简介：摘要目的研究苦参碱对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导腹膜间皮细胞上皮间充质转分化（EMT）后转录因子Snail2的影响。方法采用TGF-β1刺激人腹膜间皮细胞并同时予不同浓度苦参碱干预处理，实验分为空白对照组、TGF-β1（5 ng/ml）诱导组、TGF-β1+0.4 mg/ml苦参碱干预组、TGF-β1+0.6 mg/ml苦参碱干预组、TGF-β1+0.8 mg/ml苦参碱干预组和TGF-β1+1.0 mg/ml苦参碱干预组。实时荧光定量PCR和Western印迹检测Snail2、上皮标志分子E钙黏蛋白（E-cadherin）和间质标志分子α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）、胶原Ⅲ（ColⅢ）的表达，Western印迹检测Smad2、Smad3和细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）的蛋白磷酸化水平。结果TGF-β1（5 ng/ml）刺激能上调人腹膜间皮细胞Snail2、α-SMA、FN和ColⅢ mRNA和蛋白的表达水平，上调Smad2、Smad3和ERK1/2的蛋白磷酸化水平，下调E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平；苦参碱（0.4、0.6、0.8、1.0 mg/ml）干预处理后能下调Snail2和α-SMA、FN和ColⅢ mRNA和蛋白的表达水平以及ERK1/2的蛋白磷酸化水平，上调E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平。结论TGF-β1能诱导人腹膜间皮细胞EMT，苦参碱可能通过ERK1/2信号通路下调Snail2的表达水平来抑制TGF-β1诱导的人腹膜间皮细胞EMT。

简介：摘要目的探讨成人真皮成纤维细胞(HDF-a)中转化生长因子β1(TGF-β1)对Meox1的转录调控机制及细胞迁移功能的影响。方法(1)取HDF-a系细胞，用RPMI 1640完全培养基培养(下称常规培养)，将细胞分为TGF-β1刺激组和空白对照组。TGF-β1刺激组细胞加入10 μL质量浓度为1 mg/μL的TGF-β1刺激，空白对照组加入等量磷酸盐缓冲液。培养72 h，取2组部分细胞进行转录组测序，筛选出2组差异表达比值≥2且P<0.01的基因，对差异基因进行功能富集分析与京都基因和基因组百科全书代谢途径分析，记录Meox1每百万转录本(TPM)表达值，样本数为3；取2组部分细胞，采用实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法检测Meox1 mRNA表达，样本数为3。(2)取对数生长期HDF-a系细胞(细胞生长期下同)常规培养，分为空质粒组和Smad2过表达组、Smad3过表达组、Smad4过表达组，分别转染2 μg pcDNA3.1空质粒和各自搭载Smad2、Smad3、Smad4的pcDNA3.1质粒，转染6 h后常规培养48 h，实时荧光定量RT-PCR法检测各组细胞中Meox1 mRNA的表达，样本数为3。(3)取HDF-a系细胞常规培养，同实验(1)分组处理，常规培养72 h，采用染色质免疫共沉淀-定量PCR(ChIP-qPCR)法检测2组细胞中Smad2、Smad3和Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度，样本数为3。(4)取HDF-a系细胞常规培养，分为阴性干扰组、小干扰RNA(siRNA)-Smad2组、siRNA-Smad3组、siRNA-Smad4组和空质粒组、Smad2过表达组、Smad3过表达组、Smad4过表达组，分别转染50 μmol/L随机siRNA、siRNA-Smad2、siRNA-Smad3、siRNA-Smad4和2 μg pcDNA3.1空质粒及各自搭载Smad2、Smad3、Smad4的pcDNA3.1质粒，转染6 h后常规培养48 h，ChIP-qPCR法检测相应组别细胞中Smad2、Smad3和Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度，样本数为3。(5)取2个批次HDF-a系细胞常规培养，均分为阴性干扰组、siRNA-Meox1组、空质粒组、Meox1过表达组，分别转染50 μmol/L随机siRNA、siRNA-Meox1和2 μg pcDNA3.1空质粒、搭载Meox1的pcDNA3.1质粒，转染6 h后常规培养24 h，1个批次细胞进行划痕实验，划痕后24 h观察划痕宽度，与划痕后即刻对比划痕愈合宽度；1个批次细胞进行Transwell实验，常规培养24 h，计数迁移细胞，样本数为3。(6)2018年1月—2019年6月，陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院收治3例烧伤后8～12个月增生性瘢痕患者(男2例、女1例，年龄35～56岁)，取其术中切除的瘢痕组织和瘢痕边缘附带正常皮肤组织，行免疫组织化学染色，观察Meox1蛋白表达分布。对数据行单因素方差分析、独立样本t检验。结果(1)培养72 h，2组细胞差异表达明显的基因共843个，涉及组织修复、细胞迁移、炎性细胞趋化诱导过程等功能以及肿瘤坏死因子、白细胞介素17、细胞外基质受体等潜在的信号通路；空白对照组细胞测序结果的Meox1 TPM表达值为45.9±1.9，显著低于TGF-β1刺激组的163.1±29.5(t＝6.88，P<0.01)。培养72 h，空白对照组细胞Meox1 mRNA表达量为1.00±0.21，显著低于TGF-β1刺激组的11.00±3.61(t＝4.79，P<0.01)。(2)培养48 h，Smad2过表达组、Smad3过表达组和Smad4过表达组细胞中Meox1 mRNA表达量分别为198.70±11.02、35.47±4.30、20.27±2.50，均显著高于空质粒组的1.03±0.19(t＝31.07、13.80、13.12，P<0.01)。(3)培养72 h，TGF-β1刺激组细胞中Smad2、Smad3和Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度均显著高于空白对照组(t＝12.99、41.47、29.10，P<0.01)。(4)培养48 h，阴性干扰组细胞中Smad2蛋白在Meox1启动子上的富集度为(0.200 000±0.030 000)%，显著高于siRNA-Smad2组的(0.000 770±0.000 013)%(t＝11.67，P<0.01)；空质粒组细胞中Smad2蛋白在Meox1启动子上的富集度为(0.200 000±0.040 000)%，显著低于Smad2过表达组的(0.700 000±0.090 000)%(t＝8.85，P<0.01)。阴性干扰组细胞中Smad3蛋白在Meox1启动子上的富集度为(0.500 0±0.041 3)%，显著高于siRNA-Smad3组的(0.006 0±0.001 3)%(t＝17.79，P<0.01)；空质粒组细胞中Smad3蛋白在Meox1启动子上的富集度为(0.470 0±0.080 0)%，显著低于Smad3过表达组的(1.100 0±0.070 0)%(t＝9.93，P<0.01)。阴性干扰组细胞中Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度与siRNA-Smad4组相近(t＝2.11，P>0.05)，空质粒组细胞中Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度与Smad4过表达组相近(t＝0.60，P>0.05)。(5)划痕后24 h，siRNA-Meox1组细胞划痕愈合宽度较阴性干扰组窄，Meox1过表达组细胞划痕愈合宽度较空质粒组宽。培养24 h，阴性干扰组迁移细胞数显著多于siRNA-Meox1组(t＝9.12，P<0.01)，空质粒组迁移细胞数显著少于Meox1过表达组(t＝8.99，P<0.01)。(6)烧伤后增生性瘢痕患者瘢痕组织中Meox1蛋白表达明显高于正常皮肤组织。结论在HDF-a系细胞中，TGF-β1通过Smad2/3转录调控Meox1表达，进而促进细胞迁移。

简介：摘要目的探讨原发性高血压患者外周血微小RNA(microRNA)-126、microRNA-155、Klotho蛋白和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达的意义。方法选择丽水市中心医院2015年12月至2018年12月收治的原发性高血压患者80例为研究对象；另选择丽水市中心医院2015年12月至2018年12月健康体检者80例为对照组。采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测microRNA-126和microRNA-155表达；采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测Klotho蛋白和TGF-β1蛋白表达。比较两组收缩压和舒张压变化，外周血microRNA-126和microRNA-155表达及Klotho蛋白和TGF-β1蛋白表达。结果高血压组外周血microRNA-126(0.23±0.07)、microRNA-155(0.84±0.14)，均低于对照组的(1.16±0.24)和(1.37±0.21)，差异均有统计学意义(t＝33.273、18.782，均P<0.05)；高血压组血清Klotho蛋白(123.42±9.47)ng/L，低于对照组的(143.56±14.68)ng/L，而血清TGF-β1蛋白(561.32±58.39)ng/L，高于对照组的(408.97±25.13)ng/L，差异均有统计学意义(t＝10.312、21.436，均P<0.05)。结论原发性高血压患者外周血microRNA-126和microRNA-155表达下调，Klotho蛋白下调及TGF-β1蛋白上调，对临床诊疗有一定的指导意义。

简介：摘要目的探讨急性白血病(AL)患者血清肝细胞生长因子(HGF)和血管内皮生长因子(VEGF)水平变化及其临床意义。方法抽取2019年10月至2021年10月郑州大学第一附属医院收治的63例AL患者为观察组，同期接待的健康体检者50例为对照组。检测并比较两组血清HGF、VEGF水平，比较观察组中不同疾病类型(急性淋巴细胞白血病30例，急性非淋巴细胞白血病33例)及不同化疗效果者的血清HGF、VEGF水平。结果观察组血清HGF、VEGF水平分别为(1 224.52±285.14)、(727.41±225.95)pg/ml，高于对照组的(332.60±65.24)、(208.13±36.38)pg/ml，P均<0.05。急性淋巴细胞白血病者和急性非淋巴细胞白血病者血清HGF、VEGF比较，差异未见统计学意义(P均>0.05)。诱导缓解化疗1个疗程后，不同化疗效果者血清指标比较，完全缓解患者低于未完全缓解患者(P均<0.05)。结论AL患者血清HGF、VEGF明显升高，经过化疗治疗，疗效越好则血清HGF、VEGF降低也越显著，因此可将血清HGF、VEGF水平检测用于AL的诊断及预后评估中。

简介：摘要目的探讨乳脂球表皮生长因子8(MFG-E8)抑制大鼠深静脉血栓形成(DVT)及对Toll样因子受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法健康雄性SD大鼠90只，随机数字表法分为假手术组、模型组、MFG-E8组，每组30只，Reyers法制备大鼠DVT模型，MFG-E8组大鼠每日给予rhMFG-E8 20 μg/kg尾静脉注射，连续7 d，假手术组和模型组大鼠采取尾静脉注射等量生理盐水。采用苏木精-伊红(HE)染色观察下腔静脉血栓形成及内容物组织病理学变化；蛋白质印迹法(Western blot)检测TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白细胞TLR4、NB-κBp65(p65)表达，酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-10表达水平。组间比较采用t检验。结果模型组可见腔静脉内广泛血栓形成，且随时间延长逐渐增高，第3天达到高峰，血栓湿重[(23.6±2.42) mg]，干重[(4.32±0.39) mg]，而MFG-E8组腔静脉内血栓明显减少，第3天血栓湿重[(14.37±1.85) mg]，干重[(3.02±0.27) mg]，与模型组比较，差异有统计学意义(t＝9.582、8.667，P<0.05)；模型组TLR4表达术后第3天达高峰(1.39±0.15)，MFG-E8组TLR4表达显著低于模型组(0.51±0.03，t＝18.192，P<0.05)；模型组NF-κBp65表达术后第3天达高峰(1.25±0.13)，MFG-E8组NF-κB p65表达显著低于模型组(0.57±0.04，t＝15.810，P<0.05)；模型组TNF-α表达术后第3天达高峰[(358.1±12.36) pg/ml]，MFG-E8组TNF-α表达显著低于模型组[(205.12±7.33) pg/ml，t＝33.665，P<0.05]；模型组IL-1β表达术后第3天为(52.73±5.33) pg/ml，MFG-E8组IL-1β表达显著低于模型组[(30.14±2.97) pg/ml，t＝11.708，P<0.05]；模型组IL-4表达术后第3天达低峰[(28.11±4.34) pg/ml]，MFG-E8组IL-4表达显著高于模型组[(48.23±4.90) pg/ml，t＝9.720，P<0.05]；模型组IL-10表达术后第3天达低峰[(13.82±2.53) pg/ml]，MFG-E8组IL-10表达显著高于模型组[(30.87±3.42) pg/ml，t＝12.674，P<0.05]。结论MFG-E8可能通过下调TLR4/NF-κB信号通路，降低促炎细胞因子TNF-α、IL-1β水平，提高抑炎细胞因子IL-10、IL-4水平来抑制大鼠深静脉血栓形成。

简介：摘要目的探讨间充质干细胞（MSC）旁分泌肝细胞生长因子（HGF）的可能机制。方法①体外培养C57BL/6小鼠间充质干细胞（mMSC），并构建慢病毒质粒稳转的高表达趋化因子受体7（CXCR7）的mMSC，同时设置空白对照组和空载体对照组。待细胞传代培养20代后，采用荧光显微镜和流式细胞仪鉴定转染效率；采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测mMSC中CXCR7 mRNA表达水平。②另取传至4～6代的mMSC，分为MSC对照组〔MSC-blank组，野生型mMSC加入100 μg/L脂多糖（LPS）〕、高表达CXCR7组（MSC-OE-CXCR7组，慢病毒质粒稳转高表达CXCR7 mMSC加入100 μg/L的LPS）、高表达CXCR7对照组（MSC-OENC-CXCR7组，慢病毒空载体质粒稳转mMSC加入100 μg/L的LPS）、CXCR4抑制剂组（MSC-IE-CXCR4组，mMSC经0.1 mg/L CXCR4抑制剂TC14012预处理24 h后加入100 μg/L的LPS）和CXCR4抑制剂对照组（MSC-IENC-CXCR4组，mMSC加入与TC14012等量的DMEM培养液预处理24 h后再加入100 μg/L的LPS）。经LPS处理6 h后收集各组细胞，采用RT-PCR法检测分化抑制因子-1（ID-1）的mRNA表达；收集细胞上清液，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HGF水平。结果①经荧光显微镜及流式细胞仪检测鉴定慢病毒质粒介导的高表达CXCR7的mMSC构建成功。与空白对照组比较，高表达CXCR7慢病毒载体组mMSC中CXCR7 mRNA表达水平明显升高（2-ΔΔCt：5.81±0.97比1.02±0.12，P<0.05）；而空载体对照组mMSC中CXCR7 mRNA表达水平与空白对照组差异无统计学意义（2-ΔΔCt：0.95±0.22比1.02±0.12，P>0.05）。②与MSC-blank组相比，MSC-OE-CXCR7组高表达CXCR7或者MSC-IE-CXCR4组抑制CXCR4均可引起mMSC中ID-1 mRNA高表达（2-ΔΔCt：5.56±0.66、2.47±0.58比1.00±0.10，均P<0.05），同时可增加HGF外分泌水平（ng/L：632.02±149.98、217.21±40.53比108.53±24.62，均P<0.05）；但MSC-OENC-CXCR7组和MSC-IENC-CXCR4组mMSC中ID-1 mRNA表达水平和HGF外分泌水平与MSC-blank组比较差异均无统计学意义ID-1 mRNA（2-ΔΔCt）：1.01±0.27、1.21±0.32比1.00±0.10，HGF（ng/L）：133.56±25.19、107.11±25.30比108.53±24.62，均P>0.05。结论诱导MSC中CXCR7高表达或者抑制CXCR4表达均可增加MSC中ID-1表达，并促进HGF分泌，从而促进肺微血管内皮修复。

简介：摘要目的探讨时钟基因芳烃受体核转位因子样蛋白1(Bmal1)调控沉默信息调节因子1(SIRT1)通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白2(Smad2)通路在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧后纤维化中的作用。方法将HK-2细胞随机分组：正常对照组(A组)、缺氧/复氧组(B组)；siCTRL组(C组)、siBmal1组(D组)、HR +siCTRL组(E组)、HR+ siBmal1组(F组); HR + siCTRL +二甲基亚砜(DMSO)组(G组)、HR+ siCTRL+白藜芦醇(Resveratrol)组(H组)、HR+ siBmal1 +DMSO组(I组)、HR+ siBmal1 + Resveratrol组(J组)，用小干扰RNA(siRNA)敲低Bmal1，各组给予相应干预措施，蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞Bmal1、SIRT1、TGF-β1、Smad2、磷酸化Smad蛋白2(p-Smad2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、锌指转录因子1(snail1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达量。使用GraphPad Prism 8.0软件进行统计分析。结果B组Bmal1、SIRT1指标低于A组(0.310±0.039、0.248±0.037比0.668±0.161、0.416±0.049，t＝3.046、3.873，P<0.05)，而B组TGF-β1、p-Smad2指标高于A组(0.734±0.022、0.563±0.07比0.280±0.102、0.190±0.021，t＝6.115、7.062，P<0.05)；D、E组Bmal1、SIRT1指标低于C组(0.547±0.031、0.647±0.029比0.754±0.036，0.311±0.024、0.339±0.017比0.450±0.032，t＝6.335、3.289、5.861、4.688，P<0.05)，D、E组TGF-β1、p-Smad2指标高于C组(0.314±0.011、0.379±0.007比0.072±0.009，0.399±0.015、0.313±0.025比0.240±0.013，t＝15.910、20.150、7.736、3.553，P<0.05)；F组Bmal1、SIRT1指标低于D、E组(0.199±0.033比0.547±0.031、0.647±0.029，0.158±0.016比0.311±0.024、0.339±0.017，t＝10.950、14.000、6.433、7.606，P<0.05)，F组TGF-β1、p-Smad2指标高于D、E组(0.443±0.026比0.314±0.011、0.379±0.007，0.488±0.026比0.399±0.015、0.313±0.025，t＝8.472、4.233、4.304、8.488，P<0.05)；H组Bmal1、SIRT1指标高于G组(0.964±0.026、0.444±0.031比0.629±0.036、0.339±0.019，t＝11.830、4.829，P<0.05)，而H组TGF-β1、p-Smad2指标低于G组(0.235±0.022、0.213±0.016比0.386±0.027、0.297±0.011，t＝7.583、4.867，P<0.05)；I组Bmal1、SIRT1指标低于G组(0.484±0.018、0.183±0.015比0.629±0.036、0.339±0.019，t＝5.115、7.189，P<0.05)，I组TGF-β1、p-Smad2指标高于G组(0.497±0.015、0.637±0.025比0.386±0.027、0.297±0.011，t＝5.613、19.620，P<0.05)；J组Bmal1、SIRT1指标低于H组(0.579±0.030、0.278±0.019比0.964±0.026、0.444±0.031，t＝13.600、7.660，P<0.05)，J组TGF-β1、p-Smad2指标高于H组(0.323±0.012、0.463±0.015比0.235±0.022、0.213±0.016，t＝4.430、14.430，P<0.05)；J组Bmal1、SIRT1指标高于I组(0.579±0.030、0.278±0.019比0.484±0.018、0.183±0.015，t＝3.351、4.358，P<0.05)，J组TGF-β1、p-Smad2指标低于I组(0.323±0.012、0.463±0.015比0.497±0.015、0.637±0.025，t＝8.767、10.050，P<0.05)。结论时钟基因Bmal1通过调控SIRT1抑制TGF-β1/Smad2信号通路进而减轻HK-2细胞缺氧/复氧后纤维化。

简介：摘要目的构建靶向血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)可调控活性的小分子门控嵌合抗原受体T(smgCAR-T)细胞系统并在体外验证其抗肿瘤和可调节活性。方法采用基因全长合成和磷酸钙转染法构建smgCAR-T及其阳性(CAR＋-T)和阴性(CAR--T)对照细胞。同时构建表达VEGFR2的小鼠结直肠癌细胞(MCA38VEGFR2＋)。验证并筛选构建成功的细胞后再体外验证CAR-T细胞靶向结合能力。在不同的效靶比下检测白细胞介素-2和肿瘤坏死因子-γ的浓度来评估CAR-T细胞的体外分泌功能，用乳酸脱氢酶浓度评估CAR-T细胞的体外抗肿瘤活性。组间的比较采用t检验或单因素方差分析。结果基因测序和流式细胞术证实CAR-T细胞和靶细胞构建成功。与对照组比较，CAR＋-T细胞＋MCA38VEGFR2＋组具有最强的靶细胞杀伤能力。在smgCAR-T细胞＋MCA38VEGFR2＋组中，随着C16-(S)-3-甲基吲哚雷帕霉素(Rapalog)滴度升高靶细胞杀伤率逐渐升高；当Rapalog为40 nmol/L时杀伤率达到最大值，为(66.25±13.20)%。分别向smgCAR-T细胞＋MCA38VEGFR2＋细胞组(A和B组)加入40 nmol/L的Rapalog后，在24 h时可观察到两组杀伤率出现同步升高[(44.25±6.24)%比(49.25±5.56)%，t＝1.197，P>0.05]，差异无统计学意义。在置换培养基后，再次添加了Rapalog的A组中观察到靶细胞杀伤率升高明显；而未再次添加Rapalog的B组中靶细胞杀伤率升高缓慢；此时，A和B组杀伤率差异有统计学意义[(89.00±3.16)%比(56.50±6.61)%，t＝8.873，P<0.01]。结论构建的smgCAR-T细胞在体外展现出一定的抗肿瘤活性，且其活性受小分子化合物Rapalog的可逆调控。

简介：摘要目的了解低硒条件下T-2毒素对大鼠关节软骨及软骨下骨髓成纤维细胞生长因子8（FGF8）和成纤维细胞生长因子受体3（FGFR3）表达的影响，探讨其在大骨节病（KBD）软骨深层损伤和继发性并发症中的作用机制。方法选取24只健康雄性SD大鼠（体质量为60 ~ 80 g），采用随机数字表法分为常规饲料组（硒含量101.5 μg/kg）和低硒饲料组（硒含量1.1 μg/kg），每组12只。饲养30 d后，将常规饲料组分为对照组和T-2毒素组（100 μg·kg-1·d-1），低硒饲料组分为低硒组和低硒+ T-2毒素组，每组6只。继续饲养30 d处死大鼠，取膝关节软骨附带松质骨，HE染色观察膝关节软骨病理学改变；免疫组化法检测膝关节软骨及软骨下骨髓FGF8和FGFR3表达情况，计算关节软骨FGF8和FGFR3阳性表达率，并通过Image-Pro Plus 6.0软件测定软骨下骨髓FGF8和FGFR3阳性表达积分光密度（IOD）值。结果光镜下，低硒+ T-2毒素组软骨细胞稀疏，关节软骨深层和中层可见空的软骨细胞囊增多，软骨细胞死亡成为红染的细胞影子，深层区域内细胞外基质降解而淡染，成为坏死无结构区，附近可见增生的肉芽组织。低硒+ T-2毒素组大鼠关节软骨FGF8阳性表达率[（88.61 ± 10.97）%]高于对照、低硒、T-2毒素组[（10.35 ± 2.48）%、（19.26 ± 3.08）%、（58.89 ± 9.29）%，P均< 0.05]，软骨下骨髓FGF8阳性表达IOD值[（16.73 ± 1.72）× 106]高于对照、低硒、T-2毒素组[（1.20 ± 0.41）× 106、（4.33 ± 0.97）× 106、（12.80 ± 1.12）× 106，P均< 0.05]。低硒+ T-2毒素组大鼠关节软骨FGFR3阳性表达率[（89.76 ± 8.59）%]高于对照、低硒、T-2毒素组[（13.18 ± 2.25）%、（21.15 ± 2.33）%、（32.55 ± 6.72）%，P均< 0.05]，软骨下骨髓FGFR3阳性表达IOD值[（16.50 ± 5.36）× 106]高于对照、低硒、T-2毒素组[（7.58 ± 1.02）× 106、（10.73 ± 7.13）× 106、（9.83 ± 5.63）× 106，P均< 0.05]。结论在低硒条件下T-2毒素改变了大鼠关节软骨深层及软骨下骨髓FGF8和FGFR3的表达，FGF8和FGFR3的高表达可能参与KBD继发性改变的发生和发展。

简介：摘要目的探讨miRNA-186-3p（miR-186-3p）对子宫颈癌CaSki细胞凋亡、迁移、侵袭的影响及与转化生长因子β（TGF-β）-Smad信号通路的关系。方法将载有miR-186-3p抑制基因、miR-186-3p模拟物的质粒分别转染至子宫颈癌CaSki细胞，分别为miR-186-3p-I组、miR-186-3p-M组；另将转染空载质粒的CaSki细胞作为对照，为miR-186-3p-C组。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率，采用Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力；采用蛋白质印迹法检测各组细胞TGF-β-Smad信号通路相关蛋白表达水平；采用Starbase软件预测miR-186-3p靶基因，并用双荧光素酶报告基因实验进行验证。结果miR-186-3p-M组细胞凋亡率均低于miR-186-3p-I组和miR-186-3p-C组[（7.5±3.2）%比（13.9±0.7）%、（12.7±0.6）%，均P<0.05]。miR-186-3p-M组迁移细胞数[（218±25）个比（168±13）个、（175±13）个，均P<0.001]和侵袭细胞数均多于miR-186-3p-I组和miR-186-3p-C组[（165±21）个比（130±11）个、（142±12）个，均P<0.001]。miR-186-3p-M组TGF-β、Smad2、Smad3、磷酸化Smad2（p-Smad2）、磷酸化Smad3（p-Smad3）蛋白相对表达量均最低，与另两组比较，差异均有统计学意义（均P<0.001）。采用Starbase软件预测miR-186-3p与XIST RNA互补结合；双荧光素酶报告基因实验显示，XIST野生型载体+miR-186-3p模拟物质粒共转染的细胞相对荧光素酶活性低于XIST野生型载体+miR-186-3p空载质粒共转染的细胞（P<0.001）。结论miR-186-3p可能直接与XIST RNA结合而下调TGF-β-Smad信号通路活性，进而增强子宫颈癌CaSki细胞凋亡、迁移、侵袭活性。

简介：摘要目的探讨hsa-miR-199a-5p对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)纤维化过程的影响及其与转化生长因子(TGF)-β/Smad信号通路的关系。方法将携带hsa-miR-199a-5p基因的慢病毒载体(hsa-miR-199a-5p组)及空白慢病毒载体(rLv-NC组)感染KFs，并设空白对照组(KFs正常培养)。采用CCK-8法检测各组KFs的增殖情况。慢病毒感染KFs 48 h后，应用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组KFs的hsa-miR-199a-5p表达水平，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，Transwell实验检测细胞侵袭能力，并分别采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad3及TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平。结果病毒感染KFs 48 h后，hsa-miR-199a-5p组的hsa-miR-199a-5p表达量明显高于rLv-NC组和空白对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；与rLv-NC组和空白对照组相比，hsa-miR-199a-5p组的细胞增殖率、侵袭性均有所降低，细胞凋亡率有所升高，差异有统计学意义(P<0.01)；hsa-miR-199a-5p组的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、Smad3、TGF-β1的mRNA及蛋白表达水平均明显低于rLv-NC组和空白对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。结论hsa-miR-199a-5p可能通过抑制TGF-β/Smad通路的表达，抑制KFs增殖与侵袭，并促进KFs凋亡，从而抑制瘢痕疙瘩纤维化。

简介：摘要目的观察尿道上皮细胞中微小RNA(miR)-155-5p对转化生长因子-β(TGF-β)/Smad信号通路的影响，从而参与创伤性尿道狭窄炎症和纤维化的调节。方法将miR-155-5p mimics及miR-155-5p inhibitor转染到尿道上皮细胞SV-HUC-1中，转染24 h后使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SV-HUC-1细胞中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，白细胞介素(IL)-1β和IL-6的水平。qPCR和蛋白印记分别检测血管内皮生长因子(VEGF)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Collagen Ⅳ)、TGF-β、Smad3和Smad7的mRNA和蛋白表达水平。组间分析采用单因素方差分析。结果IL-1β、IL-6和TNF-α的水平在转染miR-155-5p mimics后增加(496.27±18.87比255.77±21.40，F＝213.184；931.93±78.50比494.90±30.81，F＝80.569；915.70±30.02比486.60±25.05，F＝361.323，P<0.01)，但在转染miR-155-5p inhibitor后下降(140.10±14.77比294.07±10.26，F＝219.855；257.63±33.75比495.47±29.66，F＝84.052；275.47±30.31比484.20±25.34，F＝83.746，P<0.01)。miR-155-5p mimics增加了SV-HUC-1细胞中VEGF、FN和Collagen Ⅳ的mRNA(1.87±0.08比0.96±0.07，F＝251.787；1.78±0.12比0.96±0.06，F＝116.780；2.04±0.12比0.98±0.06，F＝197.344)和蛋白质水平(1.55±0.05比0.98±0.12，F＝60.460；2.28±0.04比1.00±0.11，F＝391.095；1.97±0.06比0.99±0.06，F＝407.516)，但miR-155-5p inhibitor降低了SV-HUC-1细胞中VEGF、FN和Collagen Ⅳ的mRNA(0.47±0.06比0.99±0.07，F＝104.457；0.54±0.06比0.98±0.08，F＝58.767；0.39±0.03比0.96±0.07，F＝162.360)和蛋白质水平(0.35±0.03比0.98±0.09，F＝137.388；0.32±0.05比0.99±0.09，F＝127.047；0.43±0.05比0.98±0.06，F＝137.224，P<0.01)。转染miR-155-5p mimics后TGF-β和Smad3的mRNA表达水平(2.42±0.07比1.01±0.05，F＝817.164；1.87±0.08比0.95±0.02，F＝399.340，P<0.01)和蛋白表达水平(1.56±0.13比0.99±0.05，F＝51.031；1.27±0.02比0.98±0.07，F＝48.519，P<0.05)升高，转染miR-155-5p inhibitor后下降mRNA水平(0.41±0.03比1.02±0.06，F＝249.053；0.38±0.05比1.00±0.04，F＝342.250)和蛋白水平(0.14±0.07比1.02±0.08，F＝194.139；0.72±0.03比1.02±0.09，F＝30.899，P<0.01)；而Smad7的mRNA水平(0.43±0.05比0.97±0.02，F＝301.655)和蛋白水平(0.20±0.03比0.95±0.04，F＝684.122)被miR-155-5p mimics下调并被miR-155-5p inhibitor上调(mRNA水平为2.16±0.07比0.97±0.07，F＝433.500；蛋白水平为1.40±0.09比0.98±0.07，F＝41.779，P<0.01)。结论miR-155-5p通过激活TGF-β/Smad信号通路，从而参与创伤性尿道狭窄炎症和纤维化的调节。

简介：摘要胎盘生长因子（PLGF）是从人胎盘互补DNA（cDNA）文库中分离纯化而得，合体滋养层细胞为其主要合成部位。PLGF可与位于滋养层细胞和血管内皮细胞的酪氨酸酶受体结合，分别通过自分泌调节滋养层细胞增殖和旁分泌调节血管新生。PLGF对孕产妇妊娠过程中胎盘的形成和发育具有极为重要的作用，其分泌异常与妊娠并发症（如妊娠合并糖尿病、妊娠期高血压疾病、子痫前期等）的发生、进展关系密切。对PLGF的结构、受体、生物活性及其与正常妊娠、妊娠并发症的关系作一综述，为妊娠并发症的临床指导及辅助诊断提供参考。

简介：摘要20%~30%的乳腺癌患者人表皮生长因子受体2（HER2）阳性表达，该类乳腺癌患者预后普遍较差，HER2靶向药物的应用使该类患者获得希望。目前对乳腺癌HER2的检测广泛使用的是免疫组织化学（IHC）检测HER2蛋白过表达结合荧光原位杂交（FISH）检测HER2基因扩增的综合检测策略，但这种策略在临床应用中对于一些HER2表达比较特异的患者仍存在争议。RNAscope技术可对乳腺癌HER2 mRNA水平的表达进行原位分析，成为新的补充检测方法。文章从蛋白质、DNA和RNA三个水平对乳腺癌HER2检测方法进行阐述、归纳，为更精准的HER2检测方法提供参考。

简介：摘要乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，世界各地乳腺癌发病率居高不下。人表皮生长因子受体2(HER-2)是一种酪氨酸激酶受体，HER-2异常扩增或过度表达的乳腺癌具有侵袭性强、预后差的特点。随着抗HER-2药物的出现，HER-2阳性乳腺癌患者的生存期逐渐延长，患者预后得以改善，但传统HER-2靶向药物对HER-2低表达患者的疗效十分有限，HER-2低表达乳腺癌的治疗依然面临挑战。文章回顾了美国临床肿瘤学会和美国病理学家学会指南对于HER-2检测规范化的过程，提出了定义HER-2低表达乳腺癌这一新亚型的数据依据及可能。新一代HER-2靶向药物的诞生，为HER-2低表达患者的治疗提供新的选择，这将重新定义HER-2低表达乳腺癌，并为HER-2低表达乳腺癌患者预后改善提供新的机会。

简介：摘要基于靶向治疗标志物人类表皮生长因子受体-2（HER2）的分子靶向药物已被证实可以使晚期胃癌患者生存获益，及时、准确诊断HER2状态至关重要，但病理组织标本的获取为有创操作且存在诸多问题。目前，应用CT、MRI、PET/CT及其影像组学等在术前无创评估胃癌HER2状态已成为研究的热点。该文中就不同成像模式下的影像学技术及影像组学对胃癌HER2状态预测价值的研究现状和进展进行综述。

简介：摘要乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，世界各地乳腺癌发病率居高不下。人表皮生长因子受体2(HER-2)是一种酪氨酸激酶受体，HER-2异常扩增或过度表达的乳腺癌具有侵袭性强、预后差的特点。随着抗HER-2药物的出现，HER-2阳性乳腺癌患者的生存期逐渐延长，患者预后得以改善，但传统HER-2靶向药物对HER-2低表达患者的疗效十分有限，HER-2低表达乳腺癌的治疗依然面临挑战。文章回顾了美国临床肿瘤学会和美国病理学家学会指南对于HER-2检测规范化的过程，提出了定义HER-2低表达乳腺癌这一新亚型的数据依据及可能。新一代HER-2靶向药物的诞生，为HER-2低表达患者的治疗提供新的选择，这将重新定义HER-2低表达乳腺癌，并为HER-2低表达乳腺癌患者预后改善提供新的机会。

简介：摘要目的探讨胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）抑制剂在缓解糖尿病肾病（DKD）小鼠肾小管病变中的作用。方法C57BL/6J雄性小鼠被随机分为正常对照组（n=10）和DKD模型组（n=30）。用单次腹腔注射链脲佐菌素（STZ，150 mg/kg）的方法建立糖尿病肾病模型。建模成功后，DKD模型组小鼠被随机分为DKD组（n=10）、贝那普利组（n=10）和IGF-1R抑制剂组（n=10）。IGF-1R抑制剂组给予30 mg·kg-1·d-1 IGF-1R抑制剂灌胃；贝那普利组给予30 mg·kg-1·d-1贝那普利灌胃；正常对照组和DKD组分别给予等量生理盐水灌胃。8周后处死小鼠，记录小鼠体重、肾重。收集小鼠血清、尿液和肾脏样本。自动生化仪上测定血糖、尿白蛋白等生化指标，计算尿白蛋白排泄率。HE、PAS染色法观察小鼠肾脏病理改变。免疫组化、Western印迹法测定肾组织磷酸化（p）IGF-1R的表达。结果与正常对照组比较，DKD组小鼠的随机血糖、肾重/体重、尿白蛋白排泄率明显升高（均P<0.01）。DKD组小鼠肾脏病理表现为肾小球增大，肾小管管腔狭窄，肾小管肿胀、萎缩；近端小管上皮（PTE）细胞数目减少，肾小管损伤评分增加，平均肾小球体积增大，肾组织pIGF-1R表达增加（均P<0.05）。与DKD组相比，IGF-1R抑制剂组和贝那普利组小鼠尿白蛋白排泄率显著降低（P<0.01），肾脏病理改变减轻，且IGF-1R抑制剂组的作用效果更加显著。与DKD组相比，IGF-1R抑制剂组肾组织pIGF-1R蛋白表达减少（P<0.05）；与贝那普利组相比，IGF-1R抑制剂组肾组织pIGF-1R蛋白表达减少（P<0.05）。结论IGF-1R抑制剂能减轻DKD小鼠肾小管病变，且效果优于贝那普利。

简介：摘要目的探讨乳腺癌患者人表皮生长因子受体2（HER2）基因的扩增状态与患者临床病理特征相关性，并分析乳腺癌患者腋窝淋巴结转移的影响因素。方法收集2016年1月至2019年3月在滕州市中心人民医院病理科做常规病理检查且HER2免疫组织化学（IHC）结果为++的262例乳腺癌患者病理资料，包括年龄、肿瘤长径、组织学分级、病理类型、是否有淋巴结转移、肿瘤数量、肿瘤部位；用IHC法检测石蜡标本p53、Ki-67、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的表达结果；用荧光原位杂交（FISH）法检测HER2基因的扩增状态；分析HER2基因扩增是否与上述临床病理特征相关，以及腋窝淋巴结转移是否与上述特征相关。结果262例乳腺癌患者有69例HER2扩增阳性，阳性扩增率为26.3%；HER2基因扩增与Ki-67增殖指数和ER、PR的表达状态相关，差异有统计学意义（χ2=13.27，P<0.01；χ2=34.97，P<0.01；χ2=38.31，P<0.01）；与年龄、肿瘤长径等其余临床病理特征均无关（均P>0.05）。262例乳腺癌患者中发生腋窝淋巴结转移106例（40.5%）；淋巴结转移与肿瘤长径显著相关（χ2=29.10，P<0.01），与其余临床病理特征均无相关（均P>0.05）。结论乳腺癌HER2基因扩增状态与Ki-67增殖指数和ER、PR的表达相关，肿瘤大小为影响乳腺癌患者腋窝淋巴结转移的因素，准确判断上述指标能更好地指导乳腺癌患者的治疗和评估预后。

简介：无