变。运用ProtParamtool、SOPMA等在线软件对14-3-3η氨基酸序列进行分析。以小鼠巨噬细胞cDNA为模板,采用PCR的方法扩增14-3-3η基因,插入pGEX-4T-3载体中,双酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21菌株,用异丙基硫代半乳糖苷诱导其原核表达并纯化,SDS-PAGE法和Westernblotting法对融合蛋白进行鉴定。采用Graphpadprism5软件进行统计分析。样本比较均采用配对t检验。结果M1型巨噬细胞14-3-3η表达降低,M2型趋势相反。生物信息学表明14-3-3η蛋白其二级结构中主要为α-螺旋(占62.60%)且疏水性较差(疏水系数为-0.607)。酶切和测序结果提示重组质粒pGEX-4T-3-14-3-3η构建成功。SDS-PAGE和Westernblotting结果表明融合蛋白谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-14-3-3η成功表达和纯化。结论本实验对14-3-3η进行了初步的生物信息学分析,成功表达并纯化融合蛋白GST-14-3-3η,为14-3-3η在巨噬细胞极化上的功能研究奠定了实验基础。
简介:hPFTAIRE1(PFTK1),Cdc2相关的蛋白质kinase,高度在人的大脑被表示。它在Hela房间展出细胞质的分发,尽管它在它的N终点包含二个原子本地化信号(NLS)。到为它的底层和规章的部件的搜索,我们由把全身的hPFTAIRE1用作一个诱饵屏蔽了一个二混血儿的图书馆。四14-3-3isoforms(贝它,epsilon,希腊语字母的第七字,字形物)被识别与hPFTAIRE1交往。我们在hPFTAIRE1发现了一个通常认为的14-3-3绑定一致主题(RHSSPSS),它与它的第二NLS重叠了。RHSSPSS主题的删除或有在保存有约束力的主题的翼的Ser119的替换废除了在hPFTAIRE1和14-3-3蛋白质之间的特定的相互作用。变异的S120AhPFTAIRE1也显示出一个弱相互作用到14-3-3蛋白质。结果建议Ser119为在hPFTAIRE1和14-3-3蛋白质之间的相互作用是关键的。当熔化了到绿荧光灯的蛋白质(GFP)的C终点时,所有hPFTAIRE1异种在Hela房间和人的neuroblastoma房间(SH-SY5Y)的细胞质散布了,显示有14-3-3蛋白质的那绑定不贡献潜水艇hPFTAIRE1的细胞的本地化,尽管绑定可以涉及它的发信号的规定。
简介:摘要目的探讨CDC25B和14-3-3δ蛋白在膀胱癌中的表达与病理分级、临床分期的关系,为临床上判断膀胱癌的恶性程度和膀胱癌的新的治疗方法提供理论依据。方法采用免疫印迹(WesternBlot)法检测64例膀胱癌、9例癌旁正常膀胱粘膜中CDC25B和14-3-3δ蛋白的表达。1)观察CDC25B和14-3-3δ蛋白在膀胱癌和癌旁正常膀胱粘膜中的表达情况;2)分析CDC25B和14-3-3δ蛋白在膀胱癌中的表达与病理分级和临床分期的关系。结果所测组织中均有CDC25B的表达,膀胱癌中呈高表达;并且在膀胱癌各病理分级、临床分期间的表达亦有差异。CDC25B随着肿瘤的分化程度降低而表达逐渐增加,CDC25B在浸润性膀胱癌中表达高于非浸润性膀胱癌。14-3-3δ蛋白在癌旁正常膀胱粘膜中大量表达,在膀胱癌中均呈低表达,但未见其与肿瘤病理分级有明显相关性。结论CDC25B在膀胱癌组织中表达明显高于癌旁正常膀胱粘膜,且CDC25B的高表达与膀胱癌的分化程度和浸润性密切相关;14-3-3δ蛋白在癌旁膀胱粘膜大量表达,而在膀胱癌组织中均呈低表达,但与肿瘤分化程度无相关性。CDC25B及14-3-3δ蛋白可能成为膀胱癌潜在的诊断标记和治疗靶点。
简介:摘要目的探讨14-3-3σ基因在调控内毒素/脂多糖(LPS)引发人肺上皮细胞炎症反应中的机制。方法(1)取培养的对数生长期人正常肺上皮细胞BEAS-2B,按照随机数字表法分为对照组、PCMV6-14-3-3σ组,每组3孔。对照组细胞转染空载质粒,PCMV6-14-3-3σ组细胞转染PCMV6-14-3-3σ质粒。转染48 h,蛋白质印迹法检测细胞内14-3-3σ蛋白表达。(2)取培养的对数生长期人正常肺上皮细胞BEAS-2B,按照随机数字表法分为对照组、PCMV6-14-3-3σ组、PCMV6-14-3-3σ+LPS组、LPS组,每组3孔。对照组细胞转染空载质粒孵育42 h,PCMV6-14-3-3σ组细胞转染PCMV6-14-3-3σ质粒孵育42 h,PCMV6-14-3-3σ+LPS组细胞转染PCMV6-14-3-3σ质粒42 h后加入LPS(终质量浓度1 μg/mL,下同)刺激6 h,LPS组细胞仅加入LPS刺激6 h。蛋白质印迹法检测Bax、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的蛋白表达,计算两者比值;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量反转录PCR技术检测细胞内肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达量;酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中TNF-α、IL-1β含量。对数据行t检验、单因素方差分析、LSD检验。结果(1)与对照组(0.78±0.04)比较,转染48 h PCMV6-14-3-3σ组细胞14-3-3σ蛋白表达水平(1.05±0.03)明显升高(t=5.41, P<0.01)。(2)与对照组比较,PCMV6-14-3-3σ组细胞Bax/Bcl-2比值、细胞凋亡率、TNF-α mRNA及IL-1β mRNA表达量、细胞上清液中TNF-α及IL-1β含量均无明显变化(P>0.05),LPS组细胞上述指标均明显升高或增加(P<0.01)。与LPS组比较,PCMV6-14-3-3σ+LPS组细胞上述指标明显下降或减少(P<0.01)。结论14-3-3σ是调控细胞凋亡的重要因子,通过调节凋亡调控因子Bax/Bcl-2比值,抑制人肺上皮细胞凋亡,从而减轻LPS诱导的炎症反应。
简介:目的:探讨14—3—3β基因(酪氨酸3-加单氧矽色氨酸5-加单氧酶激活蛋白基因)对卡波氏肉瘤(Kaposigsarcoma,KS)细胞迁移的影响。方法:采用脂质体法将14—3—3β基因稳定转染入BCBL—1(HHV-8positiveandEBVnegativehumanBcells)细胞,Western—Blot检测14—3—3β蛋白的表达,最后利用Transwell法分析14—3—3β基因对BCBL-1细胞迁移的影响(设立空载体组和阴性对照组)。结果:pcDNA3.1/myc—His(-)A-14—3—3β组细胞迁移数目明显高于pcDNA3.1/myc—His(-)A组和阴性对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05);pcDNA3.1/myc—His(-)A组和阴性对照组细胞迁移数目相比差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:14—3—3β基因能促进KS细胞的迁移。
简介:摘要目的调查儿童打鼾和相关症状的发生情况。方法采取随机整群分层抽样方法应用由家长完成的问卷调查表对6999名3-14岁儿童进行调查,确定打鼾和习惯性打鼾及相关症状的发生情况。实际发放调查问卷总数为9000份,应答8150份,回收率为90.6%。有效问卷6999份。结果本组儿童打鼾现患率32.7%,男性儿童打鼾发生率(44.22%)高于女性儿童(28.58%)有显著性差异(P<0.01)。儿童打鼾现患率以3-5岁儿童相对较高为35.86%。打鼾儿童相关症状按发生率分别为注意力不集中65.66%,夜间多汗51.61%,口干咽痛5.07%,食欲减退37.09%,张口呼吸36.21%,夜醒及夜惊34.21%,慢性咳嗽31.81%,体重不增27.44%,呼吸恶臭23.56%,生长迟缓22.95%,白天困倦23.04%,遗尿17.98%。睡眠打鼾儿童相关疾病中以扁桃体肥大31.02%最常见,其次反复呼吸道感染29.89%,过敏性鼻炎16.19%,体重超重13.61%。2292名打鼾儿童有家族打鼾病史者占26.79%。结论儿童睡眠打鼾是较常见现象,持续睡眠打鼾可能影响生长发育。
简介:摘要:目的探究雷公藤多苷片联合依那西普治疗类风湿性关节炎对血清
简介:目的:探讨14-3-3zeta蛋白表达与套细胞淋巴瘤(MCL)患者疗效和预后的关系。方法收集2007年3月至2012年3月期间于第四军医大学病理科确诊、血液科住院治疗的12例MCL患者的临床资料,采用免疫组织化学染色方法检测14-3-3zeta蛋白在12例MCL患者中的表达情况,分析其与MCL预后的关系。结果与淋巴结反应性增生相比,12例MCL患者中8例细胞浆中表达14-3-3zeta阳性,阳性表达率为66.7%。14-3-3zeta阳性表达患者总反应率(ORR)、2年总生存(OS)率、2年无进展生存(PFS)率(62.5%,50.0%,37.5%)均低于14-3-3zeta阴性表达患者(75.0%,100.0%,75.0%),有待扩大样本量深入研究。结论MCL中存在14-3-3zeta蛋白的异常高表达,其表达强弱可能与预后相关。