简介：摘要目的探讨miRNA-372-3p（miR-372-3p）在胃癌组织及细胞中的表达及其对RAB22A表达的调控，并探讨其对胃癌细胞生物学功能的影响。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测山西省肿瘤医院2018年12月至2019年12月70例胃癌确诊患者癌组织和癌旁组织中miR-372-3p的表达水平。在胃癌MGC-803和SGC-7901细胞中转染miR-372-3p抑制剂，并以miR-372-3p NC（空载体）作为对照；分别使用克隆形成实验、CCK-8法和流式细胞术检测细胞克隆形成能力、细胞增殖能力和凋亡水平。采用双荧光素酶报告基因实验检测MGC-803细胞miR-372-3p和RAB22A表达的相关性。以miRNA-21（miR-21）作为阴性对照，采用蛋白质印迹法检测MGC-803、SGC-7901细胞RAB22A蛋白的表达。结果RT-PCR结果显示，与癌旁组织比较，胃癌组织中miR-372-3p相对表达量上调，差异具有统计学意义（0.51±0.37比0.77±0.48，t=1.98，P=0.005）。不同肿瘤长径和病理分级的胃癌组织中miR-372-3p表达水平差异均有统计学意义（均P<0.05）。体外实验表明，低表达miR-372-3p能抑制MGC-803细胞和SGC-7901细胞克隆的形成[（211±4）个比（410±5）个，t=2.78，P=0.001；（244±8）个比（423±7）个，t=2.76，P=0.001]，降低MGC-803和SGC-7901细胞增殖活性（MGC-803细胞48 h吸光度值0.39±0.06比0.57±0.03，t=3.18，P=0.01；MGC-803细胞72 h吸光度值0.50±0.05比0.81±0.06，t=2.78，P<0.01；SGC-7901细胞72 h吸光度值：0.50±0.09比0.79±0.09，t=2.77，P=0.01），提高MGC-803细胞早期凋亡率[（25.19±0.26）%比（20.02±0.04）%，t=4.30，P<0.05]。双荧光素酶报告基因实验发现，同miR-372-3p NC与RAB22A野生型基因共转染相比，miR-372-3p抑制剂与RAB22A野生型基因共转染后，MGC-803细胞荧光素酶活性下降，差异有统计学意义（1.00±0.04比0.53±0.06，t=3.18，P=0.01）；蛋白质印迹法结果显示，敲低miR-372-3p能抑制MGC-803、SGC-7901细胞RAB22A蛋白表达。结论胃癌组织miR-372-3p表达上调，miR-372-3p可能促进RAB22A的表达并调控胃癌的发生发展，可作为潜在的治疗靶标。

简介：目的：探讨血浆中miR-16、miR-34a、miR-200a、miR-375、miR-451化疗前、后表达水平的变化与乳腺癌临床病理特征、化疗疗效及预后之间的关系。方法选取复发转移性乳腺癌患者79例，采用GenExver-sion6软件、Normfinder软件和Genorm软件确定本实验的内对照，采用实时荧光定量PCR法检测患者化疗前及化疗2个周期时的血浆miRNA表达水平，并分析化疗前、后表达水平与患者临床病理特征、化疗疗效及预后的关系。结果miR-34a为相对表达最稳定的内对照。血浆miR-451高表达的患者激素受体（hormonereceptor，HR）阳性率显著高于低表达者（P=0.031），分别为84.2%和62.5%。血浆miR-200a化疗后表达变化与客观缓解率（objectiveresponserate，ORR）显著相关（P=0.032），miR-200a化疗后表达升高者的ORR显著高于降低者，分别为57.9%和29.3%。血浆miR-200a化疗后表达水平升高组的无进展生存时间（progression-freesurvival，PFS）与降低组相比，组间差异具有统计学意义（P=0.009），分别为10.3个月和5.2个月。miR-16、miR-200a、miR-375和miR-451表达水平及化疗后变化对总生存时间（overallsurvival，OS）均无显著影响。结论血浆miRNA化疗前、后表达水平对复发转移性乳腺癌患者临床病理特征、化疗疗效及预后有一定的预测价值。

简介：摘要目的探讨miRNA-5089-5p（miR-5089-5p）体外对食管癌细胞增殖和迁移能力的影响及其与组织蛋白酶B（CTSB）基因表达的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测2017年3月至2019年12月鄂东医疗集团黄石市中心医院食管癌手术切除癌组织标本及相应癌旁组织标本31例，以及食管癌TE-13、EC9706、Eca109、KYSE30细胞株和正常食管黏膜上皮HET-1A细胞miR-5089-5p的表达水平。选择miR-5089-5p表达量最低的食管癌细胞，分为两组，分别转染miR-5089-5p模拟物（miR-5089-5p组）及其阴性对照序列（阴性对照组）；转染48 h后，qRT-PCR检测两组细胞miR-5089-5p表达水平；采用CCK-8法和划痕愈合实验分别检测两组细胞的增殖和迁移能力。用microRNA.org、Deepbase v2.0在线工具预测miR-5089-5p的靶基因，并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。qRT-PCR和蛋白质印迹法检测miR-5089-5p组、阴性对照组细胞靶基因的表达水平，同时采用蛋白质印迹法检测两组细胞增殖相关蛋白PCNA、Ki-67和迁移相关蛋白N-Cadherin、Twist表达。结果食管癌患者癌组织和癌旁组织中miR-5089-5p的相对表达量分别为1.54±0.53和7.07±1.25（t=24.06，P<0.01）；各食管癌细胞株miR-5089-5p相对表达量均低于正常食管黏膜上皮HET-1A细胞（均P<0.05），相对表达量最低的是Eca109细胞（0.12±0.03）。与阴性对照组相比，随着转染时间延长，miR-5089-5p组Eca109细胞增殖能力逐渐降低，从48 h开始两组间差异均有统计学意义（均P<0.05）；迁移能力亦降低[细胞划痕愈合率：（29±5）%比（64±8）%，t=3.91，P<0.01]。在线工具预测miR-5089-5p的靶基因可能是CTSB，双荧光素酶报告基因实验证实miR-5089-5p互补结合CTSB 3'UTR。qRT-PCR检测显示，与阴性对照组相比，miR-5089-5p组Eca109细胞CTSB mRNA相对表达量降低（0.23±0.04比1.01±0.09，t=8.27，P<0.01），蛋白质印迹法检测显示，CTSB蛋白表达水平亦降低，同时细胞增殖相关蛋白PCNA、Ki-67和细胞迁移相关蛋白N-Cadherin、Twist表达水平均降低。结论食管癌患者癌组织和细胞株中miR-5089-5p均低表达，miR-5089-5p能抑制食管癌Eca109细胞增殖和迁移能力，此作用可能是通过下调CTSB基因表达实现的。

简介：摘要目的研究特发性肺动脉高压(IPAH)患者血浆中的miRNA-548a-5p预测血流动力学恶化的价值。方法回顾性纳入2010年5月至2017年6月在上海市肺科医院住院的12例IPAH患者及12名对照者。所有患者均进行了右心导管检查。通过miRNA微阵列基因芯片分析患者和正常对照差异表达的miRNA。线性回归分析miRNA-548a-5p对血流动力学相关参数升高的预测作用。受试者工作特征曲线分析miRNA-548a-5p鉴别患者和对照人群效能。结果IPAH患者和对照人群的一般情况差异无统计学意义。IPAH组miRNA-548a-5p表达明显高于对照组(t＝3.038，P<0.05)。部分血流动力学参数和miRNA-548a-5p呈良好的相关性。多重线性回归分析提示miRNA-548a-5p表达水平是预测IPAH患者平均肺动脉压和肺血管阻力升高的独立预测因子。受试者工作特征曲线分析结果显示miRNA-548a-5p的临界值为10.5，其表达水平升高，血流动力学恶化。结论血浆中miRNA-548a-5p可能是预测IPAH患者血流动力学恶化的生物标志物。

简介：摘要：本项目针对卵巢肿瘤标志miRNAs，从精简传感体系组成和级联信号放大的综合效应出发，构建集目标miRNA识别、聚合引物、聚合模板、信号报告功能于一体的功能能集成式核酸探针（FOP），同时利用核酸聚合醇、内切酶等工具酶的功能特性和球形纳米材料的大比表面积、电学效应等优势，研发相应的级联放大型核酸电化学纳米生物传感识别新策略。本项目拟深入开展卵巢肿瘤标志物检测技术的前沿性研究，进而形成一批恶性卵巢肿瘤早期针对行之有效的新方法与新技术，有利于推动卵巢肿瘤早期诊断技术和生物医学的进一步发展，具有十分重要的现实意义。

简介：摘要目的探讨利拉鲁肽对2型糖尿病(T2DM)患者血清miRNA表达谱及相关细胞信号通路蛋白水平的影响。方法选取唐山市人民医院于2020年10月至2021年10月期间收治的26例T2DM患者，均接受利拉鲁肽治疗，所有患者持续治疗3个月，比对治疗前后血清miRNA变化情况，采用Pearson相关分析hsa-miR29a-3p变化值与血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)、转化生长因子(TGF)-β1变化值的相关性。对治疗前后表达水平变化差异显著的miRNA行基因本体论(GO)和KEGG通路富集分析，以及miRNA-mRNA网络分析。结果治疗后患者的糖化血红蛋白A1c(HbAlc)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、MMP-9以及TGF-β1水平均明显降低，而高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平明显增加(P均<0.05)。治疗后hsa-miR1-3p、hsa-miR21-5p、hsa-miR29a-3p、hsa-miR30c-5p、hsa-miR133a-5p、hsa-miR500-5p、hsa-mi6806-5p均明显降低(P均<0.05)，其中hsa-miR29a-3p降低程度最明显(P<0.001)。Pearson相关分析显示hsa-miR29a-3p变化值与MMP-9、TGF-β1变化值均呈正相关(r＝0.638，0.586)，差异有统计学意义(P均<0.05)。GO分析结果显示：胶原分解代谢过程、轴突延伸以及细胞黏附占生物过程前3位。细胞组分中内质网腔、突触后密度以及细胞连接占据前3位。分子功能中Rho GTPase结合、细胞外基质结构成分、磷脂酰肌醇3磷酸结合占据前3位。KEGG分析显示：差异表达基因主要富集于晚期糖基化终末产物受体信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、Wnt信号通路(P均<0.05)。miRNA-mRNA网络分析显示差异表达miRNA对应244个靶基因mRNA。结论T2DM患者经利拉鲁肽治疗后，血清hsa-miR29a-3p等与炎症、胶原分解代谢过程相关的miRNA表达下调，可能有利于减少患者心肌纤维化。

简介：摘要目的探讨miRNA-34b（miR-34b）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达情况及其体外对人NSCLC A549细胞增殖、侵袭能力的影响。方法收集2015年6月至2017年3月山西省肿瘤医院40例NSCLC患者癌组织及癌旁正常上皮组织（距癌灶边缘5 cm以上）标本。向A549细胞分别转染miR-34b序列模拟物（实验组）和无关序列（阴性对照组）。采用反转录、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测各组织和各组A549细胞中miR-34b表达情况；采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测实验组和阴性对照组A549细胞增殖活性，Transwell法检测两组A549细胞侵袭能力。结果NSCLC组织中miR-34b相对表达量低于癌旁正常上皮组织（0.52±0.06比1.05±0.17），差异有统计学意义（P<0.001）。实验组A549细胞miR-34b相对表达量高于阴性对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。MTT法检测显示，实验组A549细胞培养24、48h细胞增殖能力（吸光度值）均低于阴性对照组（均P<0.01）。Transwell法检测显示，实验组侵袭的A549细胞数少于阴性对照组[（49.53±5.03）个比（121.00±12.06）个，P<0.01]。结论miR-34b在NSCLC组织中低表达，miR-34b表达上调可抑制NSCLC A549细胞增殖和侵袭。

简介：摘要目的研究二甲双胍对2型糖尿病患者微小RNA(miRNA)表达水平的影响，并利用网络药理学进行分析，预测其治疗作用潜在的靶点及途径。方法筛选本院入院治疗的初发2型糖尿病患者15例，住院期间及出院后均规律服用盐酸二甲双胍片。患者服药6个月后，对比其用药前后血清基质金属蛋白酶(MMP)-9、转化生长因子(TGF)-β1及心肌纤维化相关miRNA的表达水平。对呈现统计学差异表达的miRNA进行基因本体论(GO)和KEGG通路富集分析，并构建差异表达miRNA对应靶基因信使RNA(mRNA)网络图。结果患者用药后，血清MMP-9水平较用药前明显下降(P<0.05)。二甲双胍可显著下调患者血清人类微小RNA(hsa-miR) 29a-3p、hsa-miR133a-5p、hsa-miR21-5p、hsa-miR30c-5p、hsa-miR1-3p表达水平(P<0.05或P<0.01)。GO和KEGG分析结果显示，差异表达miRNA主要集中在内质网腔、突触、基膜等细胞组分中，通过胶原分解代谢过程、短时神经元突触可塑性调节、轴突延伸等生物过程来发挥Rho GTP酶(Rho GTPase)结合、参与细胞外基质结构成分等分子功能；其主要富集于糖尿病并发症晚期糖基化终末产物-糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、Wnt信号通路等多种细胞信号转导通路。miRNA-mRNA网络分析结果显示，与差异表达miRNA对应mRNA共230个。结论二甲双胍可通过下调相关miRNA表达，参与相关细胞信号通路转导，调控染色质、核酸结合及酶活性过程而发挥其治疗2型糖尿病的作用。

简介：摘要多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是育龄妇女最常见的内分泌紊乱疾病，以卵巢的多囊样改变、雄激素过多和排卵障碍为主要临床特征。已有大量研究证实，miRNAs在PCOS的病理生理学中发挥重要作用。miRNA-17~92基因簇是一个包含多顺反子簇的miRNA家族，最初被认为是癌基因，后来被证实可触发多种生理和病理过程。新近研究显示，miRNA-17~92基因簇可通过调控卵巢颗粒细胞的功能而在PCOS的发生发展过程中发挥重要作用。本文就miRNA-17~92基因簇在PCOS发生发展中的作用及其分子途径进行综述。

简介：摘要目的研究微小RNA-144-3p(miRNA-144-3p)靶向调控配对盒基因8(PAX8)对甲状腺癌细胞顺铂耐药性的影响。方法体外培养人甲状腺癌细胞株FTC-133，并构建对顺铂耐药的人甲状腺癌细胞株FTC-133，采用反转录PCR(RT-PCR)检测FTC-133细胞和顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量。将顺铂耐药FTC-133细胞分为A组、B组、C组，A组不作任何处理，B组转染空质粒，C组转染pCDNA3. 1＋miRNA-144-3p质粒，采用RT-PCR检测各组miRNA-144-3p、PAX8相对表达量，采用MTT法检测各组顺铂耐药细胞的半数抑制浓度(IC50)值；采用CCK-8法检测各组增殖率，采用流式细胞术检测各组凋亡率。结果顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量显著高于FTC-133细胞[(0.93±0.24) vs (0.26±0.04), P<0.05]；B组顺铂耐药FTC-133细胞IC50值、增殖率、凋亡率及miRNA-144-3p、PAX8相对表达量与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)；C组顺铂耐药FTC-133细胞IC50值、增殖率及miRNA-144-3p相对表达量显著高于B组(P<0.05)，细胞凋亡率、PAX8相对表达量显著低于B组(P<0.05)。结论miRNA-144-3p过表达可能通过下调PAX8基因表达而增加甲状腺癌细胞的顺铂耐药性，促进甲状腺癌细胞增殖并抑制其凋亡。

简介：目的：初步研究N-乙酰半胱氨酸活性炭缓释微囊对幼鼠非酒精性脂肪肝病的保护作用,并且探讨其对miRNA及相应的靶基因的影响。方法：采用高脂饲料喂养的方法复制幼鼠非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholicfattyliverdisease,NAFLD）模型。HE染色观察幼鼠肝组织脂肪变性程度;microRNA芯片检测肝组织的miRNA表达谱;荧光定量PCR对miRNA进行验证;采用荧光定量PCR和Westernblot法对目标miRNA进行靶基因预测并进行验证。结果：根据检测结果,初步确定miRNA199a-5p和miRNA-378-5p是NAFLD的关键miRNA,脂蛋白脂酶（lipoproteinlipase,Lpl）是miRNA199a-5p的靶基因,固醇调节元件结合蛋白（sterolregulatoryelementbindingproteins-1,Srebp1）、CCAAT增强子结合蛋白α（CCAATenhancerbindingproteinalfa,C/EBP-α）是miRNA-378-5p的靶基因。结论：推测N-乙酰半胱氨酸活性炭缓释微囊可能通过上调Lpl表达水平,下调Srebp1和C/EBP-α表达水平。这些基因与脂肪肝密切相关,可能对幼鼠NAFLD具有保护作用。

简介：目的探讨DNA修复基因RAD523＇非翻译区（3＇-untranslatedregion,3＇-UTR）miRNA靶序列单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphism,SNP）与广西地区人群肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）遗传易感性的关系。方法采用病例-对照研究,对1002例确诊的HCC新发病例和1013例非肿瘤患者RAD52基因3＇-UTR区域miRNA靶序列SNPs（rs1051669、rs1051672、rs7301931和rs7310449）进行基因分型,并分析其基因型频率分布及其与HCC遗传易感性的关系。结果RAD52基因各SNP基因型在病例组和对照组中的分布频率差异均无统计学意义（P〉0.05）。调整年龄、性别、吸烟、饮酒和HBV感染等因素后,未发现各SNP与HCC易感性有关联;分层分析发现,在女性人群中,与携带rs1051669C等位基因相比,TT基因型可显著降低个体罹患HCC的风险（TTvsCT/CC：OR=0.03,95%CI：0.00～0.62,P=0.03）;与携带rs1051672G等位基因相比,AA基因型可显著降低个体罹患HCC的风险（AAvsGA/GG：OR=0.03,95%CI：0.01～0.88,P=0.04）。结论RAD52基因3＇-UTR区域miRNA靶序列SNPsrs1051669、rs1051672位点可能与广西地区女性人群HCC易感性有关。

简介：摘要目的探讨miRNA-17～92（miR-17～92）基因簇及线粒体融合蛋白2（MFN2）蛋白在子宫内膜癌（EC）中的表达及其临床意义。方法收集2008年1月至2014年12月山东第一医科大学第二附属医院72例EC、36例子宫内膜非典型增生患者子宫内膜病变组织及22例因子宫颈上皮内瘤变Ⅲ级行全子宫切除术的正常子宫内膜组织；同时收集所有患者蜡块组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组织中miR-17～92表达水平，免疫组织化学SP法检测各蜡块组织中MFN2蛋白定位及表达水平。分析miR-17～92、MFN2蛋白与EC患者临床病理特征的关系；采用Kaplan-Meier法绘制miR-17～92、MFN2不同水平患者生存曲线，并行log-rank检验；应用Cox比例风险回归模型进行多因素生存分析。结果miR-17～92在EC、非典型增生及正常子宫内膜组织中相对表达量分别为1.49±0.46、1.01±0.30、0.69±0.20；EC组织中miR-17～92的表达水平高于其他子宫内膜组织，差异均有统计学意义（均P<0.01）。MFN2蛋白在EC、非典型增生、正常子宫内膜组织中的高表达率分别为20.8%（15/72）、39.4%（13/33）、85.0%（17/20）；EC组织中MFN2蛋白高表达率低于其他子宫内膜组织，差异均有统计学意义（均P<0.012 5）。EC患者中，组织学类型Ⅱ型患者miR-17～92相对表达量高于Ⅰ型患者（P<0.05），肌层浸润深度≥1/2患者miR-17～92相对表达量高于浸润深度<1/2患者（P<0.05）；组织学类型Ⅰ型患者MFN2蛋白高表达率高于Ⅱ型患者（P<0.05），国际妇产科联盟（FIGO）分级Ⅰ级患者MFN2蛋白高表达率高于Ⅱ、Ⅲ级患者（P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示，按EC患者miR-17～92中位相对表达量（1.421）分组时，低表达组（36例）中位总生存（OS）时间未达到，高表达组（36例）为36个月（95% CI 32～42个月），两组间OS差异有统计学意义（P＝0.049）；MFN2蛋白高表达组（15例）中位OS时间未达到，低表达组（57例）为38个月（95% CI 33～41个月），两组间OS差异有统计学意义（P＝0.046）。多因素Cox回归分析显示，miR-17～92、MFN2表达水平为EC患者生存的独立影响因素（HR＝3.10，95% CI 1.36～7.07，P＝0.007；HR＝0.30，95% CI 0.09～0.99，P＝0.048）。结论EC组织中miR-17～92高表达、MFN2蛋白低表达，二者可能参与了EC的发生、发展，可作为判断EC患者预后的指标。

简介：摘要目的探讨miRNA-1-3p（miR-1-3p）对骨肉瘤细胞肌细胞增强因子2A（MEF2A）表达及生物学功能的影响。方法收集2019年1月至2020年1月山西省肿瘤医院临床确诊的20例骨肉瘤患者的肿瘤组织及癌旁正常组织，使用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测样本中miR-1-3p表达水平。采用qRT-PCR检测骨肉瘤细胞株U2-OS、SAOS-2、MG63、SW1353及人正常成骨细胞株hFOB1.19中miR-1-3p表达水平，选择miR-1-3p表达水平最低的细胞株进行后续实验。构建过表达miR-1-3p载体（miR-1-3p mimcs），转染miR-1-3p mimcs的细胞为miR-1-3p过表达组，转染空载体（miR-1-3p nc）的细胞为对照组；使用CCK-8法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化。采用miRwalk网站工具预测miR-1-3p靶基因，并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证；蛋白质印迹法检测各组细胞MEF2A蛋白的表达。结果与癌旁组织相比，骨肉瘤组织中miR-1-3p表达下调（0.31±0.14比0.62±0.21），差异有统计学意义（t=5.31，P<0.01）。miR-1-3p在骨肉瘤U2-OS细胞中表达最低；与对照组相比，miR-1-3p过表达组细胞U2-OS细胞增殖活性受抑制（48 h吸光度值0.56±0.01比0.77±0.03，t=2.77，P<0.01；72 h吸光度值0.87±0.02比1.40±0.03，t=2.93，P<0.01），细胞周期G1至S期阻滞增加[G1期（38.24±0.55）%比（32.11±0.80）%，t=9.27，P=0.01；S期（61.24±0.90）%比（67.78±0.83）%，t=7.52，P=0.02]，细胞早期凋亡率升高[（11.20±0.12）%比（1.50±0.12）%，t=2.91，P<0.05]。miRwalk网站工具预测miR-1-3p靶基因为MEF2A。双荧光素酶报告基因检测结果显示，miR-1-3p和MEF2A 3'UTR靶向结合，miR-1-3p过表达组U2-OS细胞荧光素酶活性低于对照组（海肾荧光素酶与萤火虫荧光素酶活性比值0.53±0.06比1.00±0.04，t=4.04，P<0.05）；蛋白质印迹法结果显示，miR-1-3p过表达组U2-OS细胞MEF2A蛋白表达水平较对照组低（蛋白相对表达量0.41±0.14比0.77±0.12，t=3.93，P<0.05）。结论miR-1-3p低表达可能与骨肉瘤细胞增殖、凋亡和周期改变相关。miR-1-3p可负向调控MEF2A蛋白表达并调控骨肉瘤的发生、发展。

简介：摘要目的探讨长波紫外线（UVA）诱导人成纤维细胞（HSF）光老化中miRNA-1246的表达及上调miR-1246表达对靶基因MAPK14及细胞老化的影响。方法HSF分离自苏州大学附属儿童医院收集的健康儿童包皮环切术后皮肤标本，每日以10 J/cm2 UVA照射HSF，在初次照射及照射3、7、14 d采用实时定量PCR检测miR-1246的表达。将HSF细胞分为空白对照组、UVA组、miR-1246组、UVA + miR-1246组，通过慢病毒转染上调miR-1246的表达和照射UVA 14 d后，收集各组细胞，采用MTT检测细胞增殖活性，β半乳糖苷酶染色检测细胞老化，RT-PCR和Western印迹检测MAPK14、基质金属蛋白酶1（MMP-1）的表达。多组间均数的比较用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果在照射7 d、14 d时，UVA组HSF的miR-1246相对表达水平（4.69 ± 0.85、3.59 ± 0.45）均低于空白对照组（8.42 ± 0.75、7.61 ± 0.49），差异均有统计学意义（t = 29.84、31.93，均P < 0.01）。上调miR-1246的表达和照射UVA后，MTT结果显示，空白对照组、UVA组、miR-1246组、UVA + miR-1246组细胞增殖活性（0.82 ± 0.03、0.23 ± 0.02、0.81 ± 0.02、0.61 ± 0.02）差异有统计学意义（F = 34.90，P < 0.05），UVA组低于空白对照组（t = 28.14，P < 0.01），UVA + miR-1246组低于miR-1246组（t = 10.61，P < 0.01），高于UVA组（t = 20.30，P < 0.01）。β半乳糖苷酶染色检测显示，4组老化细胞阳性率（3.93% ± 1.11%、81.29% ± 2.53%、5.50% ± 1.15%、54.13% ± 2.09%）差异有统计学意义（F = 16.14，P < 0.05），其中UVA组高于空白对照组（t = 48.46，P < 0.01），而UVA + miR-1246组高于miR-1246组（t = 35.31，P < 0.01），低于UVA组（t = 14.32，P < 0.01）。RT-PCR和Western印迹均显示，4组细胞MAPK14、MMP-1的mRNA、蛋白相对水平差异均有统计学意义（均P < 0.05），其中UVA组高于空白对照组（P < 0.05），UVA + miR-1246组高于miR-1246组（P < 0.05），低于UVA组（P < 0.05）。结论UVA照射诱导的HSF光老化中，miR-1246的表达受到抑制，上调miR-1246的表达可抑制其靶基因MAPK14及老化相关蛋白MMP-1的表达，起到抗细胞光老化的作用。

简介：摘要目的研究微小RNA-144-3p(miRNA-144-3p)靶向调控配对盒基因8(PAX8)对甲状腺癌细胞顺铂耐药性的影响。方法体外培养人甲状腺癌细胞株FTC-133，并构建对顺铂耐药的人甲状腺癌细胞株FTC-133，采用反转录PCR(RT-PCR)检测FTC-133细胞和顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量。将顺铂耐药FTC-133细胞分为A组、B组、C组，A组不作任何处理，B组转染空质粒，C组转染pCDNA3. 1＋miRNA-144-3p质粒，采用RT-PCR检测各组miRNA-144-3p、PAX8相对表达量，采用MTT法检测各组顺铂耐药细胞的半数抑制浓度(IC50)值；采用CCK-8法检测各组增殖率，采用流式细胞术检测各组凋亡率。结果顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量显著高于FTC-133细胞[(0.93±0.24) vs (0.26±0.04), P<0.05]；B组顺铂耐药FTC-133细胞IC50值、增殖率、凋亡率及miRNA-144-3p、PAX8相对表达量与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)；C组顺铂耐药FTC-133细胞IC50值、增殖率及miRNA-144-3p相对表达量显著高于B组(P<0.05)，细胞凋亡率、PAX8相对表达量显著低于B组(P<0.05)。结论miRNA-144-3p过表达可能通过下调PAX8基因表达而增加甲状腺癌细胞的顺铂耐药性，促进甲状腺癌细胞增殖并抑制其凋亡。

简介：摘要目的探讨miRNA-188-5p（miR-188-5p）在皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）组织和细胞中的表达，分析其表达下调对皮肤鳞癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法2012年11月至2018年10月在河南省新乡医学院第一附属医院收集50例手术切除的皮肤鳞癌组织及50例癌旁正常皮肤组织。实时荧光定量PCR（qPCR）检测皮肤鳞癌组织、癌旁正常皮肤组织、皮肤鳞癌细胞系SCL-1、A431、HSC-5和人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞中miR-188-5p的表达。培养的A431和HSC-5细胞分别分为2组：miR-188-5p抑制剂组和阴性对照组，对转染miR-188-5p抑制剂的细胞和阴性对照组细胞，通过qPCR检测miR-188-5p的相对表达（2-△△Ct），并以CCK8法和Transwell小室分别检测各组细胞的增殖活性和侵袭能力。双荧光素酶报告实验检测miR-188-5p和PTEN的相互作用，Western印迹法检测PTEN、总Akt（t-Akt）和磷酸化Akt（p-Akt）的表达。两独立样本比较采用t检验。结果皮肤鳞癌组织中miR-188-5p的相对表达（5.213 ± 3.138）显著高于癌旁正常皮肤组织（1.010 ± 0.364，t = 9.187，P < 0.001）。SCL-1、A431和HSC-5细胞中miR-188-5p的表达（3.858 ± 0.163、7.068 ± 0.262和4.572 ± 0.413）均显著高于HaCaT细胞（1.079 ± 0.300，t = 17.890、21.110和8.737，均P < 0.05）。与阴性对照组相比，miR-188-5p抑制剂组A431和HSC-5细胞miR-188-5p表达显著下调（均P < 0.01），细胞增殖和侵袭能力下降（均P < 0.05）。双荧光素酶报告实验显示，miR-188-5p表达下调显著上调A431和HSC-5细胞中PTEN的表达，但抑制p-Akt的表达。结论miR-188-5p在皮肤鳞癌组织和细胞中高表达，且miR-188-5p表达下调可能通过调控PTEN/Akt途径，抑制皮肤鳞癌细胞增殖活性和侵袭能力。

简介：摘要目的探讨间质干细胞成骨过程中外泌体转运的miRNA-222-5p对肌腱细胞损伤的修复作用及其机制。方法收集、分离和鉴定间质干细胞外泌体。小鼠跟腱切断后1周安乐死后取其肌腱，分离培养肌腱细胞，得到肌腱细胞损伤模型（损伤组）；将成骨分化过程中的间质干细胞与肌腱细胞共培养（共培养组）；将miRNA-222-5p模拟物转染进间质干细胞，成骨分化过程中的间质干细胞与肌腱细胞共培养（miRNA-222-5p组）。通过克隆形成、Transwell观察间质干细胞分泌外泌体及外泌体转运的miRNA-222-5p对肌腱细胞损伤修复的能力；qPCR、Western-blot和荧光染色检测成软骨和成骨相关蛋白的相对mRNA和相对蛋白表达水平；通过Western-blot检测信号通路因子的表达。结果电镜观察外泌体直径为40~100 nm，形态为典型的杯口状结构。外泌体标志蛋白热休克蛋白70、多配体聚糖结合蛋白1、肿瘤转移抑制因子9、肿瘤转移抑制因子63和肿瘤易感基因101的相对表达量分别为2.56±0.22、2.06±0.42、1.96±0.32、1.94±0.38、1.86±0.33，与正常对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。克隆形成试验后细胞群落数量：损伤组（4.00±0.58）个、共培养组（7.25±0.48）个、miRNA-222-5p组（16.00±1.35）个，差异有统计学意义（F=46.550，P<0.001）。Transwell试验后细胞数量：损伤组（37±4）个、共培养组（78±3）个、miRNA-222-5p组（168±8）个，差异有统计学意义（F=454.100，P<0.001）。qPCR、Western-blot和荧光染色检测结果显示，与损伤组相比，共培养组细胞中Sry相关HMG盒9、Ⅱ型胶原纤维α1基因、蛋白聚糖、骨形态发生蛋白2、Runt相关转运因子2和骨桥蛋白的mRNA和蛋白质表达量增加；与共培养组相比，miRNA-222-5p组细胞mRNA和蛋白质表达量均增加（P<0.05）。Western-blot结果显示，与损伤组相比，共培养组核因子κB、细胞外调节蛋白激酶2、信号传导与转录激活因子3、信号传导与转录激活因子5和细胞信号转导分子2的表达水平升高；与共培养组相比，miRNA-222-5p组的表达升高（P<0.05）。结论间质干细胞与跟腱细胞共培养可促进跟腱细胞成骨分化，同时间质干细胞来源的外泌体可通过转运miRNA-222-5p进一步促进跟腱细胞成骨分化。其机制可能与损伤肌腱中信号通路因子核因子κB、细胞外调节蛋白激酶2、信号传导与转录激活因子3、信号传导与转录激活因子5和细胞信号转导分子2的表达上调有关。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）FAM224A调控miRNA-590-3p（miR-590-3p）表达对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响。方法选择人卵巢癌细胞株OC3、SKOV-3、HO-8910、A2780及人正常卵巢上皮细胞株IOSE80，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测FAM224A在各个细胞株中的相对表达水平，筛选FAM224A相对表达水平最低的细胞株进行后续实验。将细胞分为FAM224A组（转染FAM224A模拟质粒）和对照组（转染对照模拟质粒），分别采用CCK-8法和细胞划痕实验检测两组细胞增殖和迁移能力。采用生物信息学网站LncBase v.2预测FAM224A可能互补结合的靶基因为miR-590-3p。qRT-PCR检测miR-590-3p和叉头框蛋白A2（FOXA2）mRNA的相对表达水平，蛋白质印迹法检测相关蛋白的表达情况。结果卵巢癌细胞株OC3、SKOV-3、HO-8910、A2780及正常卵巢上皮细胞株IOSE80中FAM224A的相对表达水平分别为0.23±0.04、0.65±0.05、0.45±0.03、0.63±0.08和1.02±0.11，差异有统计学意义（F=14.78，P<0.01），其中FAM224A相对表达水平最低的细胞株是OC3。CCK-8法检测结果显示，培养第2、3、4、5天，FAM224A组OC3细胞增殖能力均低于对照组（均P<0.05）。FAM224A组和对照组OC3细胞的划痕愈合率分别为（18.6±2.3）%和（71.7±7.2）%，差异有统计学意义（t=6.99，P<0.01）。FAM224A组和对照组OC3细胞中FAM224A相对表达水平分别为12.36±1.45和1.14±0.24（t=13.08，P<0.01）；miR-590-3p相对表达水平分别为0.19±0.06和1.04±0.20（t=4.01，P<0.01）；FOXA2 mRNA相对表达水平分别为6.37±1.37和1.05±0.08（t=3.86，P<0.01）。与对照组比较，FAM224A组OC3细胞FOXA2蛋白表达升高，细胞增殖蛋白细胞周期蛋白依赖激酶2（CDK2）、cyclin D3表达均降低，细胞迁移蛋白Snail表达降低。结论FAM224A在卵巢癌细胞株中低表达，FAM224A通过抑制miR-590-3p表达降低卵巢癌OC3细胞的增殖和迁移能力。

简介：摘要目的评价微小核糖核酸-10a(miRNA-10a)在小鼠肾缺血再灌注损伤中的作用及其与转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD家族成员2(Smad2)信号通路的关系。方法SPF级健康成年雄性C57BL/6小鼠24只，8～10周龄，体重20～25 g，采用随机数字表法分为4组(n＝6)：假手术组(S组)、肾缺血再灌注组(IR组)、肾缺血再灌注+miRNA-10a拮抗剂组(I组)和肾缺血再灌注+miRNA-10a激动剂组(M组)。采用夹闭左侧肾蒂45 min后恢复灌注的方法制备小鼠肾缺血再灌注模型。M组和I组术前72 h时分别尾静脉注射miRNA-10a拮抗剂和激动剂20 nmol，1次/24 h，连续3次，S组和IR组给予等容量生理盐水。于再灌注24 h时采集眶静脉血样，检测血清肌酐(Scr)和BUN浓度。随后处死小鼠取肾组织，测定肾组织MDA含量和SOD活性，采用ELISA法测定IL-1β和TNF-α含量，采用Western blot法检测TGF-β1和磷酸化Smad2(p-Smad2)的表达，光镜下观察病理学结果并计算肾小管损伤评分。结果与S组比较，IR组、I组和M组血清Scr、BUN浓度、肾组织MDA、IL-1β、TNF-α含量和肾小管损伤评分升高，IR组和M组肾组织SOD活性降低，TGF-β1和p-Smad2表达上调(P<0.05)；与IR组比较，I组血清Scr、BUN浓度、肾组织MDA、IL-1β、TNF-α含量和肾小管损伤评分降低，SOD活性升高，TGF-β1和p-Smad2表达下调，M组血清Scr、BUN浓度、肾组织MDA、IL-1β、TNF-α含量和肾小管损伤评分升高，SOD活性降低，TGF-β1和p-Smad2表达上调(P<0.05)；与I组比较，M组血清Scr、BUN浓度、肾组织MDA、IL-1β、TNF-α含量和肾小管损伤评分升高，SOD活性降低，TGF-β1和p-Smad2表达上调(P<0.05)。结论miRNA-10a参与了小鼠肾缺血再灌注损伤的过程，与激活TGF-β1/Smad2信号通路有关。