简介：农杆菌介导的遗传转化的生物技术已经被广泛应用。蚜传辅助因子(helpercomponent-proteinase,HC-Pro)是一种RNA沉默抑制子,而HC-Pro蛋白对植物基因组DNA甲基化的影响及其作用机制并不十分清楚。我们采用农杆菌介导的烟草(NicotianabenthamianaL.)叶盘转化法将外源基因HC-Pro转化烟草。并优化了各种侵染条件,包括农杆菌重悬液的浓度,选择培养基中卡那霉素的浓度和生根培养基中活性炭的比例。此外,我们介绍了一种简单而有效的生根技术,即水培生根法,并利用这种技术快速获得了HC-Pro转基因株系。半定量RT-PCR(Reversetranscription-PCR)检测结果表明,HC-Pro在转基因烟草及转基因后代植株中稳定表达,为HC-Pro蛋白功能的研究提供了实验帮助。

简介：摘要目的探讨胃癌细胞微小RNA-448(miR-448)对沉默维甲酸诱导蛋白14(RAI14)的靶向调控作用及对细胞增殖侵袭迁移的影响。方法用miR-448转染人胃癌细胞株和胃正常上皮细胞GES-1，利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)和双荧光素酶报告实验确认miR-448是否对RAI14具调控作用。利用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测和Transwell实验进一步确证所筛选miR-448对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响，两组比较采用t检验。结果与GES-1比较，miR-448在SGC790细胞株中表达最低(2.22±0.18比8.11±0.26，t＝7.67，P<0.01)；miR-448可结合到RAI14 mRNA的3’UTR区降低荧光素酶活性至62%；增殖实验中，与mimic NC组比较，miR-448可显著抑制SGC790增殖率(0.71±0.07比1.38±0.04，t＝2.96，P<0.01)；在侵袭和迁移实验中，与阴性对照组比较，miR-448可显著抑制SGC790侵袭[(60.33±1.52)/视野比(137.66±3.21)/视野，t＝3.79，P<0.01]和迁移[(50.0±2.0)/视野比(92.67±2.08)/视野，t＝2.49，P<0.01]。结论miR-448可能通过靶向于RAI14 mRNA进而抑制其蛋白表达，最终负调控胃癌细胞的增殖迁移和侵袭。

简介：摘要目的观察长链非编码RNA淋巴增强子结合因子1反义RNA1(LEF1-AS1)基因沉默后对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移和血管生成能力的影响。方法采用RNA干扰技术，在HUVEC(美国模式培养物集存库)中沉默LEF1-AS1基因的表达，细胞分为对照组与实验组，即NC组和si-LEF1-AS1组，实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测转染效果；细胞计数试剂盒(CCK-8)和Transwell分别检测细胞增殖和迁移力的变化；体外血管生成实验检测LEF1-AS1对血管生成能力的影响。两组间比较采用独立样本t检验。结果RT-qPCR结果显示，si-LEF1-AS1组LEF1-AS1 mRNA的相对表达量(0.059±0.010)低于NC组(1.000±0.018)，差异有统计学意义(t＝40.824，P<0.01)；CCK-8实验结果显示，HUVECs在处理24 h后si-LEF1-AS1组细胞的吸光度(A)值(0.103±0.004)少于NC组(0.129±0.006)，在处理48 h后si-LEF1-AS1组细胞的A值(0.235±0.016)也少于NC组(0.431±0.018)，在处理72 h后si-LEF1-AS1组细胞的A值(0.454±0.029)也少于NC组(0.846±0.034)；Transwell迁移实验结果显示si-LEF1-AS1组迁移到小室下侧的相对细胞数(0.446±0.025)少于NC组(1.000±0.046)，差异有统计学意义(t＝17.120，P<0.01)；血管形成实验结果显示si-LEF1-AS1组的总成管长度(3 152.333±200.959)少于NC组(13 263.667±247.823)，差异有统计学意义(t＝54.891，P<0.01)。结论沉默长链非编码RNA LEF1-AS1抑制HUVEC细胞的增殖、迁移及血管生成能力。

简介：

简介：目的运用RNA干扰技术阻断人胰腺癌细胞株PANC1的NF-κBp65表达，观察该基因沉默后对细胞增殖能力及体外侵袭能力的影响。方法采用阳离子脂质体Lipofectamine^TM2000将化学合成的人NF-κBp65的小干扰RNA（siRNA）转染人胰腺癌细胞PANC1作为siRNA组，另设无同源性siRNA转染细胞的阴性对照组和蒸馏水空白对照组。实验重复6次。应用RT—PCR检测转染细胞NF-κBp65mRNA与细胞间黏附分子-1（ICAM-1）mRNA的表达。MTY结合克隆形成实验测定细胞生长抑制率。Matrigel细胞侵袭实验测定细胞体外侵袭能力。结果siRNA组、阴性对照组和空白对照组NF-κBp65mRNA相对表达量分别为0．227．4±0．045、0．381．4±0．038和0．404．4±0．031；ICAM-1mRNA相对表达量分别为0．597±0．083、0．983±0．068和1．027±0．098；细胞生长抑制率（72h）分别为18．3％、2．3％和0；克隆形成率分别为（14．1±3．1）％、（24．5±2．1）％和（27．2±2．6）％；侵袭细胞数分别为80．25±6．35、123．83±8．80和127．68±9．23。siRNA组均明显低于2个对照组（P〈0．01）。结论NF-κBp65的RNA干扰能抑制胰腺癌PANC1细胞NF-κBp65mRNA和ICAM-1mRNA的表达，抑制细胞的生长和侵袭。

简介：摘要目的观察微小RNA(miRNA，miR)-135a沉默对急性肾损伤大鼠肾功能保护作用并探讨其分子机制。方法将2018年6月到2019年12月购自河南实验动物中心的60只SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组和miR-135a组。miR-135a组通过腹腔注射沉默miR-35a的腺相关病毒1×1011 vg/只；对照组和模型组通过腹腔注射对照miRNA腺相关病毒1×1011 vg/只。3组大鼠接种15 d后，模型组和miR-35a组连续15 d注射庆大霉素50 mg/kg建立急性肾损伤模型；对照组连续15 d注射等体积生理盐水。建模成功48 h后处死小鼠，采用自动生化仪分析大鼠血肌酐和血尿氮水平；采用苏木精-伊红(HE)染色分析肾脏病理学变化；采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析趋化因子2(CCL2)和趋化因子3(CCL3) mRNA表达水平；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析3组大鼠外周血炎性因子水平；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-135a靶蛋白叉头蛋白转录因子O1(FoxO1)表达水平。计量资料比较采用单因素方差分析。结果miR-135a组大鼠肾组织病理评分[(5.19±1.38)分]显著低于模型组[(8.09±3.09)分]，差异有统计学意义(t＝3.193，P<0.05)。miR-135a组大鼠造模48 h后血肌酐和尿素氮水平[(73.76±9.43)、(12.60±4.01) mmol/L]显著低于模型组[(130.37±10.54)、(29.43±5.12) mmol/L]，差异有统计学意义(t＝2.941、3.019，P<0.05)。miR-135a组大鼠肾组织CCL2和CCL3 mRNA表达水平(1.59±0.12、1.73±0.19)显著低于模型组(3.42±0.38、2.51±0.29)，差异有统计学意义(t＝2.012、2.240，P<0.05)。miR-135a组大鼠血清白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平[(165.76±14.36)、(196.250±15.65) pg/ml]显著低于模型组[(252.32±21.44)、(318.02±27.36) pg/ml]，差异有统计学意义(t＝3.212、3.937，P<0.05)。miR-135a组大鼠肾组织FoxO1蛋白表达水平(0.29±0.09)显著高于模型组(0.12±0.07)，差异有统计学意义(t＝2.719，P<0.05)。结论miR-135a沉默通过上调FoxO1蛋白表达水平，降低急性肾损伤大鼠炎症水平，保护大鼠肾功能。

简介：摘要 目的：本研究拟探讨沉默长链非编码RNA HOTAIR对舌鳞癌细胞SCC9侵袭能力的影响。方法：用慢病毒转染至SCC-9细胞中，使HOTAIR沉默，利用Transwell检测实验组及对照组细胞侵袭能力变化。结果：沉默HOTAIR后，舌鳞癌细胞SCC9侵袭能力减弱，，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：沉默HOTAIR抑制舌鳞状细胞癌细胞SCC9的侵袭。

简介：目的探究RNAIE抑制肽（RIP）与抗生素协同抑制葡萄球菌感染的效果.方法选择临床常用的左氧氟沙星、青霉素、头孢唑琳、万古霉素、替考拉宁5种抗生素及RIP分别作用于金黄色葡萄球菌ATCC29213、ATCC25923和表皮葡萄球菌ATCC35984,对比不同抑制药对3种葡萄球菌的最低抑菌浓度（minimuminhibitoryconcentratin,MIC）值,并进一步分析RIP与左氧氟沙星协同抑制表皮葡萄球菌ATCC35984的作用.结果RIP对3种葡萄球菌的MIC值均〉128ng/ml,左氧氟沙星、青霉素、头孢唑啉、万古霉素和替考拉宁对金黄色葡萄球菌ATCC29213、ATCC25923的MIC值均在敏感范围内,而青霉素、头孢唑啉对表皮葡萄球菌ATCC35984的MIC则超出正常范围;与RIP联用能够有效提高左氧氟沙星的细菌灭杀效果,5、10ug/ml浓度下的RIP与2倍MIC的左氧氟沙星联合应用时可以完全清除表皮葡萄球菌ATCC35984生物被膜内细菌.结论RIP对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均无直接灭杀作用,无法取代抗生素,但联合应用RIP能够有效提高左氧氟沙星对葡萄球菌的灭杀效果.

简介：摘要目的观察骨肉瘤中环状RNA circ_0052012表达和沉默环状RNA circ_0052012表达对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测2017年10月至2018年12月郑州大学第一附属医院确诊的31对骨肉瘤标本癌组织和癌旁正常组织circ_0052012表达水平。使用针对circ_0052012的小干扰RNA(siRNA)转染骨肉瘤细胞系MG63，将体外培养的MG63细胞分为空白组(未转染)、阴性对照组(转染阴性对照si-NC)和沉默组(转染si-circ)。采用细胞增殖实验和Transwell实验，检测沉默RNA circ_0052012表达对MG63细胞增殖和侵袭的影响。采用生物信息学方法预测circ_0052012与微小RNA(miRNA，miR)-7的结合位点，利用双荧光素酶报告实验、RT-qPCR技术和Pearson相关分析，验证circ_0052012对miR-7的靶向调控作用及其在骨肉瘤中表达水平的相关性。两组间数据比较采用t检验，多组间数据比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果骨肉瘤组织中circ_0052012的表达水平显著高于对应癌旁正常组织，差异有统计学意义(2.452±1.061比1.007±0.644，t＝10.180，P<0.01)，且circ_0052012表达水平与骨肉瘤TNM分期、远处转移呈明显正相关(P<0.05)。在骨肉瘤细胞系MG63中，培养24、48、72 h后，circ_0052012沉默组细胞的增殖(0.297±0.012、0.607±0.074、0.797±0.067)均明显低于空白对照组(0.407±0.035、0.820±0.070、1.287±0.050)和阴性对照组(0.383±0.012、0.853±0.064、1.240±0.092)，差异有统计学意义(24 h，t＝-5.154、-9.192，P<0.01；48 h，t＝-3.635、-4.391，P<0.05；72 h，t＝-10.170、-6.778，P<0.01)。沉默组细胞的侵袭能力(39.400±6.066)也明显低于空白对照组(132.600±8.620)和阴性对照组(126.000±10.950)，差异有统计学意义(t＝-19.770、-15.460，P<0.01)。双荧光素酶报告实验证实circ_0052012与miR-7靶向结合，且在骨肉瘤组织中的表达呈明显负相关(r＝-0.661，P<0.05)。通过抑制miR-7，可部分逆转沉默circ_0052012对MG63细胞增殖和侵袭的抑制作用。结论在骨肉瘤细胞中，沉默circ_0052012可通过上调miR-7表达，抑制细胞的增殖和侵袭。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(lncRNA SNHG1)靶向微小RNA-16(miR-16)对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法将BMSCs(购自上海泽叶生物科技有限公司)进行体外培养，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测BMSCs成骨诱导前后SNHG1和miR-16的表达水平。将BMSCs分为正常组、诱导分化组、si-con组、si-SNHG1组、miR-con组、miR-16组、si-SNHG1＋anti-miR-con组和si-SNHG1＋anti-miR-16组。蛋白质印记(Western blot)检测碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证SNHG1和miR-16的靶向调控关系。两组间数据比较采用独立样本t检验，多组间数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果与正常组比较，诱导分化组BMSCs细胞SNHG1(0.64±0.12比1.00±0.08，t＝1.323，P<0.05)的表达水平显著降低，miR-16(4.54±0.84比1.00±0.11，t＝7.238，P<0.01)的表达水平显著升高。与si-con组比较，si-SNHG1组BMSCs中ALP(0.61±0.06比0.41±0.05，t＝4.435，P<0.05)、Runx2(1.25±0.13比0.79±0.09，t＝5.039，P<0.01)、OPN(0.94±0.08比0.41±0.06，t＝9.180，P<0.01)蛋白表达显著升高。与miR-con组比较，miR-16组BMSCs中ALP(0.63±0.06比0.40±0.04，t＝5.524，P<0.01)、Runx2(1.04±0.09比0.69±0.07，t＝5.317，P<0.01)、OPN(0.98±0.11比0.51±0.08，t＝5.985，P<0.01)蛋白表达显著升高。与si-SNHG1＋anti-miR-con组比较，si-SNHG1＋anti-miR-16组BMSCs中ALP(0.52±0.04比0.66±0.06，t＝3.363，P<0.05)、Runx2(0.89±0.07比1.08±0.09，t＝2.886，P<0.05)、OPN(0.71±0.08比0.98±0.11，t＝3.438，P<0.05)蛋白表达显著降低。miR-16是SNHG1的靶基因，SNHG1可负性调控miR-16表达。结论lncRNA SNHG1通过靶向miR-16可抑制BMSCs成骨分化。

简介：目的构建shRNA并干扰肝癌HepG2细胞中BC047440基因，观察其对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法根据BC047440基因序列，设计和合成两条特异表达该基因shRNA序列并克隆载体pGenesil-1，转染肝癌HepG2细胞并用定量PCR观察抑制BC047440基因表达的效果，并通过MTr法和流式细胞仪检测细胞增殖及细胞周期的变化。结果酶切和序列测定提示成功构建了特异表达BC047440基因的shRNA1和shRNA2两个质粒。shRNA1和shRNA2对BC047440mRNA的抑制率分别为80．22％和58．63％。干扰BC047440基因后，肝癌HepG2细胞增殖受到明显抑制，主要停滞在s期。结论构建的shRNA能有效干扰肝癌HepG2细胞BC047440基因的表达，并抑制肝癌HepG2细胞的增殖，提示BC047440基因和肝癌HepG2细胞增殖有关。

简介：金葡菌是一种主要致病菌,而多种耐药菌株的出现增加了临床治疗的难度.RNAⅢ抑制肽(RNAⅢ-inhibitingpeptide,RIP)由凝固酶阴性葡萄球菌产生.研究证实,RIP可通过阻断细菌之间的群体感应而减少金葡菌毒素的产生和生物被膜的形成,有效防治金葡菌感染.

简介：摘要目的探讨微小RNA(microRNA)-4320对胃癌MGC803细胞增殖、迁移的影响及机制。方法分别采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-4320在4种胃癌细胞株(MGC803、HS-746T、SGC7901、BGC823)中的表达情况。将携带miR-4320干扰片段的重组慢病毒和空白慢病毒感染MGC803细胞，设为si-miR-4320组和NC组。噻唑蓝比色法和Transwell小盒实验分别检测下调miR-4320后MGC803细胞增殖和迁移情况。生物信息学软件RNAhybrid预测miR-4320目的基因。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-4320与目的基因的靶向关系。分别采用qRT-PCR和Western blot检测miR-4320目的基因的表达。计量数据以均数±标准差(±s)表示，组间比较应用t检验或单因素方差分析。结果4种胃癌细胞株miR-4320的表达均显著高于正常胃黏膜上皮细胞(P<0.01)。NC组和si-miR-4320组MGC803细胞中miR-4320表达分别为8.19±1.00和1.09±0.31，miR-4320干扰片段显著降低miR-4320的表达(P<0.01)。si-miR-4320组MGC803细胞的吸光度明显低于NC组(P<0.05)，迁移能力明显低于NC组(P<0.01)。细胞因子信号抑制因子(SOCSI)是miR-4320的目的基因(P<0.01)。与NC组相比，si-miR-4320组SOCS1基因表达明显上调(P<0.01)。结论miR-4320在胃癌细胞株中表达升高，下调miR-4320的表达能够通过诱导SOCS1基因表达，抑制胃癌MGC803细胞的增殖及迁移能力。

简介：目的研究靶向增殖诱导配体(aproliferation-inducingligand,APRIL)基因的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)在体内外对胰腺癌细胞生长的影响,探讨其对胰腺癌基因治疗的可行性.方法将前期构建的LV-shAPRIL感染CFPAC1细胞,MTY法及流式细胞技术分别检测CFPAC1细胞生长和凋亡.用CFPAC1细胞建立裸鼠移植瘤模型,观察瘤内注射LV-shAPRIL对瘤生长的影响.结果LV-shAPRIL感染CFPAC1细胞96h后,CFPAC1细胞的生长明显受抑制,与对照组及空载体组相比有显著差异(P＜0.05);同时细胞凋亡率为(17.35±0.96)%,明显高于对照组和空载体组(P＜0.05).将LV-shAPRIL局部注射到裸鼠移植瘤内,LV-shAPRIL组肿瘤生长明显比同期对照组和空载体组减缓;第27天LV-shAPRIL组肿瘤体积和重量分别为(821.8±123.3)mm3和(2.16±0.18)g,明显小于其他两组(P＜0.05).结论靶向APRIL基因的慢病毒表达载体LV-shAPRIL在体内外抑制胰腺癌CFPAC1细胞的生长,为胰腺癌基因治疗探索新的思路.

简介：摘要目的探究CTTN基因的沉默对非小细胞肺癌A549细胞侵袭能力的改变。方法采用脂质体转染法，利用特异性siRNA将CTTN基因进行沉默，westernblot检测其沉默效率。使用激光共聚焦显微镜检测CTTN基因沉默后，呈现红色荧光的TRITC-鬼笔环肽标记的F-actin和呈现绿色荧光的Dyligt488标记的cortactin共定位的黄色荧光-侵袭性伪足数量的改变情况。Transwell小室模型检测CTTN基因沉默前后侵袭细胞数量的改变。结果westernblot检测发现，siRNA可以将CTTN基因显著沉默。在此基础上，荧光共聚焦显微镜发现，CTTN沉默后出现侵袭性伪足的细胞比例显著降低(P＜0.05)。Transwell侵袭模型同样发现，CTTN沉默显著减少了侵袭细胞数量(P＜0.05)。结论CTTN基因在肿瘤细胞的侵袭进程中发挥重要作用，其表达的降低可以显著抑制细胞的侵袭能力。

简介：摘要目的探讨RNA干扰Twist基因表达对肝细胞癌细胞（HCC9402）转移的抑制作用。方法用脂质体转染法将表达siRNA-Twist的真核表达载体pGenesil-1-Twist-siRNA(pTwist-siRNA)和空载体pGenesil-1-Neg-siRNA(pNeg-siRNA)导入HCC9402细胞，G418筛选阳性细胞，获得稳定转染的阳性克隆。观察siRNA-Twist对Twist表达的沉默及对肝细胞癌细胞体外侵袭转移的抑制作用，采用RT-PCR技术检测不同处理组细胞中TwistmRNA的表达水平，Western-blot测定蛋白表达水平。建立不同组裸鼠原位肝细胞肝癌模型，观察Twist沉默对裸鼠原位肝细胞肝癌转移的抑制作用。结果pTwist-siRNA组细胞内TwistmRNA及Twist蛋白的表达被有效沉默。重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭实验显示,pTwist-siRNA组、空白对照组、pNeg-siRNA组穿透基底膜细胞数分别为(35±10)、(219±72)、(228±71)个/高倍镜(×200)，前组明显低于后两组，差异分别有统计学意义(P<0.05)。裸鼠体内实验表明，pTwist-siRNA组的肿瘤转移结节、肝脏转移结节、腹水明显减少。结论RNA干扰Twist基因表达对肝细胞肝癌细胞侵袭转移有抑制作用,Twist可能成为肝细胞肝癌基因治疗的新靶点。

简介：沉默钟园对朋友的误会。我常常保持沉默。因为时间，能填平深深的沟壑。对恶意的诽谤。我往往给予沉默。因为时间。最先腐烂没生命的事物。沉默并不软弱。会把干戈化为玉帛。沉默有无限容量，岁月丰富了它的收获。沉默@钟园...

简介：海呀，你说着什么语言？是永远的疑问。天呀，你用什么语言回答？用永远的沉默。

简介：“进山了?”我问苏来曼。汽车开始颠晃起来。“嗯。”苏来曼点点头,脸上仍旧没有多少表情。我在心里无奈地笑笑,明白这一路只能默默前行了。我把脸转向窗外,一列秃山缓缓驶来,干瘦荒瘠,没有树也没有草。这次来参加笔会,一半原因是为了见苏来曼。苏来曼在这个地区最偏最穷的回族山村教书,也写作,两年前他在我的一篇作品中得知我是回民同时又读

简介：城市从鞭炮中惊醒鼾声吐出的顾客分成几批轮流掏空黑夜时间一走一些人与土地缝合一些人涌进血液而我爱惜草丛脸贴向地面一个人寻找语言