简介：BACKGROUND:Mailuoning,aChineseherb,hasbeenwidelyusedinChinatotreatacuteischemicstroke,andthemajorcomponentexhibitsanti-oxidativeeffects.However,thepreciseanti-oxidationpathwayremainsuncertain.OBJECTIVE:TovalidatetheprotectiveeffectsofMailuoningonH2O2-inducedprimarycorticalneuroninjuryinembryonicmice.DESIGN,TIMEANDSETTING:ComparativeobservationandinvitroexperimentswereperformedattheJiangsuKeyLaboratoryforMolecularMedicinefromJanuary2008toSeptember2009.MATERIALS:Mailuoning(NanjingJinlingMedicalCompany,China),reactiveoxygenspecies(ROS)kit(BeyotimeBiotechnology,China),superoxidedismutase(SOD),Cu/ZnSODkit,malondialdehyde(MDA)kits(NanjingJiancheng,China),mitochondrialmembranepotential(GMS10013.1,GENMED,USA)andcatalaseactivityassaykit(BeyotimeBiotechnology,China)wereutilizedforthepresentstudy.METHODS:MouseembryoniccorticalneuronswereisolatedandculturedwithculturemediumcontainingH2O2(80μmol/L)and/orMailuoning(1.25μg/mL)for24hours.MAINOUTCOMEMEASURES:Neuronalviabilityanddeathweredetectedbymethylthiazolyltetrazdiumandflowcytometry;ROSproductionwasdeterminedbyflowcytometry;mitochondrialmembranepotentialwasdetectedusingfluorescentstaining;SODactivitywasdetectedusingamodifiednitrobluetetrazoliummethod;Cu/ZnSODandcatalaseactivitywasdetectedbyspectrophotometry;andMDAwasdeterminedusingthelipidperoxidationmethod.RESULTS:H2O2increasedROSproductionandMDAconcentration(P<0.05),anddecreasedmitochondrialmembranepotential,SOD,Cu/ZnSODandcatalaseactivity(P<0.05);thenumberofsurvivingneurons(P<0.05)wasalsoreduced.Mailuoningreversedthesechanges.CONCLUSION:MailuoningprotectsH2O2-inducedinjuryincorticalcellsbyinhibitingROSandMDA,increasingdepolarizationofmitochondrialmembrane,andenhancingSODandcatalaseactivity.

简介：苯妥英(PHT)为临床上最常用的第一线抗癫痫药,但个体间对PHT代谢呈现较大差异.目前证实细胞色素氧化酶P450(CYP)2C9/19是体内参与PHT羟化的主要代谢酶.人群CYP2C9/19遗传基因呈多态性,从而引起对PHT代谢个体间较大差异,部分人群对PHT呈强代谢(EM),另一部分人群呈弱代谢(PM),了解这些知识对临床用药十分重要.本文试对该方面内容进行综述.

简介：目的：评价高分辨率3D-FIESTA+c成像及图像处理技术显示脑神经及其病变的价值。方法采用3D-FIESTA+c对20例健康志愿者和20例临床疑是因血管等原因压迫相应脑神经具有临床症状的患者进行扫描及图像后处理。由2名神经放射学医师根据20名健康志愿者480支脑神经显示的清晰程度分为清晰、较清晰、不清晰3个等级，清晰和较清晰定义为显示，不清晰定义为未显示；临床病例中，脑神经与血管关系分为无接触、接触、压迫。结果12对脑神经显示率分别为：嗅神经84.3%，视神经100%，动眼神经100%，滑车神经43.8%，三叉神经100%，外展神经100%，面神经100%，前庭蜗神经100%，舌咽神经、迷走神经及副神经复合体100%，舌下神经47.1%。20例脑神经症状患者，16例确诊为脑神经与周围血管接触或压迫，且均被临床治疗证实。结论高分辨3D-FIESTA+c成像与图像后处理技术相结合可显示脑神经及其病变，能准确定位血管走向及其与脑神经的关系，为临床医生提供准确、全面的影像学资料。

简介：目的研究刺五加多糖（ASPS）对H2O2诱导的海马神经元凋亡的影响及其机制。方法采用H2O2诱导大鼠海马神经元凋亡。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记法检测细胞凋亡率、免疫组化法检测caspase-3蛋白的表达、逆转录PCR法检测caspase-3mRNA的表达。结果H2O2作用后,海马神经元凋亡率、caspase-3蛋白和mRNA表达水平均显著增高（P〈0.05）;给予ASPS干预后,均显著下降（P〈0.05）;而且,随ASPS剂量增加,作用效果显著增强（P〈0.05）。结论ASPS具有抑制氧化应激损伤诱导神经细胞凋亡作用,其机制与下调caspase-3mRNA的表达有关。

简介：BACKGROUND:Studieshavesuggestedthatfibronectinleucine-richtransmembraneprotein3(FLRT3)isrelatedtoinjuryandregenerationofthenervoussystem.However,theexpressionandbiologicalcharacteristicsoftheseproteinsremainpoorlyunderstood.OBJECTIVE:ToobtainFLRT3C-terminalgenefragments,toeffectivelyexpressandpurifythetargetproteins.DESIGN,TIMEANDSETTING:AnobservationalstudyofcellularandmolecularbiologywasperformedatthelaboratoryofHistologyandEmbryologyinXiangyaSchoolofMedicine,CentralSouthUniversitybetweenOctober2007andJune2008.MATERIALS:ThreeSpragueDawleyadultratswereusedtoextracttotalRNAfromratbrains.ThepGEX4T3andEscherichiacoli(E.coli)JM109werepurchasedfromPromega.E.coliBL21wasprovidedbyNovagen.METHODS:FLRT3proteincodingC-terminalDNAfragments,atalengthof786bp,wereamplifiedusingRT-PCRtechniquefromrattotalRNA.TheamplifiedproductswereclonedintotheexpressionvectorpGEX4T3.ArecombinantexpressionvectorwasthenconstructedandintroducedintoE.coliBL21.IsopropyI-D-thiogalactopyranosidewasappliedtoinduceexpressionofrecombinantGSTfusionproteins,followedbyisolation,purification,andrenaturationofinclusionbodiesthatcomprisedrecombinantproteins.Finally,thepurifiedrecombinantproteinwasobtained.MAINOUTCOMEMEASURES:DeterminationofFLRT3C-terminalDNAsequence;expressionoftargetproteinswasassayedbySDS-PAGEelectrophoresis;purifiedrecombinantproteinwasidentifiedwithWesternblotmethods.RESULTS:FLRT3proteincodingC-terminalDNAfragments,atalengthof786bp,weresuccessfullyharvestedthroughRT-PCRamplification,andwerethenclonesintotheprokaryoticexpressionvectorpGEX4T3.Theresultsofthesequencewereconsistentwiththeknowngenesequence.SDS-PAGEanalysisdemonstratedthattherewasaspecificproteinbandintherecombinantGSTfusionproteinsatarelativemolecularmassof56,600.Therecombinantproteinwasobservedintheinclusionbody,andh

简介：目的探讨以最近发展起来的核转染技术直接将编码绿色荧光蛋白DNA质粒转染到兔原代骨髓基质细胞的细胞核内进行基因修饰的可行性。方法从兔股骨抽取骨髓，密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞。以Nucleolector^TM技术转染pEGFP-C2（EGFP组），以同期培养未转染的细胞作为对照组。测定细胞的活力、贴壁率、生长曲线以及转染的效率。结果在转染后24h成功发现EGFP的表达。两组细胞具有相似的形态学变化、贴壁率以及生长曲线。EGFP的表达逐渐增强，至第6天达到最高峰（47．8％），观察一个月未发现表达减弱。结论pEGFP-C2基因核转染对兔原代骨髓基质细胞的体外增殖无明显影响；EGFP可以作为兔骨髓基质细胞有效的基因表达标记；Nucleofector^TM技术是一种简易而高效的转染兔原代骨髓基质细胞的方法。

简介：目的探讨纳洛酮对脑缺血再灌注的神经保护机制.方法采用线栓法制造的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,通过免疫组化法检测脑缺血不同再灌注时间以及经纳洛酮(5mg/kg)预处理后bcl-2和c-fos蛋白的表达.结果脑缺血30min再灌注6h,bcl-2和c-fos蛋白表达显著增加;再灌注24h,bcl-2蛋白持续增高,而c-fos蛋白基本降至正常.表明纳洛酮可显著上调脑缺血后bcl-2蛋白的表达,抑制c-fos蛋白的表达.结论纳洛酮的神经保护机制可能与其上调bcl-2蛋白,抑制c-fos蛋白表达有关.

简介：BACKGROUND:Previousstudieshaveshownthatthemitochondrialstructureandfunctionaredamagedinanimalmodelsofepilepsy.Inaddition,theBcl-2proteiniscapableofregulatingmitochondrialstability.OBJECTIVE:ToobserveandvalidatechangesinmitochondrialstructureandBcl-2expression,andtoanalyzethesecharacteristicsinthehippocampalCA3regionofratmodelsofepilepsy.DESIGN,TIMEANDSETTING:Thisrandomized,controlled,animalexperimentwasperformedattheLaboratoryofElectronMicroscopyandDepartmentofHistologyandEmbryology,LuzhouMedicalCollegebetween2007and2008.MATERIALS:CoriamyrtinwasprovidedbythePharmacyFactoryofWestChinaUniversityofMedicalSciences.TheprimaryandsecondaryantibodieswereprovidedbyZhongshanGoldenbridgeBiotechnology,Beijing.METHODS:Atotalof44adult,male,SpragueDawleyratswererandomlydividedintocontrol(n=11)andepilepsy(n=33)groups.Ratsintheepilepsygroupwereinducedbycoriamyrtin(50μg/kg),whichwasinjectedintothelateralventricles.Theratswerethenobservedat3,6,and24hoursafterepilepsyinduction,with11ratsateachtimepoint.Epilepsywasnotinducedinratsfromthecontrolgroup.MAINOUTCOMEMEASURES:PathologicalchangesinthehippocampalCA3regionwereobservedbylightmicroscopy;Bcl-2expressionwasanalyzedbyimmunohistochemistry;andmitochondrialchangesinthehippocampuswereobservedundertransmissionelectronmicroscopy.RESULTS:(1)ThecontrolgroupdisplayedverylittleBcl-2proteinexpressioninthehippocampalCA3region.However,after3hoursofepilepsy,expressionwasvisible.By6hours,expressionpeakedandthensubsequentlydecreasedafter24hours,butremainedhigherthanthecontrolgroup(P<0.05).(2)Mitochondriaweredamagedtovaryingdegreesintheepilepsygroups.Forexample,mitochondriaedema,cristaespaceincrease,anddisappearanceofmitochondriawereapparent.Moreover,mitochondrialdamageoccurredpriortopathologicalchangesintheneuronsandnucleolus.CONCLUSION:

简介：目的研究ＴＮＦ－α对胶质瘤细胞的抑制作用及其对Ｂｃｌ－２蛋白表达的影响。方法应用细胞计数法和ＭＴＴ法研究经ＴＮＦ－α处理的大鼠Ｃ６胶质瘤细胞的生长和增殖活性，研究了细胞的形态学变化及及用免疫细胞化学方法检测ＰＣＮＡ（增殖细胞核抗原）和Ｂｃｌ－２蛋白表达。结果ＴＮＦ－α对体外培养Ｃ６胶质瘤细胞生长和增殖具有呈时间和剂量依赖性的抑制作用，下调ＰＣＮＡ的表达，并诱导细胞凋亡，但对抑调亡蛋白Ｂｃｌ－

简介：目的探讨小鼠脑室管膜bcl-2和caspase-3在低氧预适应中的表达变化。方法将Blb／c近交系小鼠随机分为空白对照组（H0组）、低氧对照组（H1组）和低氧预适应组（H4组）。用免疫荧光和激光共聚焦显微镜等技术，测定bcl-2和caspase-3表达的荧光强度。结果H1和H4组的bcl-2表达均显著高于H0组，其中H4组又显著高于H1组。H1和H4组caspase-3的表达显著高于H0组，H4组显著低于H1组。结论低氧预适应过程中，小鼠脑室管膜区通过bcl-2的高表达和caspase-3的低表达，抵御室管膜细胞凋亡，参与脑保护机制。

简介：目的通过检测短暂性脑缺血发作（transientisehemiaattach，TIA）患者血清血清超敏C反应蛋白（highsensitiveC-reactiveprotein，hs-CRP）水平，研究hs—CRP与ABCD2评分的相关性来探讨炎症反应与TIA预后的关系。方法回顾性分析以2009年最新TIA定义为诊断标准的TIA患者70例，根据ABCD2评分进行危险分级，比较各级患者血清hs-CRP平均水平的差异。结果低危组（0～3分）、中危组（4～5分）分别与高危组（6～7分）hs—CEP水平有统计学差异（P〈O．05），中危组与低危组间无统计学差异（P〉0．05）；0～2分患者血清hs—CEP平均水平随ABCD2分值增高呈轻度上升趋势，5～7分患者血清hs—CRP平均水平随ABCD2分值增高而增高，以7分者为最著。结论hs-CRP与TIA患者ABCD2评分正相关。

简介：目的探讨细胞周期素(cyelin)D1／D2／D3在大鼠脑胶质瘤动物模型肿瘤组织中的表达。方法将体外培养大鼠C6胶质瘤细胞(细胞数为3×10^5个)，借助动物立体定向仪接种于Wistar大鼠左侧尾状核区，解剖标本，行组织病理学检查，胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化定性监测。随后检测肿瘤组织中cyclinD1／D2／D3蛋白表达。结果cyclinD1／D2／D3均呈阳性表达。cyclinD1／D3主要在细胞核表达；cyclinD2则主要在胞浆表达，部分细胞核呈阳性，不同存活期荷瘤鼠其瘤组织中cyclinD1／D2／D3表达量不同。结论cyelinD1／D2／D3的过分表达，对大鼠脑胶质瘤细胞增殖的失控起着一定的调节作用。荷瘤鼠生存期与cyclinD族的表达量呈负相关关系。

简介：目的探讨cyclinD1／D2／D3在大鼠脑胶质瘤组织中的表达。方法将体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞（细胞数为3×10^5个）借助动物立体定向仪接种于Wistar大鼠左侧尾状核区，解剖标本，行组织病理学检查及GFAP、cyclinD1／D2／D3免疫组化检测。结果cyclinD1／D2／D3均呈阳性表达。cyclinD1／D3主要在细胞胞核表达，cyclinD2主要在胞浆表达，部分在胞核表达，不同存活期荷瘤鼠瘤组织中cyclinD1／D2／D3表达量不同。结论cyclinD1／D2／D3过分表达参与调节大鼠脑胶质瘤增殖。荷瘤鼠生存期与cyclinD家族蛋白的表达呈负相关关系。

简介：

简介：目的比较缺血后适应与缺血再灌注（IR）条件下海马组织内抗凋亡通路JAK2-STAT3-BCL2的表达及激活情况,并比较两种条件下的小鼠海马组织细胞凋亡及认知水平,同时在抑制JAK2、STAT3的条件下观察其对缺血后适应的脑保护作用的影响。方法用水迷宫试验比较两组小鼠认知功能差异;用Westernblot方法测定相关蛋白的表达;用TUNEL染色比较细胞凋亡水平;用特异性抑制剂WP1066观察在JAK2、STAT3受抑制的条件下缺血后适应的脑保护效果。结果在缺血后适应的条件下小鼠海马组织中JAK2-STAT3-BCL2通路被明显激活。缺血后适应组JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、BCL2表达均升高（均P〈0.05）,海马组织细胞的凋亡程度明显减轻,凋亡细胞数明显较IR组降低（P〈0.01）,凋亡相关蛋白及caspase-3、Bax表达明显降低（均P〈0.05）。认知功能损害程度指标（隐藏平台实验与空间探索实验）水迷宫逃避潜伏期以及进入靶象限占比与IR组相比差异有统计学意义（P〈0.01,P〈0.05）。在抑制JAK2、STAT3的条件下缺血后适应的认知保护作用下降,水迷宫逃避潜伏期以及进入靶象限占比与缺血后适应组相比差异有统计学意义（均P〈0.05）,细胞凋亡数增多（P〈0.05）,JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、BCL2表达下降,而凋亡相关蛋白caspase-3、Bax表达上升（均P〈0.05）。结论缺血后适应通过激活JAK2-STAT3-BCL2通路,抑制IR损伤海马组织细胞的凋亡,保护认知功能,继而发挥内源性脑保护作用。

简介：目的构建大鼠神经营养因子3（NT-3）基因真核表达载体并观察其在真核细胞内的表达情况。方法采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术从大鼠脑组织总RNA中扩增NT-3基因cDNA序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,经酶切鉴定和序列分析后,以阳离子脂质体Li-pofectamine2000介导转染L929细胞,应用免疫细胞化学和westernblot鉴定NT-3在细胞内的表达。结果RT-PCR产物为822bp的特异片段,重组质粒pcDNA3/NT-3酶切后产生822bp和5.2kb的片段,DNA测序证实822bp片段的碱基序列与大鼠NT-3基因序列完全一致,成功构建了pcDNA3/NT-3重组质粒。将其转染真核细胞后,免疫细胞化学、westernblot结果表明NT-3能在真核细胞中正确表达。结论成功构建了重组真核表达质粒载体pcDNA3/NT-3,为后续的研究奠定基础。

简介：Thepresentstudywasdesignedtodeterminemicrotubule-associatedprotein-2andsynaptophysinexpressioninthehippocampalCA3regioninaratmodelofmiddlecerebralarteryocclusion.TheratsweretreatedwithacupunctureatBaihui(GV20),Qubin(GB7),andQianding(GV21)points,inadditiontoexercisetraining.Resultswerecomparedwithratsundergoingexercisetrainingonly.TheY-mazemethodandimmunohistochemistryrevealeddecreasederrorfrequencyofpassingthroughY-maze,aswellassignificantlyincreasedmicrotubule-associatedprotein-2andsynaptophysinexpression,intheacupuncturewithexercisetraininggroupcomparedwiththemodelandexercisetraininggroupsafter5weeks.Microtubule-associatedprotein-2andsynaptophysinexpressionsnegativelycorrelatedwitherrorfrequencyofpassingthroughtheY-maze.Theseresultssuggestedthatacupuncturecombinedwithexercisetrainingimprovedlearningandmemoryfunctionsinaratmodelofcerebralinfarction.ThemechanismsofactionwerehypothesizedtobeassociatedwithdendriticorsynapticplasticityintheipsilateralhippocampalCA3region.

简介：目的研究CIC-2、CIC-3氯通道在氯化锂一匹罗卡品大鼠慢性癫痫模型中分布和表达的变化，探讨其在癫痫发作病理机制中的作用。方法Wistar大鼠采用随机数字表法分成致痫组（60只）与对照组（20只），其中致痫组根据处死及处理时间又分为24h组、14d组与30d组，每组20只。致痫组复制氯化锂-匹罗卡品大鼠慢性癫痫模型，在发作后24h、14d、30d时，分别予以：（1）免疫组化染色，观察CIC-2、C1C-3氯通道蛋白在海马表达的分布情况及其致痫后不同时点的吸光度似）值的变化；（2）RT—PCR，观察C1C-2、C1C-3氯通道mRNA在致痫后不同时点的变化。结果（1）与对照组比较，致痫后14d至30d，致痫组免疫反应阳性神经元数和A值明显减少和降低，差异有统计学意义（p〈0．05）；C1C-2mRNA表达降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）与对照组比较，致痫组致痫后24h，海马CA1、CA3及齿状回各层C1C-3免疫反应阳性神经元数和A值明显增加和升高，差异有统计学意义（P〈O．05）；C1C-3氯通道mRNA表达明显增加，差异有统计学意义fK0．05）。结论癫痫慢性期的发作和C1C-2氯通道的减少有关。

简介：BACKGROUND:TheprogressivedegenerationofdopaminergicneuronsinParkinson’sdiseaseisassociatedwithanactivatedglialreaction,combinedwithaninflammatoryprocess.Theseresponsesleadtotheproductionofcytokines,suchasinterferon-γ,tumornecrosisfactor-α(TNF-α),andinterleukin-1β.Inaddition,14-3-3proteinisacomponentofLewybodiesinParkinson’sdisease.OBJECTIVE:Toobservetheexpressionof14-3-3γandζprotein,aswellasTNF-α,inmousemicroglia,aswellaschangesafterlipopolysaccharide(LPS)activation.Toinvestigatepossiblemechanismsofdopaminergicneuronalinjuryduetoactivatedmicroglia.ToandclarifytheimmuneresponsemechanismsofParkinson’sdisease.DESIGN:Randomizedcontrolledobservation,cellstudy.SETTING:LaboratoryofDepartmentofNeurology,theAffiliatedUnionHospitalofTongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology.MATERIALS:TheBV-2immortalizedmurinemicrogliacelllinewaspurchasedfromChinaUnitcellcenter.LPSwasprovidedbySigmaCompany.CellcultureswerepurchasedfromGibco.Phospho-(Ser)14-3-3bindingmotifantibodywaspurchasedfromSantaCruzBiotechnologies.FITCwasprovidedbyLinfeiBiotechnology,Wuhan,China.TNF-αELISAwasprovidedbyJingmeiBiotechCo,Wuhan,China.TheflowcytometerwasprovidedbyBectonDickinson,Canada.METHODS:ThepresentexperimentwasperformedattheLaboratoryofDepartmentofNeurology,theAffiliatedUnionHospitalofTongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnologyfromApriltoDecember2006.Themicroglialcellline,BV-2,wasculturedinvitroandstimulatedwithLPSfor2,6,12,and24hours.BV-2cultureswithoutLPSwereusedascontrols.MAINOUTCOMEMEASURES:Expressionof14-3-3γproteinwasdetectedbyflowcytometry.14-3-3ζpercentageexpressionandthemeanfluorescenceintensitywasdetectedbyimmunofluorescence.TNF-αexpressionwasdetectedbyELISA.RESULTS:14-3-3γproteinexpressionanalysis:followi

简介：目的探讨O形臂导航辅助经皮椎弓根螺钉内固定的准确性与安全性。方法回顾性分析7例经皮椎弓根螺钉内固定病人的临床及影像学资料。病人均在置钉结束后行O形臂系统3D扫描,按照Gertzbein-Robbins分级评估置钉的准确性。结果7例病人在O形臂导航辅助下共置入29枚椎弓根螺钉,其中Gertzbein-Robbins分级A级23枚（79.31%）,B级4枚（13.79%）,C级1枚（3.45%）,E级1枚（3.45%）。手术共置入29枚克氏针,其中1枚（3.45%）突破椎体前缘。术中无关节突关节受到破坏。1例出现置钉相关神经并发症行再次手术调整椎弓根螺钉。随访（8.29±2.43）个月,无钉棒置入后相关并发症。结论O形臂导航辅助经皮椎弓根螺钉内固定具有较高的准确性及安全性。