降脂胶囊质量标准研究

降脂胶囊质量标准研究

祁红刘传统

湖南省石门县人民医院415300

摘要：目的：制定降脂胶囊质量标准。方法：采用薄层色谱法鉴别枸杞子、山楂、何首乌，高效液相色谱法测定葛根素的含量，色谱柱：大连依利特HypersilODS2（150mm×4.6mm，5μm），流动相分别为甲醇-水（21：79）流速：1ml/min；检测波长：250nm；柱温：35℃.结果：TLC色谱能明显检出枸杞子、山楂、何首乌，葛根素、在0.206μg～0.618μg（r＝0.9999）范围内呈现良好线性关系，葛根素的平均回收率为98.84％，RSD=0.97%

结论：本方法简便，准确，重现性好，可供本品质量控制。

关键词：降脂胶囊；葛根素；齐墩果酸；熊果酸；HPLC；TLC

降脂胶囊由枸杞、熟地、何首乌、桑寄生、黑芝麻、葛根、泽泻、山楂等8味中药组成，具有激浊扬清滋阴之作用，对高血脂等有较好疗效。为控制产品质量，确保临床疗效，本文建立了枸杞子、何首乌、山楂的薄层色谱鉴别，并采用高效液相色谱法对主要药味葛根的主要成分葛根素的含量进行含量测定。

1.仪器、试剂与样品

1.1仪器

岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器，CLASS-VP色谱工作站。MeterAE240电子天平。

1.2试药

硅胶G，青岛海洋化工厂，甲醇为色谱纯，其他均为分析纯。葛根素对照品（中国药品生物制品检定研究院，批号：0752-200108，供含量测定用用），枸杞对照药材（中国药品生物制品检定研究院，批号：121072-201007，供鉴别用）、何首乌对照药材（中国药品生物制品检定研究院，批号：0934-200106，供鉴别用）。降脂胶囊为本院生产，批号：121011、121028、121113。

2.方法与结果

2.1薄层色谱鉴别

2.1.1枸杞[1]

取本品10g，加水100ml煎煮15分钟，滤过，滤液加乙酸乙酯提取2次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，加水40ml，煎煮15分钟，放冷，滤过，滤液加乙酸乙酯20ml振摇提取，取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液。取缺枸杞的阴性供试品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯－甲酸（3∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照液则无。见图1。

2.1.2山楂[1]

取本品10g，加乙醇60ml，置水浴上加热回流10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，加热使溶解，加正丁醇15ml振摇提取，分取正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，滤过，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。取缺山楂的阴性供试品，同法制成阴性对照溶液.照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。，阴性对照液则无。见图2。

2.2葛根素的含量测定[1]

2.2.1对照品的制备

精密称取葛根素对照品适量，加甲醇制成浓度41.2μg/ml的对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备

取样品约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性对照溶液的制备

按处方比例称取除葛根的其余药味，按照降脂胶囊的制备工艺，制备不含葛根的阴性样品，按2.2.2项下方法操作，制成缺葛根的阴性对照溶液。

2.2.4色谱条件

色谱柱：大连依利特HypersilODS2（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（21：79）；流速：1ml/min；柱温：35℃；检测波长：250nm；理论塔板数按葛根素计算应不低于3000。

2.2.5线性关系考察

精密吸取葛根素对照品（41.2μg/ml）溶液5，8，10，12，15μl，按上述葛根素色谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标，葛根素进样量为横坐标，进行线性回归。计算得回归方程：

Y＝4591251.255X+722.0828，r＝0.9999（n=5），结果表明葛根素在0.206μg～0.618μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.6精密度试验

精密吸取葛根素对照品溶液（41.2μg/ml）10μl，按上述色谱条件测定连续进样5次，求得葛根素平均峰面积的RSD=0.53%。

2.2.7重复性试验

精密称取降脂胶囊（批号：121011）内容物6份，按2.2.2项下供试品制备方法制备，照上述色谱条件进样10μl，记录峰面积。经计算葛根素平均含量为11.83mg/g（RSD=0.98%）。

2.2.8空白试验

分别取葛根素对照溶液、样品溶液以及阴性样品溶液，注入液相色谱仪，进行测定，结果缺葛根素的阴性样品溶液在葛根素对照品色谱峰相同保留时间处未显色谱峰，表明：阴性样品没有干扰（见图4）。

见图4。

2.2.9稳定性试验

精密吸取重复性试验样品，照上述色谱条件进样10μl，分别在0，2，4，6，8，12h测定，共进样6次，记录峰面积，结果表明葛根素RSD=0.45%，表明供试品溶液在12h内基本稳定。

2.2.10加样回收率试验

精密称取已知含量的供试品（批号：121011），精密加入一定量葛根素对照品，按葛根素供试品溶液制备方法制备，并按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表1

3.讨论

葛根素的含量测定试验参考文献[1]项下采用流动相乙腈－水（21：79），流动相甲醇－水（25：75），流动相甲醇-水-磷酸（280：720：0.15），结果葛根素采用流动相乙腈－水（21：79），可以基线分离不受其他组分干扰，分离效果好，准确度高。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S]（一部）.中国医药科技出版社，2010：956，469，954，609，493

作者简介：祁红，女，出生年月：1975.6大学本科，副主任药师，工作单位：湖南省石门县人民医院。