简介：摘要目的构建人干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes, STING)沉默子的荧光素酶报告质粒，在人胚肾细胞(HEK293T)和人类宫颈癌细胞(HeLa)中检测荧光素酶活性，生物信息学预测其可能结合的转录因子并通过实验验证。方法通过PCR扩增人STING-5-1a(-124～+267，相对于转录起始位点，TSS: 0)和STING-5-2a(-124～+168)区域，亚克隆至pGL3-Basic质粒；将人STING沉默子区域STING-5-1b(+169～+267)正向反向亚克隆至pGL3-Control质粒(pGL3-C-5-1b-positive/negative)，并把STING-5-1b分为两段互补片段，亚克隆至pGL3-Control载体上，命名为pGL3-C-STING-5-1b-α(+169～+209)/pGL3-C-STING-5-1b-β(+210～+267)，双荧光素酶报告活性分析检测上述重组质粒在HEK293T和HeLa中的活性。应用生物信息学方法预测人STING沉默子的转录因子结合位点，将预测结合位点进行多点突变，检测荧光素酶活性。敲低转录因子，免疫印迹试验检测STING的表达水平。染色体免疫共沉淀反应进一步验证转录因子与人STING沉默子的结合。结果核酸测序证实，上述重组质粒构建成功。截短STING-5-1b(+169～+267)片段后相对荧光素酶活性上升。同时，与pGL3-Control质粒相比，pGL3-C-5-1b-positive重组质粒的相对荧光素酶活性下降(P<0.05)，其中，STING-5-1b-β(+210～+267)序列起主要抑制作用。应用生物信息学软件预测发现转录因子PR结构域锌指蛋白4(PRDM4)、Thanatos相关蛋白1(THAP1)、TEA域转录因子1(TEAD1)、核受体亚家族4 A组成员1(NR4A1)、类Krueppel因子4(KLF4)和叉头转录蛋白O3(FOXO3)可能与人STING沉默子区域(+210～+267)结合。对上述转录因子的结合位点进行多点突变构建突变体并转染至HEK293T和HeLa，发现THAP1-Mut和TEAD1-Mut的相对荧光素酶活性显著上升，提示STING沉默子可能含有THAP1和TEAD1的结合位点。将转录因子THAP1和TEAD1敲低后，STING的表达水平有显著上升。染色体免疫共沉淀试验表明，转录因子TEAD1和THAP1在细胞内与人STING沉默子区域结合。结论本实验成功构建了人STING沉默子荧光素酶报告质粒，通过活性比较，推测人STING的核心沉默子区位于+210～+267区域，通过生物信息学分析及点突变实验初步确定人STING沉默子可能含有的潜在转录因子结合位点。并使用免疫印迹试验和染色体免疫共沉淀进一步证实转录因子TEAD1和THAP1与人STING沉默子的结合，为后续研究提供实验资料。

简介：农杆菌介导的遗传转化的生物技术已经被广泛应用。蚜传辅助因子(helpercomponent-proteinase,HC-Pro)是一种RNA沉默抑制子,而HC-Pro蛋白对植物基因组DNA甲基化的影响及其作用机制并不十分清楚。我们采用农杆菌介导的烟草(NicotianabenthamianaL.)叶盘转化法将外源基因HC-Pro转化烟草。并优化了各种侵染条件,包括农杆菌重悬液的浓度,选择培养基中卡那霉素的浓度和生根培养基中活性炭的比例。此外,我们介绍了一种简单而有效的生根技术,即水培生根法,并利用这种技术快速获得了HC-Pro转基因株系。半定量RT-PCR(Reversetranscription-PCR)检测结果表明,HC-Pro在转基因烟草及转基因后代植株中稳定表达,为HC-Pro蛋白功能的研究提供了实验帮助。

简介：沉默钟园对朋友的误会。我常常保持沉默。因为时间，能填平深深的沟壑。对恶意的诽谤。我往往给予沉默。因为时间。最先腐烂没生命的事物。沉默并不软弱。会把干戈化为玉帛。沉默有无限容量，岁月丰富了它的收获。沉默@钟园...

简介：海呀，你说着什么语言？是永远的疑问。天呀，你用什么语言回答？用永远的沉默。

简介：“进山了?”我问苏来曼。汽车开始颠晃起来。“嗯。”苏来曼点点头,脸上仍旧没有多少表情。我在心里无奈地笑笑,明白这一路只能默默前行了。我把脸转向窗外,一列秃山缓缓驶来,干瘦荒瘠,没有树也没有草。这次来参加笔会,一半原因是为了见苏来曼。苏来曼在这个地区最偏最穷的回族山村教书,也写作,两年前他在我的一篇作品中得知我是回民同时又读

简介：城市从鞭炮中惊醒鼾声吐出的顾客分成几批轮流掏空黑夜时间一走一些人与土地缝合一些人涌进血液而我爱惜草丛脸贴向地面一个人寻找语言

简介：无声即沉默。沉默有各种各样——腹中空泛，思想一片苍白，故而无言可发，这是沉默。热情已如柴薪尽燃，故而冷漠处世，无喜无悲，无忧无愤，对人世的一切都失去兴趣和欲望，这也是沉默。

简介：沉默是无声的珍贵。种子的无声的沉默，孕育了春天的萌动；冰河的无声的沉默，蕴藏了渴望的激流；岩浆的无声的沉默，凝聚了生命的炽热。不要以为沉默没有大江大河的热情，和行云流水般的脉脉，以及爱的狂热。沉默需要默契、需要灵气、需要感受……在沉默的面前，任何语言和辞藻都是无力的、苍白的。大自然经过夜的沉默，它获得了一个朝霞满天、光辉灿烂的世界。沉默@胡隆坤$黎阳公司本部档案馆

简介：海呀，你说着什么语言？是永远的疑问。天呀，你用什么语言回答？用永远的沉默。

简介：沉默是一种处世哲学，用得好时，又是一种艺术。

简介：还要再往前走吗？那远去的小舟将与这静谧的景色融为一体，慢慢下沉，逐渐消失……

简介：建龙对通钢的并购，是作为一个决定，由吉林省国资委领导带着建龙集团高管到通钢宣布的。这样暗箱做法和傲慢做派，是在通钢员工对建龙的不满。情绪上再“火上浇油”

简介：离开小学的那一刻对于杰来说,有一种离开了沉默般的感觉。他从小不会和别人谈话,所以,杰没有朋友。在课间他便在同学的谈笑声中独自哼着《沉》,静望着校园对面红砖白墙的居民楼,天天如此。

简介：我走到书桌前,拧亮了那盏塑料台灯,灯泡里面的钨丝一下子燃烧起来,它使我的目光集中在上面,又迅速躲避开,我的眼睛冒着金色的火星,接着一大片一大片的黑晕刺进我的感觉,于是,我坐在那把棕色的木椅上,安静了下来。

简介：嘴巴的功能主要是吃饭和说话。当然还有接吻,但毕竟属于次要功能;因为世界上只有美食家演说家,没听说有接吻专家。人之大患一曰病,二曰祸。病从口入,祸从口出,嘴巴实在需要加强警卫工作。每当外出开座谈会时,夫人常会叮嘱丈夫:“多吃菜,少喝酒,多用耳朵少开口！”就是说,将说话的功能减少到最低限度。于是丈夫补充道:“听老婆的话跟党走！”

简介：Understandingisdifficult.Givenmuchexplaination,muchpropaganda,iftimehasn’tcome,youaresurelytobemisunderstood.Thisisatruth.Thisisanexperience,also.IgotitthroughalltheseyearswhenIstayedintheHistoryDepartmentofPekingUniversity.

简介：照例，在这篇短文里，我需要谈一谈我是怎样在干回百转之后终于抵达了批评的小径，又是如何树立了批评的“核心”——一种据说是批评家都必须具备的叫做“批评观”的武器，在这个问题面前，我感到困惑，困惑于我的那些只言片语、呓语狂言真的算作“批评”吗，也困惑该到哪里寻找我的“独门秘笈”。

简介：前不久,路经大栅栏,猛听一报贩在高声叫卖:'看报,看报,××明星第三次改嫁……'回头一看,竟有不少人围上去抢购,每份两角。我一边赶路,一边想,拿明星的隐私做广告,出版商发了财,报贩也挣了外块。但如果这位明星听见了报贩的叫卖声,会有什么感受呢?禁不住

简介：在草原上看星星这样的午夜，适合仰望星光交织，一条光明的河自黑暗的源头倾泻

简介：太阳每天都会升起，全家人像我爱他们一样爱我，我的歌声像天使一样优美——这是我上学以前最深信不疑的三件事。尤其是对我的歌声，我相当自信，每次全家一起唱歌时，我都会扯着嗓门大喊，每到这时，全家人都会为我使劲鼓掌，而我长大后的梦想就是当一名歌星。