蒙药对四氯化碳所致大鼠肝损伤保护作用的研究

蒙药对四氯化碳所致大鼠肝损伤保护作用的研究

哈斯巴根，刘智威，萨仁高娃，吴哈达 （通讯作者）

内蒙古国际蒙医医院 消化二科，内蒙古呼和浩特 010065

[摘 要]目的: 用四氯化碳诱导建立大鼠肝损伤模型，从一般状况、生化及组织学方面评价大鼠肝损伤的保护作用。方法:本研究将采用30只SD大鼠，随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组、蒙药额力根汤组、蒙药苦参七味汤低剂量组、蒙药苦参七味汤高剂量组等6组，每组6只。结果:模型组的肝功指标明显高于正常组、病理改变明显，用蒙药额力根汤和苦参七味汤干预后明显改善肝功能、病理改变，与模型组比较，蒙药额力根汤具有显著的统计学意义（P<0.01），但蒙药苦参七味汤无统计学意义。结论:蒙药额力根汤改善大鼠肝损伤及抗炎作用较显著，蒙药苦参七味汤作用不显著。本研究结果有望为蒙药额力根汤抗肝纤维化作用实验与临床研究提供科学依据。

[关键词] 蒙药；额力根汤； 苦参七味汤；肝损伤； 保护作用

引言 本实验以CCL4所致大鼠肝损伤为模型,观察蒙药对大鼠血清中ALT、AST、TP、ALB、TC指标及病理组织学改变情况, 从实验医学的角度揭示蒙药保肝降酶的机理,从而指导临床用药。

1 实验材料

1.1实验动物：健康清洁级SD大鼠30只，雌雄各半，体重200±30g，由北京维通利华公司提供。

1.2实验药物与试剂：蒙药额力根汤和苦参七味汤由内蒙古自治区国际蒙医医院提供，秋水仙碱，四氯化碳（CCL4）分析纯，花生油，胆固醇，1％戊巴比妥钠，生理盐水等。

1.3主要检测指标：血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总胆固醇（TC），肝组织病理组织学改变等。

1.4主要仪器：全自动生化仪、-76℃超低温冰箱 HARRIS、MoticamL 300 数码显微图像分析系统、SHANDON 石腊切片机、光镜等。

2 实验方法

2.1 分组：健康清洁级大鼠30只，将其随机分为6组，既正常组、模型组 、蒙药额力根汤组、秋水仙碱组、蒙药苦参七味汤低剂量组、蒙药苦参七味汤高剂量组，每组6只大鼠。

2.2 造模方法：采用CCl4肝损伤模型制造方法，模型组大鼠用普通饲料喂养，按1.5 mL/kg体重腹腔注射 40％的CCl4油剂，每隔 3 天注射一次，连续4周。正常组大鼠中注射同体积的生理盐水，注射次数与间隔时间同模型组。正常组以外的5组用药还是按1.5 mL/kg 体重每周注射一次40％CCl4油剂。

2.3 给药方法：正常组和模型组用普通饲料喂养4周，与治疗组等量的生理盐水灌胃4周；秋水仙碱组、蒙药额力根汤组、蒙药苦参七味汤低剂量和高剂量组造模成功后灌服4周。各组灌服药物剂量：蒙药额力根汤为6 g·kg^-·d ^-；秋水仙碱为100 ug·kg ^-；蒙药苦参七味汤低剂量为1g·kg ^-·d ^-；蒙药苦参七味汤高剂量为6g·kg ^-· d ^-；药物浓度及等效剂量按体表面积折算（给予大鼠剂量（mL/kg·d）= 成人剂量×0.07/1.5（g/kg·d）。各组灌胃液体量为1 mL/100g，日1次，普通饲料喂养4周。

2.4 取材方法及检测指标： 各组灌胃给药4周后,以20%乌拉坦溶液腹腔麻醉, 摘眼球取血 3ml，分离血清，备用;然后断颈椎处死大鼠, 迅速剖开腹腔, 取肝组织, 10%福尔马林溶液固定,备用;取肝右叶2g肝组织, 0.9%生理盐水反复冲洗, 低温冷冻(-70℃),备用。血清生化检测：ALT、AST、TP、ALB、TC等指标；肝脏组织病理切片：石蜡包埋,HE 染色,光镜观察等。生化检测和病理观察由我院药物实验室进行。

2.5 统计学处理：采用SPSS19.00统计软件进行数据分析，计量资料数据以 X±S方式表示，多样本均数间比较用方差分析，P<0.05代表差异具有统计学意义。

3　实验结果

3.1　大鼠的一般情况。经四氯化碳造模后，大鼠精神状态差、毛发蓬松缺乏光泽、活动量及饮食量均减少，经秋水仙碱及蒙药治疗后大鼠体重、活动量、食欲和毛发等情况均有所好转。

3.2　血清生化指标的影响。检测显示额力根汤组对大鼠血清ALT的作用比其他检测指标的作用较显著，血清ALT的统计结果显示：模型组（51.5±6.40）与正常组（29.33 ±3.30）比较有显著统计学差异，其P<0.01，额力根汤组（32.83 ±5.10）与模型组（51.5 ±6.40）比较有统计学意义，其 P<0.01。秋水仙碱组、苦参七味汤低剂量、高剂量组与模型组比较都有改善作用，但无显著统计学意义；额力根汤组对大鼠血清AST的作用比其他检测指标的作用较显著，血清AST的统计结果显示：模型组（149.5±13）与正常组（142.5±20.00）比较无显著统计学差异，其P=0.75，额力根汤组（90.67±26.50）与模型组（149.5±13）比较有统计学意义，其 P<0.05；秋水仙碱组、苦参七味汤低剂量与模型组比较都有改善作用，但无显著统计学意义；蒙药额力根汤和蒙药苦参七味汤组对检测项目TP和ALB有改善作用，但没有统计学意义，各用药组对检测项目TC没有改善作用。

3.3肝组织病理形态学。实验结果显示，正常组大鼠肝小叶结构完整，肝细胞排列整齐，胞浆均匀，无变性坏死，无炎症细胞浸润，无纤维组织增生；模型组肝组织出现肝细胞脂肪变性，可见不同程度的肝细胞坏死，肝组织中有大量炎性细胞浸润。蒙药各治疗组肝组织细胞变性、坏死减轻，炎性细胞浸润减轻，提示蒙药有抗肝损伤作用。

4　讨论

肝损伤加重演变为肝纤维化，肝纤维化是肝硬化的前期病变，其各种慢性肝病进展为肝硬化的共同病理表现。在临床上，对肝损伤进行早期有效的阻断治疗、能够改善肝病的进一步恶化具有重要意义。蒙药额力根汤能够降低血清转氨酶，保护肝脏，促进人体七素的正常代谢水平、促进精华与糟粕的合成与分解过程[1]。实验结果表明蒙药额力根汤在改善肝损伤和消炎方面的作用较显著，其作用机理需进一步验证和研究。蒙药对CCL4所致大鼠肝损伤有明显的保护作用, 可以有效地降低大鼠血清中的转氨酶含量, 并加速肝损伤的恢复, 尤以蒙药额力根汤作用明显。

参考文献：

1. 潘金, 琚坚. JAK/STAT信号转导通路在肝纤维化形成中的作用[J].临床肝胆病杂志,2013,29(5):393-396.

2. 陈莲香,舒建昌.PDGF与肝纤维化关系的研究新进展[J].胃肠病学和肝病学杂志,2011,(1).

3. 谢永鹏,臧秀贤,吴扬,等.结缔组织生长因子与肝脏纤维化[J].临床肝胆病杂志,2011,(1).

基金项目： 2017年内蒙古自治区卫生和计划生育委员会科研计划项目（201701021）；2017年内蒙古国际蒙医医院信息化建设与蒙医疑难病症的攻克研究项目（内蒙古民委项目）

通讯作者：吴哈达，医学博士，主任医师 ，内蒙古国际蒙医医院消化内科，010065