简介:摘要目的探讨原肌球蛋白3(TPM3)在缺氧/复氧(H/R)刺激的心肌细胞焦亡和成纤维细胞活化中的作用。方法利用H/R方法处理大鼠心肌细胞(H9c2细胞),体外模拟心肌缺血/再灌注(I/R)损伤,用细胞计数试剂盒8(CCK-8)评估细胞增殖活性,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测TPM3表达,确定最佳缺氧时间。构建TPM3-shRNA慢病毒稳定表达的H9c2细胞株,并给予H/R处理(缺氧3 h、复氧4 h),RT-qPCR检测TPM3表达,Western blotting检测TPM3、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、Gasdermin家族蛋白D的N末端产物(GSDMD-N)表达,免疫荧光检测caspase-1表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素(IL-1β、IL-18)含量,阐明干扰TPM3对心肌细胞焦亡的影响。使用上述细胞上清液孵育大鼠心肌成纤维细胞,Western Blotting检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2)的表达,明确H/R条件下TPM3干扰的心肌细胞对成纤维细胞活化的影响。结果与对照组比较,H/R处理4 h可显著降低H9c2细胞存活率〔(25.81±1.90)%比(99.40±5.54)%,P<0.01〕,促进TPM3 mRNA和蛋白表达〔TPM3/GAPDH(2-ΔΔCt):3.87±0.50比1,TPM3/β-Tubulin:0.45±0.05比0.14±0.01,均P<0.01〕,并同时促进焦亡相关蛋白caspase-1、NLRP3、GSDMD-N的表达以及细胞因子IL-1β、IL-18的释放〔cleaved caspase-1/caspase-1:0.89±0.04比0.42±0.03,NLRP3/β-Tubulin:0.39±0.03比0.13±0.02,GSDMD-N/β-Tubulin:0.69±0.05比0.21±0.02,IL-1β(μg/L):13.84±1.89比4.31±0.33,IL-18(μg/L):17.56±1.94比5.36±0.63,均P<0.01〕。然而,与H/R组比较,干扰TPM3则明显减弱了H/R对这些蛋白和细胞因子的促进效应〔cleaved caspase-1/caspase-1:0.57±0.05比0.89±0.04,NLRP3/β-Tubulin:0.25±0.04比0.39±0.03,GSDMD-N/β-Tubulin:0.27±0.03比0.69±0.05,IL-1β(μg/L):8.56±1.22比13.84±1.89,IL-18(μg/L):9.34±1.04比17.56±1.94,均P<0.01〕。此外,H/R处理的心肌细胞上清液可显著增加大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白、TIMP2及MMP-2的表达(Ⅰ型胶原蛋白/β-Tubulin:0.62±0.05比0.09±0.01,Ⅲ型胶原蛋白/β-Tubulin:0.44±0.03比0.08±0.00,TIMP2/β-Tubulin:0.73±0.04比0.20±0.03,TIMP2/β-Tubulin:0.74±0.04比0.17±0.01,均P<0.01)。然而,与H/R组比较,干扰TPM3则削弱了这些促进效应(Ⅰ型胶原蛋白/β-Tubulin:0.18±0.01比0.62±0.05,Ⅲ型胶原蛋白/β-Tubulin:0.21±0.03比0.44±0.03,TIMP2/β-Tubulin:0.37±0.03比0.73±0.04,TIMP2/β-Tubulin:0.45±0.03比0.74±0.04,均P<0.01)。结论靶向干扰TPM3可以减弱H/R诱导的心肌细胞焦亡以及心肌细胞对成纤维细胞的活化,提示TPM3可作为心肌I/R损伤的潜在靶点。
简介:摘要目的探讨降钙素原(PCT)与C反应蛋白(CRP)联合检测在局部细菌感染和脓毒血症诊断中的临床应用价值。方法分别对来自医院重症监护室的40例脓毒血症患者和来自医院住院病房的50例局部细菌感患者进行降钙素原和C-反应蛋白检测;同时收集20例体检中心健康人群标本作为对照组进行检测。结果40例全身细菌性感染患者降钙素原和C反应蛋白检测结果均显著高于20例健康对照组标本检测结果差异显著(P<0.01),有统计学意义。50例局细菌感染患者降钙素原检测结果与健康对照组降钙素原检测结果相比无显著差异(P>0.05),无统计学意义;50例局部细菌感染患者C反应蛋白检测结果显著高于健康对照组C反应蛋白检测结果(P<0.01),差异显著,有统计学意义。结论降钙素原与C反应蛋白联合检测有助于临床医师诊断患者是否存在局部细菌感染或全身性细菌感染,为临床合理使用抗生素提供依据。
简介:摘要高乳酸血症常见于危重症患者,病因复杂。根据高乳酸血症是否为严重缺氧导致,分为A型(由严重缺氧引起)和B型高乳酸血症(非严重缺氧引起),根据乳酸的光学同分异构体类型可分为左旋乳酸增高和右旋乳酸增高。本文重点介绍高乳酸血症的病因和诊断思路。
简介:摘要随着人们生活水平的提高、饮食结构的改变,高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)的患病率呈逐年上升趋势,成为健康生活的新危险因素。方法对被确诊为高尿酸血症的患者,由健康师和内分泌等专科医生共同为该病人制定干预计划、明确血尿酸控制目标,通过调整饮食结构、规律有氧运动、戒烟限酒、积极治疗与血尿酸升高相关的代谢性疾病,结果提高患者防病治病的意识,促进患者养成良好生活习惯,达到控制血尿酸水平,减少痛风发作,结论“不得病,少得病,晚得病,不复发”的健康目标,提高生活质量和生命质量。
简介:【摘要】随着人们生活水平的提高和饮食结构的改变,高尿酸血症的发生率呈逐年上升趋势,且呈年轻化。如果不进行生活方式的千预和有效的健康教育,会导致患高尿酸血症的人数越来越多,血尿酸也会持续增高,轻者痛风,重者会发生肾功能衰竭。这其中饮酒和高蛋白食物地过度摄取是导致高尿酸血症的主因。
简介:【摘要】随着人们生活水平的提高和饮食结构的改变,高尿酸血症的发生率呈逐年上升趋势,且呈年轻化。如果不进行生活方式的千预和有效的健康教育,会导致患高尿酸血症的人数越来越多,血尿酸也会持续增高,轻者痛风,重者会发生肾功能衰竭。这其中饮酒和高蛋白食物地过度摄取是导致高尿酸血症的主因。
简介:摘要目的分析甲基丙二酸血症(methylmalonicacidemia,,MMA)并同型半胱氨酸血症患者的临床、辅助检查及基因检测特点。方法对诊断MMA并同型半胱氨酸血症23例患者的临床资料进行回顾性分析,探讨此类型患者的主要表现及其基因特点。结果MMA并同型半胱氨酸血症23例患者多于1个月~1岁发病,主要表现为哺乳差18例,运动智力发育落后18例、惊厥8例、血液系统异常14例,头颅影像的异常改变(其中18例患者行头颅影像检查,均有脑损害改变)。基因检测结果均存在MMACHC基因突变,1例仅检测到多态性,2例各检测到1个突变,20例检测到2个突变,其中5例为纯合突变,15例为杂合突变,共检测出种13种突变,主要包括c.609G>A突变16次(突变频率34.7%)、c.658-660delAAG突变7次等。结论MMA合并同型半胱氨酸血症临床表现复杂,以神经系统脑损伤最为显著。基因分析提示MMA合并同型半胱氨酸血症患儿的部分基因突变谱,证实了c.609G>A为热点突变,此为今后患儿基因突变检测及遗传咨询奠定基础。