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  • 简介:目的对西双版纳小耳猪群体遗传结构进行RFLP分析。方法采用ECL核酸直接标记和检测系统,以HRP标记ɑ-珠蛋白-3’HVR多基因座小卫星探针,对西双版纳小耳猪HinfⅠ或HaeⅢ酶切片段进行Southern杂交,以化学发光法进行检测,获得了清晰可辨、具有高度多态性DNA指纹图谱。结果2kb以上谱带数在6~15条之间,HinfⅠ酶切产生图带数低于HaeⅢ。JB亚系内805、807家系和JS亚系内111、121、121、151家系不同个体间相似系数分别为0.94±0.09、0.85±0.08、0.84±1.7、0.78±1.6、0.83±0.42、0.87±0.07,显著高于各家系间相似系数,JB亚系内805家系和JS亚系内151家系不同个体间相似系数较大,分别为0.94和0.87。结论西双版纳小耳猪近交程度较高,个体间差异较小,均一性较强。

  • 标签: 家系 珠蛋白 RFLP分析 多基因 HRP 化学发光法
  • 简介:目的探讨猪TCR基因分子结构复杂性及其与人类相似性。方法以公开猪TCRα链基因为参考序列设计两对特异性引物,用RT-PCR法从合作小型猪外周血、淋巴结和脾脏淋巴细胞中克隆了93个猪TCRα基因(简称STA)。结果测序分析表明,克隆猪TCRα链基因均含有可变信号肽区和V区、高变J区和恒定C区基因片段,但基因间核苷酸序列组成都不完全相同,且具有十分复杂多态性和多样性,基因间同源性在68.4%-98.7%,这与TCRα链基本基因结构特征相一致。依据TCRα基因同源性对其分子结构、遗传演化关系和归类分析发现,在其信号肽区、FR1区和CDR1区、FR2区和CDR2区以及FR3区和CDR3区都存在一些变异集中点和变异热点区。用IMGT/V-QUEST分析方法可将合作小型猪TCRαV区(STAV)、J区(STAJ)基因片段与人类进行比较分析,发现合作小型猪TCRα与人类遗传演化关系较近,每个序列都能找到与人类对应TRAV、TRAJ基因片段,甚至V区相似性可达92%以上。结论近交培育合作小型猪在正常状态具有应对外界复杂微生物等环境TCR遗传多样性分子基础,且适合作为人类免疫学及疾病研究动物模型。

  • 标签: 合作小型猪 TCRα基因 生物信息学 多样性
  • 简介:目的观察α-半乳糖苷酶对猕猴类人B抗原酶解效果,探讨α-半乳糖苷酶酶解对猕猴红细胞结构、功能影响.方法采用热吸收放散试验从30只华南猕猴中选取类人ABO血型抗原较强2只A型、3只B型猕猴做为实验对象,以基因重组α-半乳糖苷酶体外酶解猕猴类人B型血抗原,并回输到A型猕猴体内,测定红细胞脆性、自身溶血率、胆固醇、高铁血红蛋白、乙酰胆碱脂酶、ATP等红细胞结构功能指标.结果经α-半乳糖苷酶酶解后,猕猴红细胞胞膜完整、携氧能力正常,酶解后"通用"型血回输给受体猕猴无任何输血反应发生.结论α-半乳糖苷酶酶解对于猕猴红细胞形态、结构、功能无不良影响,且在实验动物体内是安全.

  • 标签: Α-半乳糖苷酶 猕猴 红细胞 形态 结构
  • 简介:目的:介绍一种急性水肿性胰腺炎(AEP)向急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)演变大鼠模型,并对其超微结构进行了观察。方法30只SD大鼠随机分为正常组、AEP组和左旋精氨酸(L-Arg)干预组。通过阴茎背静脉注射雨蛙索诱导AEP模型后,再经该静脉注入L-Arg1600mg/kg,以观察血清生化指标和胰组织光镜、透射电镜下改变。结果血清淀粉酶、脂肪酶水平在AEP组、L-Arg干预组均明显高于对照组,其中血清淀粉酶在两组间无显著性差异,而L-Arg干预组血清脂肪酶却明显高于AEP组;AEP组血清、胰组织NO浓度明显低于对照组,而L-Arg组明显高于对照组和AEP组。光镜及透射电镜证实.L-Arg干预AEP大鼠后,导致了胰实质出血、坏死和腺泡细胞内亚细胞结构破坏。结论L-Arg导致AEP加重为AHNP,与NO毒性有关;此大鼠模型不但有血清淀粉酶等生化指标的改变,而且组织病理特点也较为典型.是研究急性胰腺炎重型化机理良好模型。

  • 标签: L-ARG AEP 大鼠模型 AHNP 干预 对照组
  • 简介:目的观察转人APP基因AD模型小鼠视网膜各层细胞超微结构改变。方法实验采用C57BL/6J转人APP基因小鼠6只,采用同背景10个月龄C57BL/6J正常小鼠6只做为对照。灌注处死小鼠,完整取出右眼球分离视网膜,制作电镜标本观察视网膜各层细胞超微结构改变。结果与对照组相比,模型组视网膜各层细胞异常明显:膜盘排列结构模糊,局部间隙溶解、甚至消失;外核层细胞体干枯变形,染色质聚集浓缩;内核层可见固缩细胞;神经节细胞胞膜不完整,线粒体水肿,并可见染色质聚集。结论转人APP基因AD模型小鼠视网膜各层神经细胞超微结构存在明显病理改变。

  • 标签: APP转基因小鼠 阿尔兹海默病 电镜 视网膜神经细胞
  • 简介:目的应用缺氧动物模型比较纯氧环境(pureoxygenenvironment,POE,100%氧)与空气环境(roomairenvironment,RAE,21%氧)复苏对新生大鼠缺氧性大脑皮质神经元超微结构影响。方法7日龄20只SD(SpragueDawley)乳鼠建立缺氧2.5h模型后,分为纯氧环境组(POE)和空气环境组(RAE),每组再根据复氧后时间点分为2个亚组,即24h组和72h组,每亚组5只。按时间点取各组乳鼠大脑半球右侧额顶皮质行电镜样品制备,透射电镜观察。结果复氧各组均可见神经元、神经毡和细胞间隙水肿。RAE24h组神经元核膜结构不清,细胞器减少,线粒体肿胀、空泡化、嵴断裂;粗面内质网扩张,常呈空泡状,核糖体减少;高尔基复合体囊泡扩张;溶酶体较多。RAE72h组细胞器改变同前,但类似凋亡细胞核较多,坏死细胞亦较其他组多见。POE24h组病变较RAE24h组轻。POE72h组细胞内线粒体及粗面内质网较丰富,病变亦比RAE72h组轻。结论POE复苏较RAE复苏可更能缓解缺氧致神经元超微结构损伤、减少细胞凋亡及减轻脑水肿。提示,纯氧环境对缺氧复苏后大脑皮质神经元有一定保护作用,并表明本动物模型适合缺氧新生大鼠大脑皮质神经元研究。

  • 标签: 复氧 超微结构 神经元 大脑皮质 缺氧新生大鼠
  • 简介:目的建立大鼠肾虚自然流产模型,研究模型蜕膜细胞因子、协同刺激因子表达。方法雌性大鼠20只,雄性大鼠10只。将雌鼠与雄鼠按2∶1合笼,以阴道涂片出现大量精子为妊娠第1天,随机分为对照组、模型组每天灌服羟基脲450mg/kg,第8天灌服米非司酮3.75mg/kg,建立肾虚模型;统计饮食量、饮水量、肾、卵巢、胚胎直径指数;RT-PCR检查Th1型/Th2型细胞因子mRNA表达;流式细胞检测协同刺激因子CD80、CD86、CD28、CTLA-4表达。结果模型组动物饮食量、饮水量、体重增加量与对照组比较,第8天差异有显著性(P〈0.05);胚胎直径指数显著减少(P〈0.01);平均流产率显著升高(P〈0.01);TNF-α、IFN-γ表达显著升高(P〈0.05),IL-4I、L-10表达显著升高(P〈0.05);CD80、CD86、CD28、CTLA-4显著性降低(P〈0.05)。结论灌服羟基脲与米非司酮可成功建立肾虚自然流产制模型。Th1型(TNF-αI、FN-γ)可能对妊娠有害,高表达有可能造成流产;Th2型(IL-4I、L-10)可能有利于妊娠,高表达维持妊娠。协同刺激因子CD80、CD86、CD28、CTLA-4表达与自然流产有关。

  • 标签: 大鼠 肾虚自然流产模型 蜕膜 细胞因子表达
  • 简介:本文对棉顶狨猴,普通狨猴和鞍背狨猴在实验室笼养条件下,进行了近8年狨猴发病类型及致死原因分析研究,结果表明引起狨猴死亡常见疾病是:肺炎,痢疾,消耗性综合症,产后大出血等。并根据狨猴疾病摸索了一套有救防治方案,连对于狨猴饲养与繁殖,保证科学实验用健康健康狨群体具有重要意义。

  • 标签: 狨猴 死因 痢疾 消耗性综合症 肺炎
  • 简介:用0.1%、0.3%、0.5%和0.75%四种不同浓度蜂胶乙醇提取物(LiquidofEthanotExtrstedfrompropolis)EEP来净化自发感染螨虫ICR小鼠。发现不同浓度EEP对体表螨虫均有不同程度净化作用,但0.5%浓度EEp净化效果最佳。净化后小鼠精神状态较好,被毛光洁贴身,无异常反应,镜检未查见螨虫。结果表明EEP天然、无毒,价廉易得,是一种高效、简便、理想实验动物体表螨虫生物净化剂。

  • 标签: 螨虫 体表 ICR小鼠 蜂胶乙醇提取物 异常反应 感染
  • 简介:目的探讨不同品系小鼠体外受精、胚胎和精子低温保存效果.方法本实验分别在中国科学院上海实验动物中心(SLAC)和日本熊本大学动物资源开发中心(CARD)对13个品系小鼠(C57BL/6J、BALB/c、C3H/HeJ、ICR、KM、FVB、MRL、NOD、CBA、DBA/2、CD-1、BDF1、B6C3F1)体外受精(IVF)率、胚胎培养及移植成绩进行了比较研究.结果各品系小鼠新鲜精子IVF率15.1%~87.9%,冻融精子IVF率8%~80%;冷冻胚胎复苏率42.6%~83.9%;冻融胚胎移植后产仔率在17.8%~51.8%.结论遗传背景不同小鼠体外受精率、冷冻胚胎复苏率和胚胎移植产仔率差异有显著性.但同一品系两个实验室间新鲜精子IVF率、冷冻胚胎复苏率及移植产仔率差异无显著性(P>0.05);冻融精子体外受精率CARD明显高于SLAC(P<0.01).

  • 标签: 品系 小鼠 体外受精 胚胎移植 精子
  • 简介:目的探讨雌激素受体α(ERα)基因敲除小鼠优化繁育方法及ERα基因敲除小鼠子代鼠鉴定方法,建立ERα基因敲除小鼠模型,为进一步研究ERα蛋白功能奠定基础。方法用4种不同交配方式观察子代鼠各表型比率及雌、雄性ERα基因突变纯合子小鼠繁殖能力;从子鼠鼠尾中提取基因组DNA,用PCR方法扩增ERα基因片段,琼脂糖凝胶电泳后观察结果。HE染色观察雌、雄性ERα^-/-小鼠生殖系统表型变化。结果WT、ERα^+/-、ERα^-/-各表型小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌、雄性ERα^-/-小鼠无繁殖能力。与WT比较,雄性ERα^-/-小鼠睾丸脏器系数降低,睾丸病理变化表现为生精小管管腔膨胀,生精细胞层变薄,且排列不规则;雌性ERα^-/-小鼠子宫脏器系数降低,子宫和卵巢病变明显,表现为:子宫浆膜、肌层、内膜层细胞排列不规则,卵巢有囊性病变、充血,无黄体。结论雌、雄性ERα^+/-小鼠交配是繁育ERα^-/-小鼠较好方法;实验所用PCR方法能够精确鉴定ERα^-/-小鼠,ERα^-/-小鼠获得为ERα蛋白功能实验研究提供了较理想动物模型。

  • 标签: 雌激素受体Α 基因敲除小鼠 基因型
  • 简介:目的建立分离纯化非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠胰岛方法,并对其体内外生物学特性进行研究。方法采用改良胶原酶消化结合Ficoll密度梯度离心方法,分离纯化NOD小鼠胰岛。应用体外糖刺激实验检测分离纯化胰岛功能,以及通过监测移植小鼠血糖、体重变化及糖耐量实验对移植胰岛体内生物学功能进行分析,并通过HE染色和免疫荧光染色检测肾被膜下移植胰岛存活情况。结果胰岛产率为(116±12)个胰岛/胰腺,纯度〉90%。体外糖刺激实验结果显示,NOD小鼠胰岛糖刺激胰岛素释放水平明显低于KM小鼠胰岛。胰岛移植实验显示,移植胰岛能有效改善糖尿病小鼠血糖、体重和糖耐量,但改善作用一般仅能维持2周左右。HE染色和免疫荧光染色结果显示,肾被膜下可见胰岛素阳性胰岛细胞团,并且在残存移植胰岛细胞团周围存在大量淋巴细胞浸润。结论通过改良小鼠胰岛分离方法可由NOD小鼠分离得到大量较高纯度胰岛,可用于今后探索如何阻断自身免疫损伤保护移植胰岛研究。

  • 标签: 非肥胖性糖尿病 胰岛 分离纯化 移植 小鼠
  • 简介:目的建立缺血性心肌纤维化小鼠模型并探讨其胶原沉积机制。方法将BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组10只。实验组予以腹部皮下注射异丙肾上腺素50mg/kg,每天2次,连续10d。对照组同法注射生理盐水。对比体表心电图,45d后处死小鼠,天狼猩红染色观察心脏Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量,荧光定量PCR检测心脏基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)基因表达,免疫组化染色分析心、肝、肾组织层粘连蛋白(LN)表达。结果实验组小鼠室性心律失常增多,心率加快(P〈0.05);心脏胶原沉积较多,MMP-9、TIMP-1、LN表达上调(P〈0.05),肝、肾组织LN无明显改变(P〉0.05)。结论异丙肾上腺素能制备缺血性心肌纤维化小鼠模型,其机制与MMP-TIMP失衡有关。

  • 标签: 异丙肾上腺素 心肌纤维化 小鼠 动物模型
  • 简介:目的在血管内皮细胞建立时空表达可控转基因动物模型调控体系.方法培育两个配套转基因动物品系,利用组织专一性启动子确保转基因表达空间专一性,利用四环素诱导系统对转基因表达在时间上实施调控.结果将血管内皮细胞特异性表达VE-cadherin基因启动子与人工融合转录因子tTA基因连接,建立转基因小鼠品系VE-cadherin:tTA;将tetoperon启动子与myrAktl连接,建立转基因小鼠品系TET:myrAktl.两系鼠杂交子代,筛选阳性纯合子,能可控性地在血管内皮细胞特异性表达目的基因Akt1/PKB.结论利用VE-cadherin基因启动子和tet-off诱导表达系统,可以达到在时间上和空间上都能人为控制目的基因在血管内皮细胞上特异性表达目的.

  • 标签: 转基因动物模型 调控体系 时空表达 血管内皮细胞 特异性表达 转基因表达
  • 简介:目的:开发一种新培养人胚胎干细胞(hESCs)包被基质,使hESCs培养更加简便。方法用甲醇固定小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)作为包被基质,人胚胎干细胞系X-01在该基质上生长,每隔5~6d传代一次,培养10代后,对人胚胎干细胞特性进行检测,包括细胞形态、碱性磷酸酶染色、相关多能性基因表达和分化能力。结果hESCs在新基质上生长良好,经10次传代后仍能保持典型hESCs克隆形态。碱性磷酸酶染色阳性,免疫荧光染色Oct4、SSEA4、Tra-1-60为阳性,体外分化可形成拟胚体。结论此种固定基质可以大量制备,长期保存,并可以长期维持hESCs未分化状态,为人胚胎干细胞体外扩增探索出了一个新途径。

  • 标签: 人胚胎干细胞 小鼠胚胎成纤维细胞 甲醇固定 基质 MEF蛋白质复合物
  • 简介:目的构建稳定过表达miR-31转基因小鼠,检测其主要组织器官中miR-31表达变化情况并对在体miR-31过表达应用提供合格工具鼠。方法使用Gatewaycloning技术构建miR-31过表达载体,使用DNA显微注射技术将构建好载体注入受精卵内,随后转移至假孕母鼠内,待其自然生产。将新生小鼠提取尾部DNA,PCR及琼脂糖凝胶电泳鉴定miR-31过表达阳性小鼠,筛选阳性小鼠并饲养繁殖。另取阳性小鼠,提取主要组织器官miRNA并使用RT-PCR检测其miR-31表达量。同时对比阳性小鼠和野生型小鼠神经系统中Nestin表达和神经干细胞数量。结果成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,并在屏障环境下饲养繁殖至14代以上。各主要组织器官miR-31表达均升高且稳定表达。阳性小鼠Nestin表达和神经干细胞数量均高于野生型小鼠。结论通过使用Gatewaycloning技术成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,且在各代小鼠中miR-31表达稳定,神经系统内神经干细胞数量多于野生型小鼠,可为进一步研究miR-31过表达后在体内功能和神经系统疾病治疗提供良好工具小鼠。

  • 标签: MiR-31 转基因 FVB小鼠
  • 简介:目的研究昼夜节律改变对视网膜感光视蛋白melanopsin表达影响。方法出生14d(P14)C57BL/6J小鼠随机分为实验组和正常对照组,实验组每天给予24h持续光照,对照组模拟正常昼夜节律每天给予12h光照、12h黑暗环境,运用免疫荧光染色结合RT-PCR技术,分别检测实验组和对照组小鼠在光照1周后和8周后视网膜感光视蛋白melanopsin表达情况。结果免疫荧光染色结果显示感光视蛋白melanopsin主要位于视网膜神经节细胞层,少部分位于内核层。小鼠光照1周后melanopsin阳性细胞表达数目实验组少于对照组;RT-PCR结果示小鼠光照1周和8周时melanopsinmRNA含量实验组均少于各自对照组,两者具有统计学意义(P〈0.01)。结论持续光照可以减少视网膜感光视蛋白melanopsin表达,提示melanopsin阳性神经节细胞为光敏感性细胞,其表达可能对维持正常昼夜节律有重要作用。

  • 标签: 昼夜节律 视网膜神经节细胞 光感受作用 MELANOPSIN 小鼠
  • 简介:目的寻找能调节T细胞功能相关分子,进行与T细胞介导自身免疫性疾病相关研究。方法从BALB/c小鼠骨髓中收集树突状细胞,免疫Wistar大鼠,进行细胞融合,建立杂交瘤细胞系。筛选得到很多株能调节T细胞功能杂交瘤细胞系,对其中一株最能抑制T细胞增殖杂交瘤细胞系进行了进一步深入研究。结果显示其目标分子是CD45,同时增殖实验结果显示该抗体能显著抑制T细胞增殖反应。结论抗CD45单克隆抗体能有效抑制T细胞增殖,有望将本抗体用于T细胞介导自身免疫性疾病相关预防及治疗中。

  • 标签: CD45 单克隆抗体 抑制 T细胞增殖 树突状细胞 小鼠