齐墩果酸脂质体体内过程的研究

齐墩果酸脂质体体内过程的研究

李雪梅来海中刘盼盼

新疆石河子市人民医院新疆石河子832000

作者简介：李雪梅（1969—），女，大学本科，研究方向：新型靶向制剂的研发和利用

通信作者：来海中（1970—），男，博士研究生，研究方向：新型靶向制剂的研发和利用

摘要目的：制定齐墩果酸脂质体体内检测方法，研究其药动学过程。方法：①建立HPLC法测定齐墩果酸脂质体体内药物含量的方法。②通过对SD大鼠尾静脉给药，初步研究齐墩果酸的药动学过程。结果：在优化的色谱条件，在10～200.0μg/ml浓度范围内,齐墩果酸线性关系良好。大鼠尾静脉注射齐墩果酸脂质体其药动学行为符合二室开放模型，药动学参数为：分布半衰期(T1/2α）为11.300min;消除半衰期(T1/2β）为134.170min；AUC为104552.060ug·min·mL-1。结论：该实验研究齐墩果酸脂质体动力学过程，为开发齐墩果酸脂质体提供参考。为进一步研究其在肝炎治疗中的应用提供了基础。

关键词：齐墩果酸脂质体；HPLC；药动学

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0429-02

pharmacokineticprocessStudyon

oleanolicacidliposome

Abstract

Objective:Todevelopdetectingmethodsandstudyonpharmacokineticprocessof

oleanolicacidliposome.Methods:①EstablishingthemethodofHPLCtoexaminethedrugcontentthatcompriseoleanolicacidliposomeinexteriorandinterior.②TostudyoleanolicacidliposomepharmacokineticprocessbygivingoleanolicacidliposometoSDrats.Results:TherewasanexcellentlinearcorrelationWithintherangeof10～200.0μg/ml,Thepharmacokineticresultrevealedthatitwasadouble-departmentmodel.TailveininjectionofSDratspharmacokineticparameter:t1/2(α)was11.300min;t1/2(β)was134.170min;AUCwas104552.060ug·min·mL-1.Conclusion:Thisstudyfocusedonkineticpropertiesofoleanolicacidliposome,whichwillprovidetheoraticalsupportforclinicalre-searches,itisfeasibletoemployliposomeasthedrugcarrierofoleanolicacid.Itwillprovidthebasisforthefurtherstudytheapplicationofthetreatmentforhepatitis.

Keywords:oleanolicacidliposome;HPLC;Pharmacokinetic

齐墩果酸是五环三萜类化合物，以游离或结合成苷的形式广泛分布于青叶胆、女贞子等药用植物中[1]。齐墩果酸具有消炎、增强免疫、抑制血小板聚集、降血脂等作用，目前临床上主要用来治疗急性黄疸型肝炎和慢性肝炎，具有毒副作用低等优点[2－4]目前，市售齐墩果酸制剂剂型主要是片剂，不易溶解于水，溶出速度慢，吸收不好，生物利用度低[5]。为改善其生物利用度，本课题组前期成功将其制成脂质体制剂[6]。本课题拟研究其体内过程及生物利用度，为今后药物开发提供基础数据和质量控制标准。

材料与方法

1．实验材料

1.1试验动物

S.D大鼠（SPF级；新疆医科大学实验动物中心提供；动物合格证：XK（新）2006-0068；体重300～350g；雄性）。

1.2试验药品与试剂

齐墩果酸脂质体：本课题组自制

齐墩果酸对照品：中国药品生物制品检定所（0709-200403）（规格：HPLC≥98%）

甲醇：美国天地公司（色谱纯）

乙腈：美国天地公司（色谱纯）

1.3实验仪器

HP-1100高效液相色谱仪，HP-1100工作站，EclipseXDB-C18色谱柱（美国惠普公司）；UV监测器。

LG10-24A离心机（北京医用离心机厂）；WH-801涡旋混合器（上海环球物化仪器厂）

2．方法与内容

2.1齐墩果酸脂质体测定方法的建立

2.1.1色谱条件

色谱柱：ZORBAXEclipseXDB-C18（4.6×150mm，5μm）；流动相：乙腈︰水＝90︰10；流速：0.8ml/min；紫外检测波长：215nm；柱温：40℃；进样20μl。

2.1.2血浆样品预处理

精密量取血浆样品0.15ml，置离心管中，加甲醇1.0ml，涡旋5min，离心10min（3000r/min），移取上清液置离心管中，于40℃水浴挥干，残余物中精密加入甲醇0.1ml，离心10min（5000r/min），进样20μl。

2.1.3方法专属性考察

以空白血浆、对照品和样品血浆按“2.1.2”项下操作，同时进行HPLC分析，观察其色谱行为。见图1

以齐墩果酸对照品和样品血浆同时进行HPLC分析，结果保留时间都相同，证明在血浆中测得的是齐墩果酸原形药物，且空白血浆无干扰。理论塔板数按齐墩果酸峰计算应不低于3000。

2.1.4齐墩果酸血浆标准曲线的绘制

精密量取空白血浆0.15ml，加入齐墩果酸系列标准溶液，使浓度分别为：10、25、50、75、100、150、200μg/ml。按“2.1.2”项下操作测定，以进样量对峰面积回归，得标准曲线为：

Y=-12.8015+15.3501X（r=0.9996）

进样量在10μg/ml～200.0μg/ml范围内，呈良好的线性关系。

方法的最低最低定量限为20ng。

2.1.5回收率实验

取齐墩果酸标准溶液按2.1.4项配制低、中、高3种浓度（15、75、100μg/ml）的血浆样品，每一浓度5个样品,按“2.1.2”项下，10μl进样测定，另取相同进样量的齐墩果酸标准溶液直接进行测定，按峰面积计算，得绝对回收率。3个质量浓度的方法回收率分别为85.1％、80.01％、90.91％，方法回收率大于80％且误差较低，说明本实验选用的方法较合理。

2.1.6精密度试验

取齐墩果酸标准溶液按2.1.4项配制低、中、高3种浓度（15、75、100μg/ml）的血浆样品，按“2.1.2”项下操作，连续测定3d，并做随行标准曲线，计算日内(n=5)相对标准差（RSD）分别为1.9％、2.4％、2.6％，日间(n=15)相对标准差（RSD）分别为3.5％、4.1％、3.7％，由数据可以看出日内和日间精密度误差较低，说明齐墩果酸对本实验中选用的处理方法较稳定。

2.2齐墩果酸脂质体大鼠给药的药物动力学与生物利用度研究

2.2.1齐墩果酸脂质体尾静脉注射给药

健康SD大鼠5只，实验前禁食12h，自由饮水，分别取0.3ml空白血浆后，以100mg/kg的剂量尾静脉给药，于给药后0.03、0.25、0.5、1、2、4小时尾静脉取血0.3ml，离心（3000r/min）10min后各取血浆0.15ml，-20℃保存待测。按“2.1.2”项下操作，测定齐墩果酸含量。

2.2.2数据处理方法

将各血药浓度－时间数据用中国药学会数学药理专业委员会编写的3P87实用药代动力学程序进行拟和，求得主要药物动力学参数。

3结果和讨论

3.1大鼠尾静脉注射齐墩果酸脂质体后的血药浓度及药动血参数结果见表1、2。

3.2讨论

本研究首次以齐墩果酸脂质体为对象,探讨其在大鼠体内的代谢过程。研究表明该方法线性关系良好,方法回收率、日内精密度、日间精密度均较高。

大鼠尾静脉注射100mg/kg齐墩果酸脂质体，其药动学行为符合二室开放模型，分布相生物半衰期t1/2（α）为11.300min，提示齐墩果酸脂质体自中央室向周边室分布迅速；消除相生物半衰期t1/2（β）为134.170min，提示齐墩果酸脂质体在体内消除较慢。中央室分布容积Vc为0.065L/kg，而大鼠平均血容量为0.074L/kg，由此可知药物主要分布于中央室，而在周边室分布很少。

参考文献

[1]罗云敬,刘海涛,李天剑,等.头孢菌素类抗生素脂质体的包封率测定与渗漏研究[J].中国生化药物杂志,1999,20(1):4-6

[2]杨焕,刘世喜,梁传余,等.阳离子脂质体介导IL22基因治疗SCCⅧ移植瘤的初步研究[J].四川大学学报(医学版),2003,34(1):9-11

[3]吕万良,齐宪荣,孙华东,等.阿霉素隐性脂质体的研制及其在小鼠体内的组织分布[J].中国药学杂志,1999,34(5):31-34

[4]YanagieH,TomitaT,KobayashiH,etal.Inhibitionofhumanpancreaticcancergrowthinnudemicebyboronneutroncapturetherapy[J].BrJCancer,1997,75(5):6601

[5]翟光喜,王唯红,赵焰,等.低分子肝素柔性纳米脂质体的研究[J].山东大学学报(医学版),2002,40(3)240-242

[6]来海中，马龙齐墩果酸脂质体的制备研究[J]新疆医科大学学报,2007,30(6):581-583