简介：目的探讨大鼠胰腺干细胞体外分离、纯化的实验条件及其定向分化潜能。方法应用胰腺原位灌注V型胶原酶消化大鼠胰腺组织，100目滤网滤过，Ficoll400浓度梯度离心法分离胰腺干细胞，采用添加表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子（hFGF）的培养基行体外培养。运用荧光免疫染色法检测细胞表面CK-19、Fdx-1、Nestin、Insulin和Glucagon蛋白，计算阳性细胞率。双硫腙（DTZ）染色鉴定诱导分化后的细胞，光电酶标记法ELISA检测胰岛素分泌功能。结果本实验获取的胰腺干细胞，体外培养可稳定传代培养8代以上。细胞表面CK-19、Pdx-1和Nestin蛋白均呈阳性，阳性细胞率分别为（88．6±6．2）％、（84．6±8．6）％和（81．3±7．5）％。诱导分化后细胞经DTZ染色呈棕红色。在高糖刺激下，培养上清液中胰岛素含量增高。结论本法可获取高纯度、多数量的胰腺干细胞，在人工诱导下可定向分化为具有胰岛素分泌功能的胰岛样细胞团，为临床胰岛移植获得足量细胞来源提供实验基础。

简介：目的建立一种心型脂肪酸结合蛋白新的纯化方案.方法以牛心为材料,通过凝胶过滤层析,疏水层析,离子交换层析,快速分离纯化出脂肪酸结合蛋白.结果经SDS-PAGE和Westernblot鉴定,纯度及特异性均良好.并用其免疫大耳白兔获得抗脂肪酸结合蛋白的多克隆抗体.结论该纯化方案可作为一般蛋白的纯化战略.

简介：目的探讨更为可靠、纯净度高的犬骨髓间充质干细胞分离、培养方法.方法将犬骨髓抽取液分别以1.068g/ml及1.073g/ml分离液进行密度梯度离心,采用贴壁培养法获得骨髓间充质干细胞(MSCs);以LG-DMEM加15%FBS培养;应用干细胞表面标志蛋白,多向诱导分化等方法进行细胞鉴定.结果采用1.068g/ml分离液可获得纯度较高的单核细胞,接种细胞生长良好,孵育24h即可见细胞贴壁生长,平均倍增周期为1d,细胞呈纺锤状,螺旋梳状排列.连续培育8代以上,未见细胞形态、增殖特性改变.MSCs表面标志SH2阳性,CD45阴性,可定向分化为心肌细胞、成骨细胞及脂肪细胞.结论采用1.068g/ml分离液能够较好地进行犬MSCs的体外分离、培养与扩增,分离得到的细胞具备MSCs的特性.