采供血机构ELISA试验复检再检结果分析

采供血机构ELISA试验复检再检结果分析

李荣

李荣（广西玉林市中心血站537000）

【摘要】目的：通过对ELISA试验复检再检结果的分析，了解ELISA试验假阳性产生的原因，提高实验室检测水平。方法：对2009年度本站ELISA试验复检再检结果进行回顾性分析。结果：4项传染性指标复检与再检阳性符合率为6.81%，抗-HCV和抗-TP再检阳性符合率明显高于HBsAg和抗-HIV（P<0.01）；复检假阳性率为2.93%。结论：应进一步加强实验室规范化管理，严格遵守实验操作规程，尽量避免因标本、试剂、仪器、操作等因素的影响；尽量使用自动仪器，少用或不用手工操作，减少人为误差，确保试验结果准确性。

【关键词】血液；ELISA试验；复检；再检

【中图分类号】R446.6【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2011）02-0306-01

目前采供血机构通常采用固相酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血液中的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP，该方法操作简便、快捷，适合大批量标本的检测，但其影响因素较多、敏感性高，如果实验操作不当，将影响试验结果。随着ELISA自动化检测的应用，手工实验相对减少，影响ELISA试验的因素也随之减少。现对本站实验室2009年ELISA试验复检再检结果进行回顾分析，报告如下。

1材料与方法

1.1标本来源:本站2009年度无偿献血标本47200人份。

1.2试剂与仪器:HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP试剂购自北京万泰、夏门新创、北京金豪、法国BIORAD公司。所有试剂均为卫生部批准的检测试剂盒，经批批检合格，使用前经本站确认符合要求，且在有效期内使用。FreedomEVO全自动加样仪（瑞士TECAN）、ML-STAR全自动加样仪和FAME全自动酶免分析仪（瑞士HAMILTON）；恒温水浴箱（上海跃进）；洗板机（瑞士TECAN）；340RT酶标仪（澳斯邦）；现代血站标准管理系统（河北唐山）。所用仪器经生产厂家或技术监督部门校验合格并经本站确认。

1.3方法:严格按照各厂家试剂使用说明书和国家有关规定[1]进行操作。根据现代血站标准管理系统实验规则，采血后两次检测称为复检，若其中一种试剂呈阳性反应/可疑，或者怀疑是拖带等污染所致的两种试剂均呈阳性反应的标本用原试剂做双孔重验叫复检再检/再检。结果判定：当两种试剂检测结果一致时，直接按标准判定结果；再检两孔或一孔呈阳性反应/可疑均判为阳性，如果两孔均为阴性反应则报告阴性。统计数据来自现代血站标准管理系统。

1.4统计学处理:采用x2检验。

2结果

1483例4项传染性指标ELISA复检为阳性反应标本中，101例再检为阳性，复检与再检阳性符合率为6.81%，复检假阳性率为2.93%（1382/47200）。其中HBsAg再检356例，阳性16例，阳性符合率449%；抗-HCV再检294例，阳性24例，阳性符合率8.16%；抗-HIV再检546例，阳性30例，阳性符合率5.49%；和抗-TP再检325例，阳性31例，阳性符合率9.54%。结果显示抗-HCV和抗-TP再检阳性符合率明显高于HBsAg和抗-HIV（P﹤0.01）。换言之，ELISA检测HBsAg、抗-HIV比抗-HCV、抗-TP更容易出现假阳性。

3讨论

引起ELISA试验假阳性的原因很多，最主要的原因是操作不当所致，笔者发现某些检测人员不管其做的是哪个项目检测，由于其加样（特别是加底物）操作不规范，出现假阳性最多的总是他；此外还有标本、仪器、试剂等因素。

解决办法：(1)ELISA试验本身有一定的局限性，难免会出现假阳性，所以应选择质量好的检测试剂，发现试剂变质不用，检测前将试剂置室温下平衡至少30分钟。(2)标本充分离心分离，避免红细胞、纤维蛋白等非特异性物质的干扰。(3)不使用严重溶血、细菌污染和抗凝不完全或凝集不全的标本；加样过程中避免加入红细胞和纤维蛋白。(4)手工操作加样不可太快，避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡，及时更换一次性吸液头；使用全自动加样器应做好仪器的维护保养，避免加样针挂珠；适当调整仪器参数使针头洗涤充分，如加大冲洗量、将加样本的后弃量减少，可降低加样针中残留标本量；最好使用一次性加样针避免拖带污染。(5)严格按说明书要求进行操作，保证充足的洗板次数、浸泡时间和合适的洗液浓度。(6)做好仪器的维护保养，防止洗板机（站）针孔堵塞；洗板过程注意观察，保证洗液充满微板孔并吸液干净。(7)手工操作时酶标试剂和底物避免碰到微孔边缘；洗板后注意扣板的方式方法（选择干净、无或少尘的吸水材料轻轻拍扣），扣板干净避免残留液体并防止外来碎屑进入微板孔内。(8)显色剂应在临用前配制，试剂槽和吸液头要干净，尤其不能污染酶；显色过程控制好温度和时间。最后值得注意的是，不能单纯依靠酶标仪判读结果，应结合肉眼复核和经验的判读。

假阳性的产生不但造成试剂的浪费、增加工作量，而且会影响到临床供血，应尽量避免。

高度的工作责任心、熟练的操作技能是ELISA手工检测的基础。为保证检验结果的准确性，应加强质量管理和人员培训，并严格执行各项操作规程。如今全自动酶免分析系统在采供血机构已日益普及，应尽量使用自动仪器，少用或不用手工操作，减少人为误差。

参考文献

[1]中华人民共和国国家标准《献者健康检查要求》,GB18467-2001