HPLC外标法测定R-α-苯乙胺的含量

HPLC外标法测定R-α-苯乙胺的含量

李玥

李玥

（天津中医药大学天津300451）

【摘要】目的：建立一种有效测定R-α-苯乙胺的含量的高效液相色谱法。方法：采用氰基柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为缓冲盐溶液（0.15%三氟乙酸水溶液：0.1%三乙胺水溶液55：15）：甲醇（85：15）；等度洗脱，柱温为35℃；检测波长为258nm；体积流量为1.0mL/min；进样量为5μL。结果：R-α-苯乙胺在0.7mg/ml～1.2mg/ml具有良好的线性关系（R=0.9999，n=6）。平均回收率为99.3%，RSD%=0.39，n=9；结论：本方法简便准确、重现性好，精密度高，可以用于测定R-α-苯乙胺的含量。

【关键词】R-α-苯乙胺；含量测定；HPLC

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）11-0310-02

R-α-苯乙胺是最为常用的手性拆分剂之一，是制备手性化合物的重要原料。广泛应用在药物、食品、农药、材料、饲料等领域，但笔者在国内外文献及中国、日本、美国和欧洲药典均没有发现其含量测定方法，对其质量缺乏有效控制，故本文开发出一种快速简便有效的含量测定方法，为R-α-苯乙胺的质量控制提供参考。

1.仪器与材料

Agilent1260高效液相色谱仪系统，包括1260泵、1260进样控制器、G4212B二极管阵列检测器、AgilentChemStation工作站；CP225D电子天平（赛多利斯公司）；Elix10纯水系统（美国Millipore公司）；R-α-苯乙胺对照品（美国sigma公司，批号128K7135V）；R-α-苯乙胺（金坛市华阳科技有限公司，批号20130601）；甲醇（色谱纯，美国MREDA公司）；三乙胺（色谱纯，美国MREDA公司）；三氟乙酸（色谱纯，美国MREDA公司）；超纯水（试验室自制）。

2.方法与结果

2.1色谱条件及溶液配制

2.1.1色谱条件色谱柱为氰基柱（月旭XB-CN250mm×4.6mm，5μm）；流动相为缓冲盐溶液（0.15%三氟乙酸水溶液：0.1%三乙胺水溶液55：15）：甲醇（85：15）等度洗脱，柱温为35℃；检测波长为258nm；体积流量为1.0mL/min。

2.1.2溶液配制

空白溶液：流动相。

供试品溶液：取R-α-苯乙胺1.0g，精密称定，置于10ml量瓶中，使用流动相稀释至刻度，摇匀，再量取1.0ml，置于100ml量瓶中，使用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液：取R-α-苯乙胺对照品1.0g，精密称定，置于10ml量瓶中，使用流动相稀释至刻度，摇匀，再量取1.0ml，置于100ml量瓶中，使用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2专属性试验

2.2.1空白试验

取流动相进样5μL，结果未检测到峰，无干扰。

2.2.2波长确定及主峰纯度试验

取对照品溶液进样5μL，通过二极管阵列检测器进行光谱扫描，发现R-α-苯乙胺在258nm处有最大吸收波长。通过主峰纯度检测，纯度因子为999.265，在阈值限值内，说明主峰纯度符合规定，专属性良好。

2.3线性关系试验

取R-α-苯乙胺对照品1.0g，精密称定，置于10ml量瓶中，使用流动相稀释至刻度，摇匀，再分别量取1.2ml、1.1ml、1.0ml、0.9ml、0.8ml和0.7ml分别置于100ml量瓶中，使用流动相稀释至刻度，摇匀，即得线性120%、110%、100%、90%、80%和70%溶液，进样5μL，测定峰面积，以峰面积A对浓度C进行线性回归，A=756755C+2384，R=0.9999，说明R-α-苯乙胺在0.7mg/ml～1.2mg/ml具有良好的线性关系。

2.4检测限与定量限试验

将线性100%进行逐级稀释，分别以信噪比(S/N)3和10确定R-α-苯乙胺的检测线和定量限，结果表明：R-α-苯乙胺的检测限为15ng，定量限为50ng。

2.5进样精密度试验

将线性100%进样6次。各杂质样品的精密度良好，峰面积RSD%为0.20%。

2.6重复性试验

取R-α-苯乙胺1.0g6份，精密称定，置于10ml量瓶中，使用流动相稀释至刻度，摇匀，再量取1.0ml，置于100ml量瓶中，使用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。结果6次测定R-α-苯乙胺含量的平均值为99.6%，RSD%=0.29%，说明重复性良好。

2.7中间精密度试验

更换不同试验人员在另一台仪器上重复性试验。结果12次测定含量的平均值为99.7%，RSD%=0.23%，说明中间精密度良好。

2.8加样回收率试验

取R-α-苯乙胺0.50g9份精密称定，置于10ml量瓶中，取其中3份分别加入0.30gR-α-苯乙胺对照品，取其中3份分别加入0.50gR-α-苯乙胺对照品，取其中3份分别加入0.70gR-α-苯乙胺对照品，分别使用流动相稀释至刻度，摇匀，再分别量取1.0ml，置于100ml量瓶中，使用流动相稀释至刻度，摇匀，即得加样回收率实验80%、100%和120%各3份样品，分别进样5μL，测定峰面积，计算平均回收率为99.3%，RSD为0.39%。

2.9稳定性试验

取精密度试验项下的样品在0、1、2、4、6和8小时进样，结果峰面积在6小时时变化值为-1.8%，说明样品在6小时内稳定。

3.讨论

根据R-α-苯乙胺的结构可知含有一个胺基，与色谱柱的硅烷基存在一定的吸附，使R-α-苯乙胺的色谱峰出现严重拖尾，甚至呈现三角峰，需要加入三乙胺竞争抑制R-α-苯乙胺的胺基与色谱柱硅烷基的吸附，减少拖尾，通过0.15%的三氟乙酸水溶液和0.1%的三乙胺水溶液和甲醇三相进行摸索，不断调整之间的比例，最终得到理想的峰型。在色谱柱的选择上通过对比C18柱、氨基柱和氰基柱，结果氰基柱效果最好。在紫外吸收图谱扫描时应使用HPLC-DAD进行扫描，可以有效避免杂质干扰，得到更为准确的图谱。

【参考文献】

[1]中华人民共和国药典委员会.中国药典(二部)[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社,附录29-31.

[2]中华人民共和国药典委员会.中国药典(二部)[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社,附录194-195.