甘草浸膏大鼠体内药代动力学研究

甘草浸膏大鼠体内药代动力学研究

樊越澜

樊越澜（内蒙古包头市包钢第三职工医院药械科内蒙古包头014010）

【中图分类号】R969.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）28-0156-02

【摘要】目的考察甘草浸膏在大鼠体内药代动力学。方法采用高效液相-紫外色谱法建立了甘草浸膏体内测定方法，并测定了大鼠血浆中甘草次酸的含量。结果所用分析方法符合有关规范要求，可用于甘草次酸的体内药代动力学研究；数据用DAS10药动学软件拟和,大鼠药-时曲线符合一室模型；结论甘草浸膏灌胃给药代谢、消除较慢（T1/2＞3d），维持有效血药浓度的时间较长。

【关键词】甘草浸膏大鼠药代动力学

甘草系豆科植物甘草(GlycyrrhizauraienxisFisch)的根及根状茎,性味甘平,具有补脾益气、止咳祛痰、清热解毒、缓急定痛、能调和诸药,是临床上最常用的中药之一。甘草的主要有效成分是甘草甜素(glycyrrhizin,GL),它在体内主要是以其代谢物甘草次酸(glycyrrhetinicacid,GA)的形式被吸收,分布到各个组织器官,最终以GA的形式排出体外[1]。所以本文体内分析测定的是甘草次酸的含量。

1仪器与试药

仪器

SoftaCom6000高效液相色谱仪（SoftaUV-6000紫外检测器，美国Softa公司）离心机（H-1650高速台式离心机长沙湘仪离心机仪器有限公司）；涡旋混合器（QL-901江苏海门市麒麟医用仪器厂）。

试药：甘草浸膏（天津中新药业第六中药厂），甘草次酸对照品（中国药品生物制品检定所，编号：110723-200612）肝素注射液（天津生物化学制药有限公司，产品批号：20080606），乙腈、甲醇（色谱纯），娃哈哈纯净水，其他试剂为分析纯。

2体内测定方法

2.1方法学考察

2.1.1色谱条件：色谱柱：依利特C18ODS柱（4.6nm×250nm,5um）;流动相：乙腈：水：冰乙酸（70：30：1V/V/V）流速：1.0ml·min-1;检测波长：220nm;进样量;20μl。

2.1.2血样预处理取100μl空白血浆，加300μl沉淀蛋白（5%的磷酸乙腈）,涡旋1min，与8000rmin-1离心10min,吸取上清液，N2气流吹干，再用100μl的甲醇复溶后，涡旋1min，8000rmin-1离心10min，取上清液注入HPLC分析测定。测得空白血清（1）、空白血清加标准品（2）、给药后大鼠血清样品（3）和标准品（4）色谱图,见图1

图1甘草次酸专属性

2.1.3血浆标准曲线制备精密称取甘草次酸对照品储备溶液，用甲醇稀释成0.22、0.44、0.88、2.2、4.4、8.8μg·ml-1系列浓度的甘草次酸对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液100μl，挥干甲醇，各加入100μl空白血浆，混合。按“2.2.1.2”项操作。以所得各浓度峰面积对相应的甘草次酸浓度进行线性回归C=16185A+496.8，r=0.9988。(n=6)。最低定量限(LOQ)为0.22μg·ml-1。实验结果表明血浆中甘草次酸在0.22-8.8μg·ml-1浓度范围内线性良好

2.1.4回收率试验按“2.2.1.2”项操作测定高、中、低三个浓度分别为(4.4、2.2、0.88μg·ml-1)的回收率，分别计算标准品的峰面积与标准品的标准溶液直接进样的峰面积的比计算标准品的回收率。结果平均值分别为88.49%、95.27%、84.11%，表明对照品的回收率均稳定在80%以上。

2.1.5精密度试验和检测限按“2.2.1.2”项操作测定高、中、低三个浓度(4.4、2.2、0.44μg·ml-1)的精密度（n=5），该方法日内精密度RSD值分别是5.15%、3.09%、4.29%，日间精密度分别是5.07%、9.22%、5.48%，本实验的日内和日间相对标准偏差RSD小于10%。

最低检测限当S/N≥3,经测定最低检测限为10ng·mL-1。

2.1.6血清中样品稳定性试验分别考察了在-20℃、室温及40℃环境中，24h内药物在血浆中的稳定性，结果RSD值均小于10%，表明所用分析方法符合有关规范要求，可用于甘草次酸的体内药代动力学研究。

2.2大鼠药代动力学实验

大鼠血浆样品的预处理与测定于大鼠眼眶底静脉丛取血,置于涂有肝素的试管中,6000rmin-1离心10min,分出空白血浆。取100μl血浆、300μl沉淀蛋白（5%的磷酸乙腈）,涡旋1min，与8000rmin-1离心10min,吸取上清液，N2气流吹干，再用100μl的甲醇复溶后，涡旋1min，8000rmin-1离心10min，取上清液注入HPLC分析测定。

实验动物：Wistar大鼠6只，禁食不禁水12h后，以剂量为1mg·kg-1灌胃甘草浸膏（甘草次酸的含量为4.12%），分别与0.08、0.17、0.33、0.50、0.90、1、1.5、3、6、10、12h取血0.5ml，按照“大鼠血浆样品的处理与测定”进行样品分析。所得数据用DAS10药动学软件拟和,结果表明,大鼠药-时曲线符合一室模型,权重系数(w=1)，甘草次酸在大鼠体内血药浓度-时间曲线见图2,药动学参数见表1。

图2甘草次酸在大鼠体内平均药时曲线

表1药物动力学参数

3讨论

3.1沉淀蛋白剂的选择

为了在测定过程中药物不会受到干扰，需用沉淀蛋白剂去除一些杂质，本实验选用了不同比例的甲醇、乙腈及磷酸和乙腈的混合物，实验过程中发现用磷酸和乙腈混合物能较好的去除杂质，同时药物的损失量最少。故最终选定5%的磷酸乙腈为沉淀蛋白剂。

3.2药代动力学参数

本实验对6只大鼠灌胃甘草浸膏，发现其体内分布符合一室模型。甘草浸膏灌胃给药代谢、消除较慢（T1/2＞3d），维持有效血药浓度的时间较长。

参考文献

[1].WangLL,HuangX,ZhangL.Pharmacokineticsofglycyrrhizin[J].ShijieHuarenXiaohuaZazhi(WorldChinJDigestol),2000;8(5):567-569.