简介：摘要目的构建人干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes, STING)沉默子的荧光素酶报告质粒，在人胚肾细胞(HEK293T)和人类宫颈癌细胞(HeLa)中检测荧光素酶活性，生物信息学预测其可能结合的转录因子并通过实验验证。方法通过PCR扩增人STING-5-1a(-124～+267，相对于转录起始位点，TSS: 0)和STING-5-2a(-124～+168)区域，亚克隆至pGL3-Basic质粒；将人STING沉默子区域STING-5-1b(+169～+267)正向反向亚克隆至pGL3-Control质粒(pGL3-C-5-1b-positive/negative)，并把STING-5-1b分为两段互补片段，亚克隆至pGL3-Control载体上，命名为pGL3-C-STING-5-1b-α(+169～+209)/pGL3-C-STING-5-1b-β(+210～+267)，双荧光素酶报告活性分析检测上述重组质粒在HEK293T和HeLa中的活性。应用生物信息学方法预测人STING沉默子的转录因子结合位点，将预测结合位点进行多点突变，检测荧光素酶活性。敲低转录因子，免疫印迹试验检测STING的表达水平。染色体免疫共沉淀反应进一步验证转录因子与人STING沉默子的结合。结果核酸测序证实，上述重组质粒构建成功。截短STING-5-1b(+169～+267)片段后相对荧光素酶活性上升。同时，与pGL3-Control质粒相比，pGL3-C-5-1b-positive重组质粒的相对荧光素酶活性下降(P<0.05)，其中，STING-5-1b-β(+210～+267)序列起主要抑制作用。应用生物信息学软件预测发现转录因子PR结构域锌指蛋白4(PRDM4)、Thanatos相关蛋白1(THAP1)、TEA域转录因子1(TEAD1)、核受体亚家族4 A组成员1(NR4A1)、类Krueppel因子4(KLF4)和叉头转录蛋白O3(FOXO3)可能与人STING沉默子区域(+210～+267)结合。对上述转录因子的结合位点进行多点突变构建突变体并转染至HEK293T和HeLa，发现THAP1-Mut和TEAD1-Mut的相对荧光素酶活性显著上升，提示STING沉默子可能含有THAP1和TEAD1的结合位点。将转录因子THAP1和TEAD1敲低后，STING的表达水平有显著上升。染色体免疫共沉淀试验表明，转录因子TEAD1和THAP1在细胞内与人STING沉默子区域结合。结论本实验成功构建了人STING沉默子荧光素酶报告质粒，通过活性比较，推测人STING的核心沉默子区位于+210～+267区域，通过生物信息学分析及点突变实验初步确定人STING沉默子可能含有的潜在转录因子结合位点。并使用免疫印迹试验和染色体免疫共沉淀进一步证实转录因子TEAD1和THAP1与人STING沉默子的结合，为后续研究提供实验资料。

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简介：摘要目的构建早老蛋白增强子2（PSENEN）基因沉默的人永生化角质形成细胞（HaCaT）模型，探究PSENEN基因表达下调对HaCaT细胞增殖以及γ分泌酶表达的影响。方法设计3组靶向PSENEN基因的shRNA序列，与线性化的LV3-pGLV-h1-GFP-puro载体构建慢病毒重组表达质粒，经酶切及测序鉴定后，进行慢病毒的包装、纯化和滴度测定。将HaCaT细胞分为5组进行转染：shRNA1组、shRNA2组、shRNA3组分别加入含沉默PSENEN基因的shRNA1、shRNA2、shRNA3慢病毒原液，NC组加入含阴性对照shNC慢病毒原液，空白组不加病毒液。转染完成后，荧光显微镜下观察荧光表达，流式细胞仪检测转染效率。CCK8法测定HaCaT细胞增殖活性，实时荧光定量PCR（qPCR）、Western印迹法分别检测PSENEN、呆蛋白（NCT）、早老蛋白1（PS1）、前咽缺陷蛋白1a（APH1a）mRNA、蛋白的相对表达量。统计分析采用重复测量方差分析、单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果倒置荧光显微镜下观察到shRNA1~shRNA3组、NC组均有荧光表达，流式细胞仪示转染效率均达98%以上。qPCR、Western印迹法显示，与NC组（1.054 ± 0.272、1.076 ± 0.075）相比，shRNA1、shRNA2、shRNA3组PSENEN mRNA（0.187 ± 0.010、0.163 ± 0.022、0.174 ± 0.009）、蛋白（0.219 ± 0.097、0.208 ± 0.014、0.185 ± 0.062）表达均显著降低（均P < 0.001）。CCK8法显示，与NC组相比，shRNA1组细胞增殖活性在0、12、36、48 h均显著增高（均P < 0.05），24和60 h差异无统计学意义（均P > 0.05）；shRNA2、shRNA3组在0、12、24、36、48、60 h细胞增殖水平均显著高于NC组（均P < 0.05）。shRNA1组、shRNA2组、shRNA3组、NC组、空白组间NCT、PS1、APH1a基因mRNA表达差异无统计学意义（F值分别为8.168、4.644、1.981，均P > 0.05），mNCT、imNCT、PS1-CTF、APH1a蛋白相对表达差异有统计学意义（F值分别为39.268、5.929、27.842、20.663，均P ≤ 0.01）。与NC组相比，shRNA1、shRNA2、shRNA3组mNCT、PS1-CTF、APH1a蛋白表达均显著降低（均P < 0.01），imNCT蛋白表达变化无统计学意义（均P > 0.05）。结论成功构建了PSENEN基因沉默的HaCaT细胞模型，PSENEN基因沉默会引起HaCaT细胞增殖活性增强，γ分泌酶其他亚基蛋白含量下降。

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简介：　　摘 要：上课能积极发言通常会影响一个学生的学习效果。有时，低年级的课堂气氛一般比较活跃，热情高涨。但是高年级的课堂上课发言的学生却寥寥无几，基本是几个优等生在唱独角戏。我们将这种现象称之为“课堂沉默”。课堂沉默是多种多样的，作为课堂对话的发起者、调控者，有必要对课堂沉默这种现象进行敏锐观察，理解沉默的发生及探讨沉默背后的真相并想办法科学应对，以便真正建立高效课堂。讨论几种常见的课堂沉默类型，希望通过透视和讨论，能够发现沉默背后更深层次的意蕴，来让我们用心去感受、去反思、去实践。

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简介：【摘 要】大多数学生已习惯于课堂沉默不语，学生缺乏积极情绪引领，无法生成课堂智慧，无法形成教学反馈，从而导致课堂教学低效甚至无效，纵览现有与课堂沉默有关的理论，不难发现，其中最具影响力和代表性的理论是知识权力理论。其中最具影响力和代表性的理论是知识权力理论。从课堂沉默发生的时空、行为本质、内在逻辑、主观选择四个方面进行了社会学分析。缩小课堂话语权势落差、改善课堂话语权获得策略、引导学生“自然”走出沉默、培养学生话语行为作为学生课堂沉默的四条优化路径。

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简介：摘要： “沉默的螺旋”是传播学中的基本理论概念，本文着力探讨它所揭示的网络德育教育规律，探讨辅导员如何通过适时发声，纠正学生的网络上的不当言论或行为。本文通过调研当前高校辅导员在开展网络德育过程中的痛点，结合传播学相关理论研究如何有效提升高校辅导员网络德育教育的路径和效果。 

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简介：摘要目的调查临床护士述情障碍和沉默行为现状，分析临床护士述情障碍对沉默行为的影响。方法采用横断面调查法，以方便抽样的方式于2019年9—10月选取温州医科大学附属第一医院的589名临床护士为研究对象。采用一般资料调查问卷、多伦多述情障碍量表（TAS）、员工沉默行为量表进行调查，分析述情障碍对临床护士沉默行为的影响。本研究共发放问卷600份，回收有效问卷589份，有效回收率为98.2%。结果589名临床护士TAS总分为（54.07±8.86）分，沉默行为总分为（36.24±6.32）分；单因素分析结果显示，在职称、工作年限、学历、科室、聘用形式、婚姻状况方面，589名临床护士的员工沉默行为量表得分比较，差异有统计学意义（P<0.05）；Pearson相关分析结果显示，临床护士TAS得分和员工沉默行为量表得分呈正相关（P<0.05）；分层回归分析结果显示，描述情感障碍和外向性思维对沉默行为具有正向预测作用，共解释了总变异的24.1%。结论临床护士述情障碍和沉默行为有待改善，述情障碍正向影响沉默行为，护理管理者应鼓励临床护士主动表达内心的建议和想法，减少临床护士的沉默行为。

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简介：摘要：《慎子》一书在先秦时期占有重要地位。研究《慎子》对我们深入研究先秦学术史、思想史具有非常重要的意义。通过对文本进行精细解读，研究《慎子》中所出现的特殊的文言句式，如判断句、省略句、被动句、双宾语句、宾语前置句，总结归纳句式的使用情况，有助于反映先秦时期文言句式的发展情况。对《慎子》中的文言句式进行研究总结，这仅仅是最基础的，将来还应当进一步的进行研究。同时将《慎子》和《论语》两部著作中的文言句式进行比较，以此观察先秦时期文言句式的发展情况。

简介：摘要：小学语文教学过程中，由于各种原因，学生不愿意在课堂上回答问题，有些学生不知道问题的答案，因为他们接受能力差；有些学生害羞，不敢在公众面前讲话；有些学生知道答案，但是不愿意回答问题。这样的情况一久，学生对于回答问题的信心逐渐消失。在小学的语文教学中，为了让学生的语文成绩和综合素质得到提升，需要不断培培养学生的思维能力和语言表达能力，通过改变教学方法，融入多媒体教学，设计课外实践等，吸引学生的学习兴趣，调动学生的积极性，全面提高语文课堂教学质量。本文对语文教学中的课堂沉默与课堂表达进行探讨。

简介：摘要：[目的]了解民营医院低年资儿科护士组织沉默行为并探讨其影响因素，[方法]一般调查法和护士组织沉默测评问卷调查，[结果]民营医院低年资护士组织沉默总分为29.67±0.47分，处于中等偏低水平，其中消极性沉默得分最高（13.14±4.69）分，漠视性沉默得分最低（6.76±2.82）分；多元回归分析显示工作年限对护士组织沉默水平有影响[结论]护理管理者应重视护士组织沉默现象，可通过采取改善工作氛围、提升职业认同感等措施，降低护士的组织沉默水平。

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简介：摘要目的探讨低表达POLR2A对于卵巢癌细胞凋亡的作用及机制。方法通过免疫组化检测POLR2A在卵巢组织中的表达。Western印迹检测低表达POLR2A后其蛋白的变化。CCK-8、台盼蓝实验、流式细胞术以及AO/EB检测低表达POLR2A后A2780细胞活性以及凋亡情况。GEPIA染色数据库分析POLR2A在卵巢癌中表达及潜在的作用通路。Western印迹方法检测低表达POLR2A对于P53信号通路中P53及P21蛋白的影响。结果POLR2A在卵巢癌组织中高表达(P＝0.004)。低表达POLR2A能够明显抑制卵巢癌A2780细胞活性(P＝0.024)，同时诱导A2780细胞凋亡。低表达POLR2A组中Bax/Bcl-2表达比值升高(P＝0.029)，Cleaved-caspase-3蛋白表达升高(P＝0.041)。生物信息方法分析P53信号通路是潜在的POLR2A在卵巢癌中作用通路，且低表达POLR2A能够使A2780细胞中P53蛋白表达升高(P＝0.047)，P21蛋白表达升高(P＝0.036)。结论低表达POLR2A通过调控P53/P21信号通路诱导卵巢癌凋亡。