简介:目的:为了制备足量、高纯度的供血吸虫保护性免疫力研究的多价分子疫苗。方法:通过制备型SDS-PAGE和电渗析方法从日本血吸虫成虫分离纯化出28kD、31/32kD及97kD蛋白。并检测其蛋白含量,蛋白纯度和分子量及其抗原活性。结果:此三种纯化蛋白经SDS-PAGE检测均为单一条带并与所分离的蛋白分子量相符;其蛋白含量分别为0.35mg/ml、0.4mg/ml和0.3mg/ml;Westem-blot均为单一反应区带;ELISA反应滴度分别为1:640、1:1280和1:320。结论:所制备的日本血吸虫成虫28kD、31/32kD及97kD蛋白多价分子疫苗,具有纯度高、制备快、回收率高等优点,而且不影响所纯化的抗原活性。
简介:目的克隆人HMGBlA—box的cDNA,构建高效稳定的大肠杆菌(E.coli)表达菌株并对其诱导表达纯化.同时探讨其对间充质干细胞(Mesenchymalstemcells,MSC)的促分化作用。方法根据优选合成的HMGBl基因序列设计引物,PCR扩增目的基因片段,插入克隆载体pGEM—T并进行序列测定。重组克隆载体经BamHI和xhoI酶切.琼脂糖凝胶电泳分离目的基冈,插入含His标签的表达载体pET24a。将构建的质粒转染BL21大肠杆菌,经IPTG诱导后.SDS—PAGE观察表达量。HIS—link层析柱纯化重组人HMGBlA—box.蛋白印迹鉴定重组蛋白。将重组蛋白加入hBMSC培养体系中培养一周后,碱性磷酸酶染色检测其促MSC成骨分化作用。结果经RT—PCR扩增得到了261bD的DNA片段,经测序分析.与GenBank中报道的已知序列完全一致,构建了含融合蛋白的重组表达质粒。经诱导后细菌高表达A—boX,表达量为总蛋白的45%。经层析柱纯化后,蛋白印迹证实目的蛋白为高纯度的A—box。将A—box加入MSC培养体系中培养后,细胞活性无明显改变.但细胞碱性磷酸酶表达明显增高。结论成功构建了重组人HMGBlA—Box的表达载体.纯化的重组蛋白能有效促进MSC向成骨细胞分化。
简介:摘要:本文探讨了系统生药学鉴定技术在红景天(Rhodiola rosea)鉴定中的广泛应用以及其在提高红景天药材质量和纯度方面的关键作用。红景天作为一种重要的药用植物,具有多种药理活性成分,如Salidroside、Tyrosol、Rosavin等,因此其质量控制至关重要。传统的鉴定方法在面对红景天的复杂性和多样性时存在一定的局限性,而系统生药学鉴定技术以其高度客观性和准确性得到了广泛应用。本文将介绍系统生药学鉴定技术的原理、方法和应用,重点讨论了其在红景天鉴定中的显著优势。通过深入研究,本文旨在为中药产业的质量控制提供有力支持,同时为红景天及其他药用植物的合理利用和开发提供指导。