简介:摘要目的了解2014年湖南省C亚属人腺病毒(HAdV-C)分离株的基因特征。方法2014年从湖南省长沙市严重急性呼吸道感染儿童病例咽拭子标本中分离到一株HAdV-C病毒株(Hunan2014-s024),分段扩增目的基因片段,拼接后获得全基因组序列,同时下载GenBank数据库中国内外流行的HAdV-C代表株全基因组序列构建HAdV-C数据库,使用生物信息学软件进行全基因组序列特征分析。结果Hunan2014-s024株与2006年山西省健康儿童粪便标本中分离到的HAdV-C病毒株(MK041244-CHN-2006)的同源性最高,并以该病毒基因组元件为主要骨架,在penton base基因上交换了2012年湖南省急性下呼吸道感染患儿分离株(MK041246-CHN-2012)的基因片段。结论2014湖南株(Hunan2014-s024)为2006年山西省病毒株(MK041244-CHN-2006)与2012年湖南株(MK041246-CHN-2012)的重组病毒,由于其致病性可能发生了改变,因此有必要加强HAdV-C的分子流行病学监测,以了解其潜在疾病负担和公共卫生意义。
简介:摘要目的了解人腺病毒(human adenovirus,HAdV)在不同疾病病原谱中的检出情况。方法对符合纳入标准的284个研究进行HAdV检出率的Meta分析,分析内容包括异质性检验、随机效应模型合并效应量、Meta回归、敏感性分析和发表偏倚。结果284个研究检出率波动较大、异质性较高,分别采用不同的方法降低或分析异质性:随机效应模型合并总检出率为4.21%(95%CI:3.80%~4.66%);亚组分析各组检出率分别为胃肠道症状疾病5.06%(95%CI:4.22%~6.06%)、呼吸道症状疾病3.97%(95%CI:3.53%~4.46%)、儿童4.50%(95%CI:4.06%~4.99%)、成人2.09%(95%CI:1.22%~3.56%)、抗原检测1.94%(95%CI:1.64%~2.30%)、核酸检测5.82%(95%CI:5.21%~6.49%)、抗体检测5.60%(95%CI:4.17%~7.48%)、中国东部地区3.67%(95%CI:3.18%~4.24%)、中部地区6.07%(95%CI:5.20%~7.08%)、西部地区5.00%(95%CI:4.03%~6.18%)、≤1 000样本量6.10%(95%CI:5.39%~6.91%)、>1 000样本量2.66%(95%CI:2.32%~3.05%);Meta回归分析有显著性的因素为疾病种类、年龄、检测方法、研究地区、样本量,调整R2=37.15%。结论HAdV检出率的研究,在异质性较大时,Meta分析对率的合并仍有待完善。不同疾病种类、不同年龄、检测方法、研究区域和样本量大小是引起异质性的部分原因。
简介:摘要β属人冠状病毒(human coronavirus, HCoV)包括HCoV-OC43、HCoV-HKU1、严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus, SARS-CoV)、中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV)和2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV),其中SARS-CoV、MERS-CoV和2019-nCoV为高致病性HCoV,其跨种传播和流行对人类造成重大危害,对全球公共卫生及经济造成巨大损失,但相对于成人病例,儿童感染病例较少、临床表现较轻、预后较好,原因尚不清楚。本文对5种β属HCoV感染特点进行综述,比较儿童与成人病例的异同点并探讨其可能原因,以期为全面认识β属HCoV感染提供参考信息。
简介:目的探讨构建携带人pre—mir181a基因的重组腺病毒载体,为基因治疗研究提供一种新的方法,并观察其在神经胶质瘤细胞U251细胞中的表达。方法以从Genesil公司购买的含有mir181a的质粒为模板扩增pre—mir181a基因,将回收的PCR产物片段克隆入pGenesil载体,获得重组质粒pGenesil—pre—mir181a。从pGenesil—pre—mir181a上通过LR体外同源重组将mir181amicroRNA表达框转移至pGSadeno腺病毒表达载体上。在体外用不同感染复数(M·O·I)值rAd5-mir181ab分别转染神经胶质瘤细胞U251细胞。采用流式细胞仪、RT—PCR方法检测目的基因的转染效率和表达。结果PCR、酶切鉴定以及序列测定与比对分析表明,重组腺病毒rAd5-mir181a构建正确。神经胶质瘤细胞U251细胞转染rAd5-mir181a的最高效率可达99%,转染后的神经胶质瘤细胞U251细胞表达相应的mir181a。结论本实验成功构建了含mir181a基因的重组腺病毒rAd5-mir181a载体,在体外能高效转染神经胶质瘤细胞U251细胞。
简介:摘要目的研究2018年4月至2019年3月济南市急性呼吸道感染病例中人鼻病毒、呼吸道合胞病毒及人腺病毒的感染情况及流行病学特点,并对分离出的人腺病毒做全基因组序列分析。方法采集2018年4月至2019年3月济南市第四人民医院、山东大学齐鲁儿童医院、章丘区人民医院的急性呼吸道感染住院病例患者的鼻/咽拭子样本共计1 969份,采用实时荧光定量PCR的方法检测样本中呼吸道相关病原体,包括人鼻病毒、呼吸道合胞病毒及人腺病毒的阳性率,并对分离出的7株腺病毒阳性标本进行测序,以确定腺病毒型别,并构建基因进化树进行分析。结果在收集的1 969份标本中,3种呼吸道病毒阳性病例共计242例,阳性检测率为12.30 %(242/1969),鼻病毒阳性率为3.00%(59/1969)、呼吸道合胞病毒阳性率为6.30 %(124/1969)、腺病毒阳性率为3.86%(76/1969)。不同年龄段间鼻病毒检出率差异无统计学意义(Fisher精确检验值8.376,P=0.720),不同年龄段间呼吸道合胞病毒、腺病毒检出率差异均有统计学意义(χ2=19.28、12.16;P=0.001、0.016)。不同性别间腺病毒检出率差异具有统计学意义(χ2=14.33,P<0.001),不同性别间鼻病毒阳性率和呼吸道合胞病毒阳性率均无统计学意义(χ2=0.30、2.90,P=0.862、0.089)。比较不同月份间三种病毒核酸阳性率,发现鼻病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒的检出率分别在10月份、12月份、11月份达到最高(分别为8.61%、26.50%和8.84%)。对测序的7株腺病毒阳性标本构建基因进化树后发现其均为HAdV-2型。结论2018年4月至2019年3月济南市急性呼吸道感染相关的人鼻病毒、呼吸道合胞病毒及人腺病毒在不同组别间有不同的流行病学特点,为急性呼吸道感染的早期预防和临床治疗提供参考依据。
简介:摘要目的探讨人腺病毒7型(human adenovirus type 7,HAdV-7)感染对于炎症小体激活的影响及作用机制。方法采用免疫荧光检测HAdV-7对于THP-1分化的巨噬细胞的感染;应用ELISA方法检测HAdV-7感染对于IL-1β的激活;实时荧光定量PCR检测病毒感染对于NLRP3、pro-IL-1β、caspase-1等mRNA表达的影响;蛋白质免疫印迹实验(western blot,WB)检测病毒感染后细胞内NLRP3、pro-IL-1β的表达及上清中caspase-1和IL-1β蛋白表达情况。结果免疫荧光检测显示HAdV-7可感染THP-1分化的巨噬细胞,WB显示HAdV-7感染诱导细胞内pro-IL-1β蛋白表达上调,ELISA检测表明HAdV-7感染可诱导IL-1β的分泌表达(MOI=0.5,P=0.0008)。使用Ac-YVDK-cmk抑制caspase-1表达后,HAdV-7感染上清中IL-1β的表达被明显抑制(P=0.0025);HAdV-7感染caspase-1缺陷的THP-1分化的巨噬细胞,IL-1β的表达同样被显著抑制(P=0.0191)。荧光定量PCR检测HAdV-7感染可以诱导细胞内pro-IL-1β和NLRP3 mRNA表达上调(NLRP3:P=0.0004;pro-IL-1β:P=0.0007),同时WB显示HAdV-7可以诱导细胞内pro-IL-1β和NLRP3蛋白表达上调;使用NLRP3特异性抑制剂MCC950处理细胞,可抑制HAdV-7感染的细胞上清中IL-1β的表达(P=0.0027); HAdV-7感染NLRP3缺陷的THP-1分化的巨噬细胞,IL-1β的表达被明显抑制(P=0.0189)。分别使用TLR2、TLR4、TLR7/9信号传导抑制剂,抑制HAdV-7感染THP-1分化的巨噬细胞,结果显示抑制TLR4信号传导,细胞上清中IL-1β的表达水平有明显下调(P=0.0122);使用ROS抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂,或抑制K+外流,分别处理HAdV-7感染THP-1分化的巨噬细胞,结果显示抑制组织蛋白酶B(P=0.0292),或抑制K+外流时(KCl, P=0.0022;Glibenclamide, P=0.0275),细胞上清中IL-1β的表达水平有明显下调。结论HAdV-7感染THP-1细胞激活NLRP3炎症小体,NLRP3炎症小体激活的第一信号通过Toll样受体4(TLR4)信号传导,第二信号主要通过半通道模型介导K+外流的和溶酶体破坏模型释放组织蛋白酶B的激活NLRP3炎症小体。
简介:摘要目的建立一种基于免疫层析法(Immunochromatographic assay, ICA)的快速简便的人腺病毒(Human adenoviruses,HAdVs)检测方法。方法利用抗原结合和病毒斑点实验检测发现单克隆抗体3C11和7E6能特异性结合所有测试的人腺病毒,以这两个抗体建立ICA方法。使用培养病毒及10份临床咽拭标本检测了该方法的特异性及灵敏性。结果该ICA能特异性结合HAdV-1、2、3、4、5、6、7、10及胃肠型HAdV-41,极限范围为0.16~103TCID50/ml,所有成功分离出病毒的临床样本也显示阳性。结论ICA检测方法是一种灵敏度高、特异性强、方便快速检测HAdVs的方法。