简介：以三氯硫磷为起始原料，经三步反应合成得到毒死蜱半抗原O-乙基O-（3，5，6-三氯-2-吡啶基）N-（3-羧丙基）硫逐磷酸胺（简称CHBu），此半抗原分别与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）用碳二亚胺法和混合酸酐法通过偶联反应得到免疫抗原和包被抗原，其结合比分别为14．6：1和6．2：1。用所得的免疫原免疫兔子获得了高效价（抗血清：2．56×10^4；冻干粉：2．56×10^6）、高亲和性、特异性好的多克隆抗体。交叉反应试验表明，该抗体与毒死蜱各结构类似物交叉反应率均小于4％；亲和性试验表明，在1-500ng／mL浓度范围内，抑制率与浓度呈线性关系，线性回归方程为Y=23．503lg（x）＋28．556，r=0．9919，抑制中浓度I50=8．2ng／mL，最低检测限为1．0ng／mL。

简介：制备了相思子毒素的多克隆抗体，并比较了不同纯化方法得到的抗体的活力回收率，研究了抗体对相思子毒素中毒的预防和急救作用。

简介：用PCR方法扩增了人的BAF53全长cDNA序列,用酶切后的ΔBAF53cDNA片段构建了表达质粒.转化大肠杆菌后,经IPTG诱导表达,再经包涵体裂解、纯化,得到hBAF53抗原多肽.从免疫动物身上获得实验动物的抗血清.通过斑点印迹方法测得hBAF53抗血清的特异性和效价,又用已提取的HeLa细胞核蛋白(含有天然BAF53蛋白)进行免疫印迹分析,证明天然BAF53蛋白是该抗血清的抗原,说明获得的抗血清具有比较高的特异性,可用于染色体改构复合物各亚基间相互作用分析及调控基因转录机理方面的研究.

简介：目的：在大肠杆菌中表达大鼠脊髓损伤与修复蛋白39（SCIRR39）的C端抗原表位，并制备其多克隆抗体。方法：从大鼠脊髓全横断损伤脊髓cDNA中扩增1386bp的Scirr39基因编码框，亚克隆该基因编码蛋白C端359～461位氨基酸残基的DNA片段，插入表达载体，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析表达情况，切胶纯化目的蛋白；利用多克隆抗体制备技术，制备重组SCIRR39蛋白的多克隆抗体；用ELISA方法检测抗体效价，Western印迹检测抗体的特异性。结果：SCIRR39蛋白C端抗原表位与GST的融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式高表达，相对分子质量为37．9×103；获得抗SCIRR39蛋白C端抗原表位的兔抗血清，其效价达到1：104；Western印迹显示多克隆抗体能特异识别重组SCIRR39蛋白的C端抗原表位。结论：在原核系统中表达纯化了重组SCIRR39抗原表位蛋白，制备的重组蛋白多克隆抗体将用于检测SCIRR39在脊髓损伤过程中的表达变化。

简介：目的:制备RBBP10多克隆抗体.方法:用纯化的RBBP10蛋白为抗原免疫家兔制备多克隆抗体,间接ELISA法检测抗体效价,stern印迹检测抗体特异性.结果:抗血清效价可达1:1000以上.结论:经Western印迹检测证明抗体效价高,特异性强,此抗体可通过免疫组化方法检测RBBP10蛋白在各种肿瘤中的表达,具有一定的应用价值.

简介：目的制备胃动素受体多克隆抗体和研究该受体在人胃中的组织定位.方法通过合成肽耦联钥孔戚血蓝蛋白(keyholelimpethemocyanin,KLH)制备抗体,以ELISA方法测定效价.用含有GPR38基因(胃动素受体)的质粒转染293细胞株,以RT-PCR方法鉴定.Westernblot和免疫组织化学法检测转染的293细胞和组织中胃动素受体的表达.结果制备的兔抗人的多抗效价达1∶500000,有较好的特异性.成功转染293细胞,该细胞能够瞬时表达胃动素受体,而该受体在人胃窦胃体的黏膜腺上皮中表达.结论应用合成肽-KLH成功地制备了胃动素受体的兔抗人多克隆抗体,用该抗体检测到人胃窦胃体黏膜上皮细胞存在胃动素受体的表达.

简介：将去氢甲睾酮多克隆抗体同CNBr-Sepharose4B进行偶联,制成了对去氢甲睾酮具有特异性吸附的免疫亲和柱（IAC）,优化了免疫亲和柱的制备和使用条件;同时用间接竞争ELISA（icELISA）和高效液相色谱法（HPLC）对该免疫亲和柱的性能进行评价。结果表明：CNBr-Sepharose4B偶联抗体的最佳反应时间为2.5h,抗体最佳初始质量浓度为0.5mg/mL;IAC的柱容量约为1700ngDMT/g干胶;最适洗脱条件为80%的甲醇-水溶液,平均加标回收率为97.87%。该亲和柱重复使用3次,回收率仍不低于90%。

简介：MAPK蛋白激酶是一类重要的植物胁迫信号调控因子。为了研究小麦MAPK基因的功能,本试验克隆了小麦MAPK蛋白激酶基因TaMAPK2。为了制备TaMAPK2基因的多克隆抗体,TaMAPK2的非保守区段的DNA序列anti-MAPK2被构建到原核表达载体pET-28a-（＋）上,表达融合蛋白His-antiMAPK2。在终浓度为1mmol/LIPTG诱导1h的条件下,融合蛋白His-antiMAPK2表达量达到最大。通过蛋白标记亲和层析柱（HisTrapTMHP）得到纯化的His-antiMAPK2融合蛋白。利用新西兰大白兔制备了TaMAPK2基因的多克隆抗体,ELISA竞争抑制法检测抗体效价检测,效价为1：80000,能满足后续试验要求的效价值,为进一步分析TaMAPK2的蛋白定位、表达等提供基础。

简介：摘要   目的  制备肺炎支原体（MP）P116蛋白，通过免疫新西兰大白兔，获得多克隆抗体。方法  克隆MP P116基因N端的609bp基因片段，构建PQE-80L-609表达载体。诱导蛋白表达，用确诊感染患者血清作一抗，通过Western blot检测获得蛋白的免疫反应性。用纯化的蛋白与制备好的多克隆抗体作Western blot，检测其免疫原性。结果 成功构建了PQE-80L-609表达载体并表达纯化出约27ku的P116-609蛋白。用表达的蛋白免疫新西兰兔获得了多克隆抗体，效价大于1:6400。纯化后的蛋白抗原与确诊感染病人血清和获得的多克隆抗体均具有免疫印迹。结论 进一步证明了MP P116蛋白具有较好的免疫原性，产生的多克隆抗体可以应用于后续的相关实验。

简介：摘要目的原核表达人腺病毒（HAdV）7型DNA结合蛋白（DBP），制备DBP蛋白多克隆抗体。方法合成HAdV-7 DBP基因并克隆至pET30a载体，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导进行原核表达。经镍离子金属螯合层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体，使用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定该抗体效价；使用Western blotting方法与间接免疫荧光方法（IFA）检测抗体特异性。以rDBP包被ELISA反应板使用间接ELISA对HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体进行检测。结果成功构建HAdV-7 DBP原核表达载体，表达的重组DBP蛋白经镍柱亲和层析纯化后纯度>95%，间接ELISA方法测得制备的多克隆抗血清的抗体效价为1∶1 024 000，Western blotting方法和IFA方法显示该抗体具有较高的特异性，间接ELISA方法检测HAdV感染儿童 急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体的阳性率分别为50.0%（19/38）和63.2%（24/38）。结论成功构建HAdV-7 DBP蛋白的原达表达载体，获得了HAdV-7型DBP重组蛋白和高效价的兔多克隆抗体。

简介：目的制备重组金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素LukF-PV蛋白多克隆抗体并鉴定。方法纯化获得重组蛋白LukF-PV,免疫新西兰白兔,收集多抗血清,ELISA法测定抗体滴度,Westernblotting法鉴定免疫活性。结果成功免疫新西兰白兔获得多抗血清,ELISA测定其效价为1∶103,Westernblotting鉴定其能识别重组蛋白和金葡菌PVL蛋白。结论成功制备出重组金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素LukF-PV蛋白多克隆抗体,并进行鉴定,为建立产杀白细胞素的金黄色葡萄球菌的快速、廉价的免疫学检测方法奠定基础。

简介：

简介：于氟氰菊酯分子的酸部分连接4-氨基丁酸间隔臂（HCA1）、醇部分连接丁二酸酐间隔臂（HCB2），分别合成了两种不同的半抗原，通过碳二亚胺法将HCA1和HCB2分别与牛血清蛋白（BSA）偶联制备了人工抗原HCA1-BSA和HCB2-BSA，通过混合酸酐法将HCA1、HCAS[3-（2-氯-3，3，3-三氟丙烯基）-2，2-二甲基环丙烷羧酸]和HCB2分别与卵清蛋白（OVA）偶联制备包被抗原，两种人工抗原通过免疫新西兰大白兔制备相应的多克隆抗体。结果表明，用HCA1-BSA获得的多克隆抗体对氯氟氰菊酯和氯氟氰菊酸有免疫反应性（IC50值分别为33．12和0．95mg/L），用HCB2-BSA获得的多克隆抗体对氯氟氰菊酯几乎没有免疫反应性。

简介：摘要目的原核表达GII.6型诺如病毒(norovirus, NoV)P蛋白和制备多克隆抗体。方法扩增NoV GII.6型P区基因并克隆至pET28a载体，转化感受态E. coli BL21(DE3)，IPTG诱导进行原核表达。使用Ni－NTA亲和柱层析进行纯化，重组蛋白进行寡糖结合分析，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体血清，ELISA测定该抗体的效价，western blot (WB)检测抗体的特异性，并进行有效性评估。结果成功构建了原核表达载体GII.6P-pET28a并表达相对分子质量约40×103的GII.6型P蛋白；Ni柱亲和层析纯化后纯度达90%以上；寡糖结合显示GII.6型P蛋白与B、leb、H2型结合，与A、H1、lea型不结合；ELISA测得抗体的效价为1∶160 000；WB显示抗体具有较高特异性；交叉实验未显示出对GII.4的亲和力。结论成功表达了GII.6型P蛋白并获得高效价的抗体，为GII.6的检测和疫苗研发提供有效工具。

简介：摘要目的制备兔抗长爪沙鼠免疫球蛋白G1（IgG1）和IgG2的特异性多克隆抗体，并用于蛋白质免疫印迹（WB）和ELISA检测。方法利用质粒-大肠埃希菌系统分别高效表达密码子优化的长爪沙鼠免疫球蛋白IgG1和IgG2重链恒定域CH2和CH3重组蛋白，纯化后免疫新西兰大白兔，分离并纯化获得相应的兔多克隆抗体，用辣根过氧化物酶（HRP）标记后分别作为一抗应用于WB和作为二抗应用ELISA。结果IgG1和IgG2重组蛋白在大肠埃希菌中可高效表达并都以包涵体形式存在，I相对分子质量分别为24 800和21 200，与预期相符。其纯化后作为免疫原可诱导兔产生相应的多克隆抗体，HRP标记后用于WB可以特异性地识别重组蛋白长爪沙鼠IgG1-CH23和IgG2-CH23，用于ELISA能检测柯萨奇病毒A16型感染长爪沙鼠后诱导产生的特异性IgG抗体。结论成功制备了兔抗长爪沙鼠免疫球蛋白IgG1和IgG2的特异性多克隆抗体，为长爪沙鼠特异性抗体血清学检测提供了有效工具。

简介：摘要目的原核表达糖尿病创面来源大肠杆菌谷氧还蛋白(Grx)GrxB，制备GrxB多克隆抗体。方法根据美国国家生物技术信息中心(NCBI)公布的大肠杆菌K12标准株grxB基因序列(Gene ID：946926)设计扩增引物，以本科室前期分离到的一株糖尿病创面大肠杆菌基因组(煮沸裂解法获得)为模板，通过聚合酶链反应(PCR)扩增出grxB全长663 bp，使用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后连接至表达载体pET-30a。将重组质粒pET-30a-grxB转化至大肠杆菌BL21(DE3)，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达GrxB蛋白，使用N2+镍离子层析柱对蛋白进行纯化。纯化后的重组GrxB蛋白免疫BALB/c小鼠，完成免疫程序后使用蛋白质印迹法(Western blot)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对多克隆抗体的特异性和效价进行测定。两组间比较采用t检验。结果经测序，扩增出的grxB序列与K12标准株的完全一致，并成功表达出可溶性重组GrxB蛋白，大小为31.2 kDa，与预测大小一致。血清51 200倍稀释后，免疫组效价显著高于磷酸盐缓冲液(PBS)组(1.146±0.066比0.12±0.011，t＝15.000，P<0.05)，免疫组血清与重组GrxB蛋白和大肠杆菌全菌均具有良好的特异性反应。结论成功表达可溶性重组GrxB蛋白，并获得高滴度多克隆抗体。

简介：摘要目的原核表达柯萨奇病毒A组5型(coxsackievirus A5，CV-A5)VP1蛋白，并制备抗VP1多克隆抗体(多抗)，为CV-A5相关定性定量研究制备试剂。方法逆转录PCR扩增N端截短的CV-A5 VP1-ΔN56后，克隆至原核表达载体pGEX-6P-1，获得pGEX-6P-1-VP1-ΔN56。将其转化大肠埃希菌BL21(DE3)，表达重组蛋白并纯化。用纯化的谷胱甘肽巯基转移酶-VP1-ΔN56融合蛋白经背部皮下免疫日本大耳白兔，制备多抗。结果重组表达载体构建成功，融合蛋白以不可溶包涵体存在。ELISA、蛋白质印迹法检测表明，获得的兔多抗效价为107，可特异性识别重组和天然CV-A5 VP1蛋白。结论成功制备重组CV-A5 VP1蛋白及特异性多抗。为中和抗原表征研究及VP1定性定量分析奠定了基础。

简介：VectorLaboratories公司在主要抗体系列中推出6个新的兔子单克隆抗体用于免疫组织化学着色，分别是CD3．COX-2、CyclinD1、Ki67、EstrogenReceptor和ProgesteroneReceptor；许多兔子单克隆抗体具有对目标抗原有很大的亲和力。因此、与老鼠的单克隆抗体比较，兔子单克隆抗体在组织着色应用中具有更高的性能，

简介：摘要目的原核表达GII.4基因型人诺如病毒(human norovirus, HuNoV)次要衣壳蛋白VP2并制备多克隆抗体。方法设计特异性引物扩增GII.4 HuNoV的VP2全基因，酶切连接至原核表达载体pGEX-6P-1，将鉴定正确的重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞。挑取单克隆摇菌，加入IPTG诱导重组GST-VP2融合蛋白的表达，经GST亲和层析纯化和酶切，获得GII.4 HuNoV VP2蛋白。通过SDS-PAGE分析纯化后HuNoV VP2蛋白相对分子质量。将纯化的GII.4 HuNoV VP2蛋白(0.5 mg/ml)免疫BALB/c小鼠，制备多克隆抗体。结果GII.4 HuNoV VP2蛋白被成功表达和纯化，相对分子质量(Mr.×103)约29。将GII.4 HuNoV VP2蛋白免疫BALB/c小鼠制备的多克隆抗体滴度高达1∶1 280 000。Western blot与间接ELISA分析显示该多克隆抗体能和GII.4 HuNoV VP2抗原特异性结合。结论利用原核表达系统成功表达了GII.4 HuNoV VP2蛋白，并成功制备出高效价GII.4 HuNoV VP2多克隆抗体。

简介：目的获得兔抗人成熟型转化生长因子-β1（TGF-β1）多克隆抗体，并将其初步应用于临床检测。方法将人成熟型TGF-β1融合蛋白经亲和层析法纯化，并将其作为抗原免疫家兔，获得兔抗血清，经饱和硫酸铵纯化，获得初步纯化的兔抗人TGF-β1多克隆抗体。采用双抗夹心间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定健康对照者、慢性肝病及肝硬化患者血清TGF-β1的OD值。结果获得初步纯化的兔抗人TGF-β1特异性多克隆抗体，该抗体能与人TGF-β1起反应。各组血清TGF-β1的检测OD450值为：轻、中度慢性肝炎组11．333±6．136，慢性重症肝炎组16．400±6．959，肝硬化组14．975±6．090，健康对照组7．275±3．222；前三组分别与健康对照组比较，差异均有显著性（P〈0．01）；慢性重症肝炎组、肝硬化组分别与轻、中度慢性肝炎组比较，差异亦有显著性（P〈0．01）。结论制备的TGF-β1多克隆抗体可初步用于临床检测，判断肝纤维化程度。