简介:高质量mRNA的分离和纯化是转录组文库构建和基因表达调控等生物学实验的前提。为了调取较完整、纯度较高的mRNA,本研究采用磁性分离技术调取mRNA,磁性复合微粒通过其表面的功能团与oligo(dT)_(25)相偶联,形成杂交体-磁珠复合体,外加磁场来实现mRNA的快速分离,并经过不同试剂纯化后得到高质量的mRNA,用于构建转录组文库。结果表明:mRNA被调取后,使用不同的缓冲液纯化时对mRNA质量影响较大,经多次试验验证:结合缓冲液为2.5mol/LLiCl,洗脱缓冲液采用0.1mol/LLiCl和1%LiDS相结合进行纯化时,检测结果显示文库条带位于400~600bp之间,条带大小符合上机要求。高质量转录组文库的构建为高通量测序和基因克隆等实验提供帮助。
简介:对水芹中芹菜素的提取纯化与抗氧化活性进行研究。首先,以水芹为原料、乙醇为溶剂,黄酮得率为评价指标,通过单因素试验及四因素三水平L9(34)正交试验,确定了粗黄酮的最佳提取条件。同时,通过静态吸附,以树脂对粗黄酮的吸附率和解析率为评价指标,比较了AB-8,X-5及HP-20型这3种大孔吸附树脂对粗黄酮纯化效果,以确定其最佳纯化树脂。采用液相色谱和质谱对纯化后的芹菜素进行分离验证。同时,研究了芹菜素粗提物及单体的清除DPPH自由基、羟基自由基及超氧阴离子自由基的能力。结果表明,粗黄酮的最佳提取条件为料液比1∶35(g∶mL),提取温度80℃,提取时间4h,乙醇体积分数90%(V/V);AB-8型大孔吸附树脂具有较好的纯化效果。液相色谱结果表明,水芹黄酮粗提物共有4种组分,通过与芹菜素标准品比对,分离出芹菜素单体,并结合质谱图进行鉴定。同时,芹菜素粗提物及单体对DPPH自由基、羟基自由基及超氧阴离子自由基都具有一定的清除能力,其中芹菜素单体的抗氧化性要大于粗提物,且芹菜素单体对超氧阴离子自由基的清除能力较强。