简介:目的:建立一种骨髓间充质干细胞(MesenchymalStemCells,MSCs)体外培养方法,研究其表面特征性标志(表面分子)。方法:用含10%小牛血清的低糖DMEM培养液,把细胞的接种浓度分成A组小于1×10^4g/ml与B组大于5×10^6g/ml两组进行体外培养,扩增。倒置显微镜观察其形态、增殖能力,流式细胞仪检测细胞的表而分子表达情况。结果:A组细胞生长缓慢,但形态、增殖能力及表面特征性标志与B组相同。MSCs同时表达CDW90、CD44、CD29及CD1a。结论:该方法可作为体外培养MSCs的一种方法,经济实用。MSCs不仅表达CDw90、CD44、CD29而且表达CD1a。
简介:目的观察丝素蛋白与牛骨形态发生蛋白的载体系统与骨髓间充质干细胞的体外相容性。方法将多孔丝素蛋白修剪成20×10×5mm长方体状物,置入6孔板中;将粉状bBMP用PBS液溶解制成2mg/ml混悬液,0.5ml无菌移液管滴定于多孔丝素蛋白上(0.5毫升/个)。骨髓间充质干细胞以107/ml接种到载体系统上,复合4小时后加入生长液继续体外培养,每1、4、8天时进行碱性磷酸酶、矿化结节染色观察以及扫描电镜和激光共聚焦显微镜观察;另外同时设立单纯丝素蛋白与细胞复合培养对照组进行观察。结果倒置显微镜、扫描电镜和共聚焦显微镜下观察到细胞在两种材料上生长形态、活性正常,体外培养24小时时细胞已贴附材料上,呈匍匐状伸展,以后逐渐融合生长,8天时大量细胞成片状攀附在材料表面,并分泌有大量的网状细胞外基质,实验组可见结节状基质生成;碱性磷酸酶、矿化结节染色观察发现实验组细胞碱性磷酸酶和矿化结节染色阳性反应,对照组阴性。结论丝素蛋白是一种良好细胞外基质材料,也是一种良好生长因子的缓释载体。
简介:本研究探讨间充质干细胞(MSC)对GVHD的作用及其机制。建立大鼠同种异体骨髓移植模型,同时输入供者的T淋巴细胞诱导出移植物抗宿主反应,联合或不联合移植供体来源的MSC,观察受鼠的GVHD的发生情况;利用双荧光标记抗体标记受鼠脾脏和胸腺单个淋巴细胞,通过流式细胞术分析CD4^+CD25^+调节性T细胞亚群比例的变化,分析MSC的作用机制。结果显示:实验组的GVHD的发生程度减轻,存活率提高,而CD4/CD8比值在GVHD组出现不同程度的减少,CD4^+CD25^+调节性T细胞在实验组中的脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞的比例分别为31.55±7.58%、93.20±2.69%,在GVHD组中的比例分别为20.90±1.90%、57.17±6.79%,实验组中CD4^+CD25^+调节性T细胞比例比GVHD组中增多,具有显著性差异。结论:MSC能有效抑制HSC移植后致死性GVHD的发生。提高生存率,同时MSC可能通过作用于体内调节性T淋巴细胞而间接发挥了抑制GVHD的作用。
简介:患者女性,75岁。发现有糖尿病、高血压十余年。本次因“四肢青紫一年,加重伴双足多处溃疡、疼痛三月”入院,诉下肢肤温冷,足部溃疡处静息痛明显,无法下地行走。经内科保守治疗溃疡面积仍继续扩大,后转我科会诊。查体:双足肤色紫黑,肤温冷双足外侧缘及足跟部可见大小不等多个溃疡,最深部位达骨质。溃疡周围肤色发黑呈坏疽样。行双下肢动脉造影显示:双下肢远端动脉及足部动脉均已闭塞,足部血供仅靠少许侧支血管(见封三图5)。Wagner分级为2级。根据造影结果无法进行常规动脉重建术。经科室谨慎的讨论及征求患者本人及家属意见并签署知情同意书后,拟行自体骨髓间充质细胞移植术。患者在局麻下行骨穿抽出自体骨髓约40ral,并常规涂片检查排除造血系统疾患。骨髓经离心等处理后,分离出单个核细胞悬液进行增值培养到计量为左右。于2003年12月22日在导管室局麻下行双下肢动脉造影并通过造影导管将培养的骨髓干细胞注射到下肢动脉末端。术中无明显不适,术毕安返病房。术后三月随访患者足部溃疡基本愈合,双足肤色较前明显红润,肤温有所回升(见封三图6)。患者静息痛消失,日常生活中能自行行走。
简介:目的利用免疫磁珠分离成人骨髓神经生长因子受体(nervegrowthfactorreceptor,NGFR)阳性细胞,获得同质性骨髓基质干细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs).方法采用Percoll密度梯度离心法分离成人骨髓中单个核细胞(mononuclearcells,MNCs).对MNCs进行常规贴壁培养或应用磁分离技术分离NGFR+细胞.分别检测NGFR+细胞和常规贴壁培养所获BMSCs体外扩增和集落形成能力,分析其细胞表型和细胞周期,并进行成骨、成脂肪诱导.结果免疫磁珠分离获得NGFR+细胞的纯度为(90.4±4.7)%,NGFR+细胞较贴壁培养获得BMSCs具备更强增殖能力和成骨及成脂肪分化潜能.结论利用免疫磁珠分离骨髓NGFR+细胞可以获得同质性原始BMSCs.
简介:目的温对猴骨髓基质干细胞(BMSCs)进行体外培养及扩增,观察其原代及传代细胞的生长特点及生物学特点。方法抽取4只成年猴髂骨骨髓,用全骨髓培养法进行体外培养获得BMSCs,胰酶消化传代,用条件培养基培养传代细胞。逐日倒置显微镜观察细胞生长情况,对传代细胞进行HE染色及碱性磷酸酶(ALP)染色。结果成年雄性恒河猴BMSCs体外培养生长良好,原代细胞10-13d汇成单层,传代后4~7d长满瓶底。HE染色光镜下观察见BMSCs为单核细胞,细胞呈梭形、多角形,传代细胞碱性磷酸酶染色呈强阳性。结论猴BMSc的体外培养增殖能力强,可诱导为成骨细胞,可作为灵长类动物骨组织工程的种子细胞。