简介：摘要目的探讨miRNA-499a-5p靶向CD38对过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞损伤的影响及作用机制。方法体外培养H9c2心肌细胞，采用H2O2诱导心肌细胞损伤模型。实验分为对照组、H2O2组、H2O2＋阴性对照(NC)组和H2O2＋miRNA-499a-5p组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测心肌细胞中miRNA-499a-5p和CD38的表达，噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞存活率，试剂盒检测活性氧簇(ROS)水平和乳酸脱氢酶(LDH)活性，Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌细胞凋亡率，Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt)的表达量。双荧光素酶报告基因试验检测miRNA-499a-5p和CD38的靶向关系。结果H2O2组心肌细胞中miRNA-499a-5p、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt的表达水平及心肌细胞存活率与对照组相比均明显降低(P<0.05)，而CD38和Bax的表达水平、ROS水平、LDH活性及细胞凋亡率均明显升高(P<0.05)。H2O2＋miRNA-499a-5p组心肌细胞中miRNA-499a-5p、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt的表达水平及心肌细胞存活率与H2O2组相比均明显升高(P<0.05)，而CD38和Bax的表达水平、ROS水平、LDH活性及细胞凋亡率均明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因试验证实了CD38是miRNA-499a-5p的靶基因。结论miRNA-499a-5p能够通过抑制CD38的表达减轻H2O2诱导的心肌细胞损伤，该作用机制可能与PI3K/Akt信号通路有关。

简介：摘要目的探讨食管鳞状细胞癌患者放疗前后血浆miRNA-210（miR-210）表达的变化及其体外对食管鳞状细胞癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法收集2013年12月至2015年3月山东省临沂市人民医院22例初治食管鳞状细胞癌患者（食管癌组）根治性放疗前后及15名健康志愿者（健康对照组）血液标本。以miRNA-21（miR-21）为阳性对照。应用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测患者放疗前后血浆miR-210和miR-21的表达水平及常氧和乏氧食管鳞状细胞癌Eca109细胞中miR-210的表达。采用EdU细胞增殖实验、流式细胞术检测未转染组（空白对照组）、转染miR-210模拟物阴性对照RNA组（阴性对照组）、转染miR-210模拟物RNA组（miR-210组）Eca109细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡情况。结果食管癌组及健康对照组共采集合格血液样本59份。食管癌组放疗前血浆miR-210、miR-21的相对表达量[中位数（P25，P75）]较健康对照组升高，差异均有统计学意义[4.04×10-4（2.06×10-4，6.68×10-4）比0.54×10-4（0.28×10-4，0.77×10-4），397.07×10-4（181.77×10-4，742.93×10-4）比127.43×10-4（21.97×10-4，184.65×10-4）；U值分别为37.0、49.0，均P<0.01]。食管癌组患者治疗前血浆miR-210、miR-21表达水平与肿瘤部位和分化程度均无关（均P>0.05）。根治性放疗1周后，食管癌组血浆miR-210、miR-21的相对表达量分别为65.33×10-4（22.15×10-4，160.87×10-4）、437.23×10- 4（327.18×10-4，749.09×10-4），均较放疗前升高（U值分别为32.0、154.0，均P<0.05），其中miR-210升高更为显著。Eca109细胞乏氧培养12 h后, miR-210的表达水平较常氧组增高，24 h后达峰值，差异有统计学意义（P<0.01）。EdU细胞增殖实验显示，miR-210组转染24、48 h后Eca109细胞增殖活力较阴性对照组和空白对照组均下降，差异均有统计学意义（均P<0.01）。流式细胞术分析显示，转染24 h后，同阴性对照组和空白对照组相比，miR-210组Eca109细胞G2/M期比例增高，差异有统计学意义（P<0.05）；转染48 h后，G2/M期比例增高更明显（P<0.01）；转染24、48 h后，三组凋亡细胞比例差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论miR-210在食管鳞状细胞癌患者血浆中高表达，尤其是在根治性放疗后血浆miR-210表达水平明显升高。miR-210在乏氧食管鳞状细胞癌Eca109细胞中高表达，miR-210过表达可抑制细胞增殖，其机制可能与G2/M期阻滞相关。

简介：摘要目的探讨miRNA-628-3p（miR-628-3p）对非小细胞肺癌H1299细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及其与胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）的靶向关系。方法设立空白对照组（未经处理的H1299细胞）、miR-NC组（转染空载质粒的H1299细胞）、miR-628-3p-M组（转染含miR-628-3p模拟物序列质粒的H1299细胞）、miR-628-3p-I组（转染含miR-628-3p抑制序列质粒的H1299细胞）。各组细胞培养72 h后，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖能力，结晶紫染色测定细胞单克隆形成数，流式细胞术测定细胞凋亡水平，Transwell法测定细胞侵袭能力，反转录、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法测定细胞中miR-628-3p、IGF-1R mRNA水平，蛋白质印迹法测定细胞中IGF-1R蛋白水平。结果与空白对照组和miR-NC组比较，miR-628-3p-M组细胞存活率[（42±7）%比（78±6）%、（76±7）%]、单克隆形成数[（235±35）个比（614±89）个、（618±75）个]、侵袭细胞数[（265±85）个比（693±185）个、（703±119）个]、IGF-1R mRNA相对表达量（2.17±0.14比3.38±0.15、3.37±0.13）和IGF-1R蛋白相对表达量（0.34±0.13比0.89±0.19、0.88±0.18）均低（均P<0.05），细胞凋亡率[（9.30±3.51）%比（3.30±1.54）%、（3.10±1.94）%]、miR-628-3p相对表达量（6.93±0.17比3.29±0.15、3.30±0.16）均高（均P<0.05）；而miR-628-3p-I组细胞存活率[（90±6）%]、单克隆形成数[（1 063±102）个]、侵袭细胞数[（1 985±426）个]、IGF-1R mRNA相对表达量（4.30±0.18）和IGF-1R蛋白相对表达量（1.47±0.17）均高（均P<0.05），细胞凋亡率[（0.90±0.20）%]、miR-628-3p相对表达量（1.93±0.18）均低（均P<0.05）。与miR-628-3p-M组比较，miR-628-3p-I组细胞存活率、单克隆形成数、侵袭细胞数、IGF-1R mRNA及蛋白相对表达量均高（均P<0.05），细胞凋亡率、miR-628-3p相对表达量均低（均P<0.05）。结论调节miR-628-3p水平对H1299细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡有影响；miR-628-3p与IGF-1R可能有靶向关系。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）ALMS1-IT1在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌HT-29细胞体外增殖和迁移能力影响的分子机制。方法选取2018年7月至2020年11月湖北六七二中西医结合骨科医院行手术切除并经病理学检查确诊的40例结直肠癌患者癌组织标本及癌旁组织（距肿瘤边缘>5 cm）标本。应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测ALMS1-IT1在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达水平，以≥中位相对表达量者为ALMS1-IT1高表达，分析ALMS1-IT1表达与患者临床病理特征的关系。将空载慢病毒和载有ALMS1-IT1沉默序列的慢病毒分别感染HT-29细胞，分别为对照组和si-ALMS1-IT1组。采用qRT-PCR检测两组HT-29细胞中ALMS1-IT1表达情况。应用CCK-8法和Transwell实验分别检测两组HT-29细胞增殖能力和迁移能力。采用starBase v2.0在线数据库预测ALMS1-IT1相互作用的分子，采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测这些分子的表达情况。结果结直肠癌组织中ALMS1-IT1的相对表达量较癌旁组织增加（4.54±0.61比1.19±0.31；t＝34.89，P<0.01）。40例患者癌组织中ALMS1-IT1中位相对表达量为2.93，ALMS1-IT1高表达率为50.0%（20/40）。TNM分期Ⅲ期患者癌组织ALMS1-IT1高表达率高于Ⅰ~Ⅱ期者，低分化者高表达率高于高、中分化者，淋巴结转移者高表达率高于无淋巴结转移者（均P<0.01）。si-ALMS1-IT1组HT-29细胞培养第2、3、4、5天的细胞增殖能力（吸光度值）均低于对照组（均P<0.05）。si-ALMS1-IT1组HT-29细胞24 h细胞迁移数较对照组少[（45±7）个比（112±18）个；t＝3.45，P<0.05]。基于starBase v2.0在线数据库，预测到ALMS1-IT1的靶基因可能为miRNA-889-3p（miR-889-3p），miR-889-3p的靶基因可能为ATAD2。与对照组相比，si-ALMS1-IT1组HT-29细胞中miR-889-3p相对表达量升高（4.24±0.46比1.01±0.11；t＝6.81，P<0.01）。与对照组相比，si-ALMS1-IT1组ATAD2 mRNA（P<0.01）和蛋白表达水平均降低。结论ALMS1-IT1在结直肠癌组织中高表达，ALMS1-IT1表达与患者TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移相关。体外下调ALMS1-IT1，可能通过调控miR-889-3p-ATAD2轴而抑制结直肠癌HT-29细胞增殖和迁移。ALMS1-IT1可能是结直肠癌的治疗靶点。