简介:目的:从海参体壁组织中分离提取蛋白酶体,研究其酶学性质。方法:新鲜海参组织经匀浆、Tris-HCl缓冲液浸提后得到粗提物,再经(NH4)2SO4盐析、二乙氨乙基葡聚糖纤维素和丙烯葡聚糖凝胶S-300分离纯化后得到海参蛋白酶体。经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,其分子质量200ku。结果:海参蛋白酶体特异性最强的检测底物Boc-GAA-MCA,最适pH8.0,最适反应温度45℃。40℃时蛋白酶体活性稳定,在1h的孵育过程中呈现一定的热激活效应。在50~60℃,酶活力随孵育时间的延长迅速下降。K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+均可明显抑制其活性。抗痛素、N-甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基化酮、N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮及E-64均可显著抑制该蛋白酶体活性。结论:海参体壁蛋白酶体具有典型的蛋白酶体的复合型活性,其中胰蛋白酶样活性较强,之后是糜蛋白酶样活性,而肽基谷氨酰肽水解酶样活性最弱。
简介:目的:以塘溪蜜柚果汁为对象.研究柚苷酶处理对柑橘果汁抗氧化活性的影响。方法:用DPPH和·0H自由基的清除能力及Fe^3+还原能力评价抗氧化活性.并分析它们与抗坏血酸、总酚、柚皮苷和柚皮素含量的关系。结果:原果汁对照、酶处理对照和酶处理果汁清除DPPH自由基的IC。值分别为18.8,22.4,22.0g/100g;清除·OH自由基的IC50值分别为3.5,3.7,3.2g/100g;Fe^3+还原能力值分别为18.8,14.2,14.3mg抗坏血酸/100g;它们的抗坏血酸含量分别为40.2,37.8,34.3mgl00g,总酚含量分别为44.4,31.4,38.9mg/100g,柚皮苷含量分别为56.9,48.0,0.8mg/100g,柚皮素含量分别为0,0,24.3mg/100g。抗坏血酸、总酚和柚皮素对瑭溪蜜柚果汁的3种抗氧化活性有显著影响:柚皮苷对DPPH自由基清除能力和Fe^3+还原能力具有显著影响,而对·0H自由基清除能力的影响不显著。结论:柚苷酶处理能显著增加柑橘果汁·0H自由基清除能力.同时柚苷酶处理过程中的热、光和氧等会引起抗坏血酸和总酚含量降低,从而导致DPPH自由基清除能力和Fe^3+还原能力轻微下降。
简介:采用生物传感器-人工神经网络建立基于游离氨基酸含量对胶原蛋白胰酶酶解进程的预测模型,以实现对酶解进程的在线监控,获得最大量的目标活性肽。以大马哈鱼皮为原料制备胶原蛋白,对其酶解,建立不同条件下的酶解动力学曲线。结果显示:酶解液中游离氨基酸含量随酶解时间的延长而增加,与胶原蛋白的水解度呈良好的线性关系。以酶浓度、底物浓度、游离谷氨酸含量、赖氨酸含量、谷氨酸和赖氨酸含量为输入参数,水解度DH为输出参数,建立基于谷氨酸含量、赖氨酸含量以及谷氨酸赖氨酸含量的蛋白酶传感器-人工神经网络预测模型。对3个模型的水解度样本值与拟合值进行比较分析,R2分别为0.98,0.9805和0.981,对样本值拟合度很高。利用模型进行独立试验验证,理论值与实验值相符合,水解度实验的相对误差范围分别为0.404%~6.45%,0.76%~2.27%和1.67%~2.72%。3个模型在一定程度上实现了仿真监控,可用来在线预测水解反应的动态进程。