磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B/核因子κB信号通路在FSH促进卵巢癌细胞增殖和侵袭中的作用

磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B/核因子κB信号通路在FSH促进卵巢癌细胞增殖和侵袭中的作用

路晓琳

河北省邯郸市中心医院056001

路晓琳女1984年11月，汉族，河北省邯郸市，单位：河北省邯郸市中心医院；研究方向：妇科肿瘤。

【摘要】目的：综合分析磷脂酰肌醇3激酶（Phosphatidylinositol3-kinase，PI3K）、蛋白激酶B(Akt)/核因子κB(NF-κB)信号通路在FSH（卵泡刺激素）促进卵巢癌细胞增殖和侵袭中的作用。方法：选取在我院2015年2月-2016年2月收治的卵巢癌细胞患者临床资料42例作为研究对象，分别培养卵巢癌细胞株（SKOV3细胞与3AO细胞），随机分为FSH组与对照组，每组均为21例。采用MTT（四甲基偶氮唑蓝）法检测10U/L、30U/L、70U/L、150U/L等不同浓度以及FSH不同处理时间10h、20h、48h、70hSKOV3细胞与3AO细胞增殖情况；采用体外侵袭实验检测两组SKOV3细胞、3AO细胞的侵袭能力。结果：FSH组与对照组SKOV3细胞与3AO细胞增殖在不同时间处理后的数据比较差异有统计学意义(P＜0.05)，FSH组与对照组SKOV3细胞与3AO细胞侵袭能力比较有差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：FSH可能是通过PI3K蛋白激酶B信号通路调节卵巢癌SKOV3细胞、3AO细胞中核因子κB的活性,实现对卵巢癌细胞的促增殖和侵袭作用.

【关键词】PI3K；Akt；NF-κB；FSH；SKOV3细胞；3AO细胞

磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B/核因子κB信号通路可以被很多胞外作用所机会，与此同时也可以调节更多的细胞功能，主要表现为：（1）转录功能；（2）翻译功能；（3）增殖功能；（4）生长功能；（5）存活功能[1-2]。磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B/核因子κB信号通路的异常机激活与诸多疾病密切相关，例如肿瘤与慢性疾病等。相关文献资料研究结果表明，蛋白激酶B的表达与卵巢癌的预后效果呈负相关关系，蛋白激酶B表达越高说明卵巢癌患者的预后效果越差[3-4]。绝经后妇女体内的FSH是发生卵巢癌疾病的高危影响因素之一，FSH结合片段是人工合成的小分子多肽。一条FSH与卵巢细胞FSH受体相结合的片段，其相对分子量约为1201，属于FSH中的以下两个部分：（1）α链——SARY;（2）β——TDSDS。笔者将根据相关工作经验，综合分析PI3K、Akt/NF-κB信号通路在FSH促进卵巢癌细胞增殖和侵袭中的作用。现报道如下。

材料和方法

1.1细胞株

卵巢上皮性癌细胞株由北京医院妇产科实验室提供。

1.2试剂

MTT、Akt抗体、HYCLONE（胎牛血清）以及培养基（DMEM-F10）均购自SIGMA公司，ECL发光剂购自cellsiginhing公司。

1.3细胞培养

SKOV3细胞、3AO细胞使用30%HYCLONE+300U/L青霉素+150U/LDMEM-F10培养液，置于36°C，3%CO2细胞培养箱中。将卵巢癌细胞以1×103个/ml的浓度种植于100孔板中，SKOV3细胞、3AO细胞在无抗生素的培养基中培养1d之后加入相同浓度的药物，严密观察SKOV3细胞、3AO细胞的增殖情况。SKOV3细胞、3AO细胞在无血清的培养基中培养2d之后经过不同浓度的FSH刺激收集患者细胞，采用蛋白印迹发进行鉴定Akt蛋白表达情况；经过不同浓度的FSH结合片段刺激2d之后分别处理SKOV3细胞、3AO细胞10min、20min、40min、60min，使用蛋白印迹发鉴定Akt表达情况。

1.4分析MTT

当SKOV3细胞、3AO细胞处于对数生长期时，经过胰酶消化后以1×103个/ml的浓度种植于100孔板中，每孔为160μL，每组5孔，等到无血清的培养液静置1d后加入各种药物处理2d后，在培养基中加入6g/L的30μLMTT，培养3.5h之后丢弃培养基，每孔加入160μLDMKE，溶解细胞代谢生成后的结晶，应用酶联免疫检测仪器在500nm波长检测其A值。

1.5蛋白印迹法分析

收集处理之后的细胞，按照传统方法提取总蛋白，将50μg蛋白上样置于11%SFH-ENNA；电泳结束之后将250ma蛋白在2h之后转移到JBHG膜上，2%脱脂奶粉在常温下封闭60min后加入1:900Akt抗体中，洗膜2次之后，加入1:1000Akt抗体中，孵育60min后加入TBST洗膜5次，每一次为12min，实验室重复2次左右。

1.6细胞划痕法

在体外培养的单层细胞上划痕致伤，再加入药物观察卵巢癌细胞的迁移过程，分析其侵袭能力。

1.4统计学方法

采用SPSS20.0统计学软件进行统计学分析，计量资料用(±s)表示，组间差异、组内差异采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，P＜0.05时为差异有统计学意义。

结果

2.1两组SKOV3细胞、3AO细胞细胞增殖率分析

FSH处理SKOV3细胞48h、3AO细胞24h时,其细胞增殖率最高,分别为(167.2±1.2)％、(174.1±1.7)％.FSH组与对照组SKOV3细胞与3AO细胞增殖在不同时间处理后的数据比较差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

2.2两组SKOV3细胞、3AO细胞细胞侵袭能力分析

对照组SKOV3细胞的穿膜细胞数为(27.0±5.0)个，3AO细胞的穿膜细胞数为(20.0±3.0)个；FSH组SKOV3细胞的穿膜细胞数为(119.0±20.0)个，3AO细胞的穿膜细胞数为(135.0±21.0)个；FSH组与对照组SKOV3细胞与3AO细胞侵袭能力比较有差异有统计学意义(P＜0.05).

3.讨论

FSH是垂体分泌的一个糖蛋白激素，FSH的结构与功能被广泛研究中[5-7]。正常患者的卵巢可以直接促进窦前卵泡的增殖分化合成抑制素A与激活素，FSH在卵巢癌的发生过程中仍然存在争议。相关研究发现，FSH中的“H”可以有效促进卵巢癌细胞的增殖与侵袭[8-9]。本文的相关研究结果显示FSH组与对照组SKOV3细胞与3AO细胞增殖在不同时间处理后的数据比较差异有统计学意义(P＜0.05)，FSH组与对照组SKOV3细胞与3AO细胞侵袭能力比较有差异有统计学意义(P＜0.05).从上述数据不难看出，FSH可显著增强SKOV3细胞与3AO细胞的侵袭能力，支持促性腺激素会致癌的观点仍然需要进一步讨论与研究。PI3K可以有效调节好细胞的生长与增值，Akt信号通路是最为重要的蛋白激酶，也是PI3K下游分子活化的重要形式，PI3K的发生与肿瘤的发生密切相关。NF-κB信号通路是Akt重要的下游分子，Akt的异常活化可有效调节细胞的增殖与凋亡，溶解细胞外间质，促进肿瘤细胞的转移。

参考文献

[1]徐春琳,路晓琳,闫晓楠等.PI3K/Akt/NF-κB信号通路在FSH促进卵巢癌细胞增殖与侵袭中的作用[J].中华妇产科杂志,2012,47(2):134-138.

[2]李昕,曾诚,杨秀丽等.促性腺激素释放激素类似物在妇科疾病中的应用[J].实用妇科内分泌电子杂志,2015,11(8):121-124,125.

[3]冯怡雯,魏桠楠,祝颖等.FSH通过SATB1调控上皮性卵巢癌ES-2细胞的增殖和侵袭活性[J].现代生物医学进展,2011,11(15):2801-2805.

[4]刘姝蓉,姚晔俪,贾罗琦等.卵泡刺激素(FSH)对卵巢癌HEY细胞系Notch通路及转录因子Snail表达的影响[J].复旦学报（医学版）,2013,40(4):385-389.

[5]王婧,余思云,吴晓蕊等.桥粒胶蛋白-3介导促卵泡激素通过EGFR/Akt信号通路对卵巢癌细胞增殖活性的调控[J].第二军医大学学报,2014,35(5):487-494.

[6]吴凌,魏桠楠,杨婷等.促卵泡激素结合片段通过PI3K/Akt-cyclinD1通路抑制卵巢癌细胞增殖活性[J].现代生物医学进展,2011,11(16):3030-3033.

[7]刘晓梅,郑桂英.卵泡刺激素及其受体对卵巢癌细胞株的增殖作用[J].实用药物与临床,2015,12(4):398-402.

[8]高珊,郭华,杨彩虹等.卵泡刺激素对上皮性卵巢癌细胞株的增殖及β-黏连蛋白表达的影响[J].宁夏医科大学学报,2013,35(4):386-389,封3.

[9]马洁,王倩倩,廖虹等.促卵泡激素通过活性氧途径调控卵巢癌细胞Nrf2蛋白的表达[J].第二军医大学学报,2012,33(9):935-939.