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  • 简介:作为一个模式植物,烟草在植物分子生物学研究中发挥着重要的作用。总RNA的提取质量,对于基因表达、基因克隆、cDNA文库建立、RNA原位杂交以及转基因材料鉴定等分子生物学基础研究至关重要。尤其在进行基因克隆及cDNA文库时,只有高质量的RNA,才能保证cDNA第一链合成的完整性。由于烟草中糖类、蛋白质及次生代谢物的含量较高,因此,在应用TRIzolRNA提取试剂盒进行烟草总RNA提取时,所提取的RNA产物中的蛋白质及多糖等杂质含量偏高。因此,针对这一问题,我们对TRIzol法进行了改进,并获得了高质量的烟草总RNA。经琼脂糖电泳检测,利用该方法提取的烟草总RNA,条带清晰、无拖尾现象,28S与18S的比例约为2:1。紫外吸收值的测定表明,所提取的烟草总RNA的A260/A280的值基本达到了1.9以上,说明所提取的RNA的质量较高,可广泛应用于基因的克隆及基因的表达研究。

  • 标签: 烟草 RNA 提取方法
  • 简介:摘要微小RNA-125b(miR-125b)近年来被证明与多种肿瘤疾病关系密切,如肺癌、消化系统肿瘤、血液系统肿瘤等。miR-125b在肿瘤疾病的发生发展中起关键性作用,检测miR-125b的表达量可以评估各种肿瘤疾病治疗方式的疗效,并能辅助诊断肿瘤。探索miR-125b在肿瘤疾病中的机制对肿瘤治疗具有重大意义。

  • 标签: 微RNAs 肿瘤 诊断 预后 miR-125b
  • 简介:摘要环状RNA是非编码RNA家族的成员,可以多种方式参与生物学功能,如细胞增殖、细胞周期、侵袭和转移等。近年来研究发现,环状RNA可以通过海绵吸附微小RNARNA结合蛋白参与转录后调控,从而影响肿瘤耐药过程中的DNA修复、凋亡、增殖、细胞转运,以及介导肿瘤耐药的细胞内酶,进而在肿瘤耐药中发挥重要调节作用。研究证实通过干扰环状RNA的表达,可以提高肿瘤对药物的敏感性,提示环状RNA可能为抗肿瘤药物耐药性的研究提供新的靶点。

  • 标签: 微RNAs 肿瘤 抗药性
  • 简介:目的:建立从红花组织中快速分离总RNA的方法,为进行反转录PCR(RT—PCR)、快速扩增cDNA末端(RACE)、蛋白质印迹法及其他分子生物学实验奠定基础。方法:采用改良Trizol法提取红花苞叶总RNA时,加入DNaseⅠ消化残留DNA,并加入RNase抑制剂,利用琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度法进行纯度和浓度检测。RT—PCR后,进行cDNA-序列相关扩增多态性(SRAP)分析。结果:抽提的RNA经电泳检测,可见28S、18S、5SRNA三条带,带的亮度强,且28S的宽度是18S的2倍左右。紫外吸光度D260/D280为1.8~2.0,D260/D230为2.0~2.3。总RNA产物进行cDNA-SRAP扩增,出现清晰的条带。结论:改良Trizol法所提取的RNA纯度高,质量好,完整性好,可成功进行cDNA-SRAP扩增。

  • 标签: 红花 RNA 提取法 TRIZOL法 逆转录聚合酶链反应
  • 简介:在不到10年里自从它的开始,RNA干扰(RNAi)在生物医学的科学上有非凡的影响。RNAi被表明了到影响众多生物并且疾病小径。RNAi技术的开发和采纳是丰富的从基本loss-of-function工具,到药品的目标确认的染色体宽的屏蔽图书馆和治疗学的开发。然而,RNAiis的分子的机制理解远非完全。这简短评论的目的是在阐明加亮关键成就导致RNA的silencing建筑群并且到的生化学机制为这块地构画出主要挑战。

  • 标签: RNA诱导沉默复合物 生物化学机制 致活 RNA干扰 SIRNA
  • 简介:摘要HBV RNA在乙型肝炎病毒复制过程中具有重要作用,尤其是前基因组RNA(pg RNA)作为复制过程中病毒核心逆转录的模板,其特殊性被日益重视。分析近年来有关HBV RNA的临床研究,进一步探讨HBV RNA作为新的血清学标志物对临床乙型肝炎患者的指导意义。

  • 标签: 肝炎病毒,乙型 血清学标志物 乙型肝炎病毒RNA 前基因组RNA
  • 简介:摘要过去认为不存在的精子RNA,随着研究深入,目前发现了上千种的RNA种类,同时发现了精子RNA具有表观遗传功能,父系的表型可通过精子RNA影响后代的表型,另外还对精子发生、获能以及早期胚胎发育等有一定作用,这些发现为研究男性不育,生殖辅助及遗传疾病提供了新的视角。

  • 标签: 精子 RNA 遗传 胚胎发育
  • 简介:IntheapplicationofRNAitechnology,itisanessentialsteptodesignsiRNAapplicabletotargetgene.Atpresent,therearemanyresearchesandconclusionsonsiRNAdesign.ThispaperaimstotheinfluencesofmRNAsecondarystructureorsiRNAantisense-strandsecondarystructureonsiRNAsilenceefficiency.Thepaperalsodiscussestheproblemsandsetsoutfurtherinsightsintheresearch.

  • 标签: MRNA二级结构 SIRNA设计 RNA沉默 RNAI技术 靶基因 反义链
  • 简介:摘要环状RNA(circRNA)是一种新兴的内源性非编码RNA(ncRNA),同时也是竞争性内源RNA(ceRNA)家族中的成员,有研究发现circRNA广泛存在于生物体内,与微RNA(miRNA)相互作用,对肝脏疾病的发生、发展起重要作用。现就circRNA及其生物学功能、以及circRNA与肝脏疾病关系的研究进展进行综述,以期更好地阐述circRNA在肝脏疾病中的作用,更好地指导临床。

  • 标签: RNA 肝脏疾病 生物学功能 机制
  • 简介:自从1989年choo等首先建立了血清抗-HCV特异性检测方法以来,仅短短几年,HCV分子生物学的研究已有了长足的进展。经基因序列分析,根据毒株核苷酸序列的差异,可区分HCV的不同基因型。为了解哈尔滨地区的HCV基因型,我们对115份HCVRNA阳性血清聚合酶链反应产物进行酶切分析,兹将检测结果报告如下。

  • 标签: 哈尔滨地区 RNA基因 抗-HCV阳性 HCV基因型 基因序列分析 丙型肝炎
  • 简介:孕妇血浆中胎儿游离DNA与抗ss-DNA及抗ds-DNA抗体的相关性 ,  目的探讨孕妇血浆中胎儿游离DNA及抗DNA抗体与子痫前期的相关性,各组孕妇血浆中胎儿游离DNA水平和抗ss-DNA及抗ds-DNA抗体水平比较(略)

  • 标签: 中胎儿 前期相关性 子痫前期
  • 简介:摘要:胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,尽管进行了手术联合同步放化疗的多模式治疗,但是胶质瘤患者的预后依然很差,因此,深入挖掘胶质瘤发生和进展的分子机制,并以此为基础开发新型靶向治疗药物显得尤为重要。LncRNA是指长度超过200个核苷酸的非编码RNA,序列上保守性差,功能上具有一定保守性[1]。根据lncRNA在基因组上的位置,可以分为如下五类:1、基因间区长链非编码(large intergenic lncRNA),2、内含子区长链非编码RNA(intronic transcript),3、正义链长链非编码RNA(sense lncRNA),4、反义链长链非编码RNA(antisense lncRNA),5、双向长链非编码RNA(bidirectional lncRNA)。LncRNA的功能机制主要包括五个方面:1、介导染色质重塑和组蛋白修饰,调控其下游基因的表达;2、通过碱基互补配对,与编码蛋白质的基因的转录本形成双链结构,干扰编码基因转录本的剪接或者形成内源性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA);3、与特定的蛋白质结合,调控该蛋白的活性或者组成核酸-蛋白质复合体;4、与特定蛋白质锚定后,改变该蛋白质的亚细胞定位;

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  • 简介:摘要目的探讨血清微RNA-187和微RNA-143在胆囊癌发生发展和诊断中的临床意义。方法选择胆囊癌患者的血清标本75例作为胆囊癌组,同期胆囊良性疾病血清标本75例和健康体检者血清标本45例,分别作为胆囊良性疾病组和健康对照组。采用实时定量(qRT)-PCR方法检测各组血清微RNA-187和微RNA-143表达与临床病理因素的关系及对胆囊癌细胞增殖和迁移的影响,和在胆囊癌诊断方面的效能。结果胆囊癌组的血清微RNA-187表达明显高于胆囊良性疾病组和健康对照组;胆囊良性疾病组明显高于健康对照组;手术治疗后微RNA-187表达较术前明显降低;胆囊癌血清微RNA-143表达明显低于胆囊良性疾病组和健康对照组;胆囊良性疾病组明显低于健康对照组;术后血清微RNA-143表达较术前明显升高(均P<0.05)。胆囊癌血清微RNA-187和微RNA-143表达与性别和年龄无明显相关性(P>0.05),与Nevin分期,TNM分期,分化程度和淋巴转移具有明显相关性(P<0.05)。体外实验证实,微RNA-187对胆囊癌细胞的增殖和迁移具有促进作用,而微RNA-143抑制胆囊癌细胞的增殖和迁移。微RNA-187和微RNA-143对胆囊癌的诊断效能明显优于癌抗原19-9和CA242(均P<0.05),联合检测能够进一步提高诊断胆囊癌的效能。结论微RNA-187和微RNA-143参与了胆囊癌的发生发展,联合检测血清微RNA-187和微RNA-143表达,对于诊断胆囊癌具有较高的诊断效能。

  • 标签: 胆囊肿瘤 微RNA-187 微RNA-143 诊断 实时定量-PCR
  • 简介:摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)胸腺生成素反义RNA 1(TMPO-AS1)对食管癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法2016年6月至2019年12月,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测20例食管癌组织和癌旁组织中lncRNA TMPO-AS1和微小RNA(miR)-501-3p的水平,食管癌Eca109细胞分为lncRNA TMPO-AS1干扰组(转染si-NC和si-TMPO-AS1);miR-501-3p过表达组(转染miR-NC和miR-501-3p);lncRNA TMPO-AS1过表达组(转染pcDNA和pcDNA-TMPO-AS1);lncRNA TMPO-AS1和miR-501-3p共抑制组(转染si-TMPO-AS1+anti-miR-NC和si-TMPO-AS1+anti-miR-501-3p)。噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术和Transwell实验分别检测食管癌Eca109细胞增殖、凋亡率、细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测相关蛋白水平,双荧光素酶报告系统验证lncRNA TMPO-AS1与miR-501-3p的调控关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差进行分析。结果食管癌组织组中的lncRNA TMPO-AS1水平(2.64±0.26)高于癌旁组织(1.00±0.09,t=26.657,P<0.05),miR-501-3p水平(0.44±0.04)低于癌旁组织(1.00±0.07,t=31.063,P<0.05);干扰lncRNA TMPO-AS1的Eca109细胞24 h增殖(0.36±0.03)低于si-NC组(0.39±0.03,t=2.121,P<0.05),48 h增殖(0.45±0.04)低于si-NC组(0.75±0.07,t=11.163,P<0.05),72 h增殖(0.57±0.05)低于si-NC组(1.16±0.09,t=17.191,P<0.05),迁移细胞数[(54.14±5.65)个]低于si-NC组[(113.02±9.87)个,t=15.531,P<0.05],侵袭细胞数[(47.69±5.01)个]低于si-NC组[(96.32±9.88)个,t=13.169,P<0.05],细胞凋亡率[(22.15±2.22)%高于si-NC组[(6.98±0.69)%,t=19.576,P<0.05];过表达miR-501-3p的Eca109细胞48 h增殖(0.51±0.05)低于miR-NC组(0.77±0.07,t=9.067,P<0.05),72 h增殖(0.65±0.06)低于miR-NC组(1.15±0.09,t=13.867,P<0.05),迁移细胞数[(61.23±6.33)个]低于miR-NC组[(115.25±9.25)个,t=14.458,P<0.05],侵袭细胞数[(53.14±5.33)]低于miR-NC组[(98.32±8.47)个,t=13.543,P<0.05],细胞凋亡[(19.58±1.74)%]高于miR-NC组[(7.23±0.77)%,t=19.471,P<0.05],差异均有统计学意义。结论lncRNA TMPO-AS1通过靶向miR-501-3p促进食管癌细胞的恶性生物学行为,可被视为食管癌患者的潜在治疗靶标。

  • 标签: 食管癌 增殖 迁移 侵袭 凋亡
  • 简介:摘要目的探讨精神分裂症患者外周血微小RNA-16、微小RNA-124和微小RNA-195表达与认知功能和社会功能的相关性。方法选择台州市第二人民医院2016年1月至2018年12月收治的精神分裂症患者112例为观察组;另选择台州市第二人民医院2016年1月至2018年12月健康体检者93例作为对照组。采用实时定量荧光聚合酶链式反应法检测外周血微小RNA-16、微小RNA-124和微小RNA-195表达;采用中文版蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评价患者认知功能;采用住院精神病人社会功能评定量表(SSPI)评价患者社会功能。结果观察组外周血微小RNA-16(0.03±0.01)和微小RNA-195(0.08±0.03)表达低于对照组(0.12±0.02)和(0.27±0.06),而微小RNA-124(14.63±3.24)表达高于对照组(7.45±1.39),差异均有统计学意义(t=41.763、19.898、29.389,均P<0.05)。观察组MoCA量表评分[(22.17±3.45)分]低于对照组[(28.39±1.28)分],差异有统计学意义(t=16.465,P<0.05)。观察组SSPI量表评分[(26.58±5.16)分]低于对照组[(45.37±3.27)分],差异有统计学意义(t=30.405,P<0.05)。微小RNA-16和微小RNA-195与MoCA量表评分和SSPI量表评分呈线性正相关(MoCA量表评分:r=0.641、0.724,SSPI量表评分:r=0.801、0.657,均P<0.05),微小RNA-124与MoCA量表评分和SSPI量表评分呈线性负相关(r=-0.738、-0.769,均P<0.05)。结论精神分裂症患者外周血微小RNA-16和微小RNA-195表达降低而微小RNA-124表达升高,其中微小RNA-16和微小RNA-195表达与认知功能和社会功能呈正相关,而微小RNA-124与认知功能和社会功能呈负相关。

  • 标签: 精神分裂症 健康体检者 外周血 微小RNA-16 微小RNA-124 微小RNA-195 认知功能 社会功能 相关性
  • 简介:摘要保留比值受损肺功能(PRISm)是指一秒率(FEV1/FVC)正常但出现第一秒用力呼气容积(FEV1)降低的肺功能测定模式。PRISm在人群中普遍存在,但在目前的研究中被低估。欧美队列研究发现PRISm人群的慢阻肺发生风险、心血管相关死亡风险和全因死亡风险较肺功能正常人群显著增加,其可能是慢阻肺前期人群之一,因此早期发现和防治PRISm至关重要。本文就目前PRISm研究进展进行综述,以增加对PRISm的认识,更好地为PRISm人群提供综合全面的评估和管理。

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