简介:为探索适于小麦籽粒蛋白质组学研究的样品制备最优方法,本研究以Rht10鲁麦15开花后第31天的籽粒为材料,采用4种不同蛋白质提取方法:TCA/丙酮法、尿素/硫脲法、酚提取法Ⅰ和酚提取法Ⅱ,对不同提取方法得到的蛋白量以及蛋白分离结果进行比较分析。结果显示:TCA/丙酮法和尿素/硫脲法获得的蛋白点较少,分别为484个和489个,蛋白质损失较大,蛋白质在碱性端(pH7附近)堆积严重;酚提取方法Ⅰ得到的蛋白点709个,部分蛋白点弥散,碱性端蛋白轻微堆积;酚提取方法Ⅱ得到的蛋白点866个,蛋白点清晰,无碱性蛋白堆积。研究结果表明,在小麦籽粒蛋白质组的研究中,酚提取方法更为适合小麦籽粒蛋白的提取,同时方法Ⅱ优于方法Ⅰ。
简介:到怀有基因Pi-d2从pCB6.3kb,pCB5.3kb和pZH01-2.72kb的三不同表示向量转变了的米饭强风抵抗的转基因的米饭线的米饭强风的抵抗被分析。有Pi-d2基因的九根先进产生的转基因的米饭线显示了各种各样的抵抗到39米饭强风紧张,并且最高疾病抵抗的频率到达了91.7%。有Pi-d2基因的四根早产生的同型结合的转基因的线展出了抵抗到58米饭强风紧张中的超过81.5%个,显示出宽光谱的抵抗的特征。当在文化媒介的粗略的毒素的集中增加了,米饭强风真菌的粗略的毒素选择的转基因的胚胎的calli证明从转基因的米饭植物的不成熟的胚胎的胼胝正式就职率减少了。当粗略的毒素的集中到达了40%时,从转基因的线的不成熟的胚胎的胼胝正式就职率是49.3%,并且受体控制的是5%。在正式就职下面的地里的转基因的大米线的颈强风的疾病发生是0%~50%,显示转基因的大米线的大米强风抵抗比受体控制的高得多。
简介:本文观察苎麻叶凝胶长期连续经皮肤给药对完整皮肤和破损皮肤实验大鼠可能产生的毒性反应,为临床应用提供毒理学依据。利用160只Wistar大鼠,随机分为完整皮肤凝胶基质对照组、完整皮肤苎麻叶凝胶低、中、高剂量组(相当于临床人用量的20、40、80倍),破损皮肤凝胶基质对照组、破损皮肤苎麻叶凝胶低、中、高剂量组(相当于临床人用量的20、40、80倍),每组20只,雌雄各半,每日涂药2次,连续给药4周,观察大鼠的一般状况、体重、摄食量,测定给药4周及停药2周后大鼠的血液生化指标,脏器系数、解剖学及病理组织学改变情况。结果表明,苎麻叶凝胶各组大鼠一般状况良好,体重增长、摄食情况、脏器系数、血常规、血液生化指标、解剖学和主要脏器的病理组织学检查均正常,与凝胶基质对照组比较无明显差异。苎麻叶凝胶在临床剂量范围内毒性小,使用安全。
简介:以橡胶树热研7-33-97花序为试验材料,分别采取3种蛋白质提取方法(TCA/丙酮法,酚抽提法和Tris-丙酮-酚法)提取橡胶树花序总蛋白。对3种蛋白质提取方法的蛋白提取率、单向SDS-PAGE电泳和双向电泳结果进行分析比较,结果表明3种方法中TCA/丙酮法的提取率最高(6.09±0.22)mg/g,单向SDS-PAGE电泳条带清晰且较完整,双向电泳后获得的蛋白点最多(994±25),是建立橡胶树花序蛋白质组学研究体系的较好方法。进一步对基于TCA/丙酮法提取的橡胶树花序总蛋白质双向电泳体系进行优化,结果显示利用pH范围为4~7的IPG胶条,在聚焦时间为7.0×10~4Vh、蛋白上样量为1.0×10~3μg,以及12.5%凝胶浓度条件下,考马斯亮蓝染色法获得的橡胶树花序蛋白质双向电泳图谱质量最好,可为橡胶树生殖发育相关蛋白质组学研究奠定良好基础。
简介:采用聚丙炮酰胺凝胶园盘电泳法分析了荷包红鲤和德国镜鲤的心脏、肝脏、肌肉和眼睛等组织中的过氧化物酶(POD)、酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)、乳酸脱氢酶(LDH)等四种同工酶的谱带。结果表明:荷包红鲤POD在肌肉中不显带,在心、肝、眼中显3-4条带;EST在心、肌、眼中均显2条主带,尚可见1-3条痕量带,在肝中多1条主带,MDH在心、肝、肌、眼组织中显示1-5条带,各组织不同;LDH在心、肌、眼中均显1条带在肝脏显4条带。德国镜鲤POD在肌肉中不显带,在心、肝、眼组织中显3-5条带;EST在心、肌、眼组织中均显2条主带,1-2条痕量带;MDH在心、肝、肌、眼组织中显1-3条带;LDH在心、肌、眼组织中均显1条带,而在肝脏显示1条弥漫性宽带。可见荷包红鲤和德国镜鲤POD、EST、MDH和LDH等同工酶在不同组织中均在程度不同的组织特异性。在这两种鱼的同一组织中,四种同工酶的酶带既有一定的差异,又有很大的相近性。而在同一种鱼的不同个体中,同工酶电泳带无明显不同。
简介:为探究大豆应答非致病菌(Bipolarismaydis)胁迫的分子机制,将玉米小斑病菌接种于3周龄的大豆苗。取48hpi的大豆叶片以TCA/丙酮法提取蛋白质,利用蛋白质双向电泳技术分离蛋白,串联质谱(MS+MS/MS)鉴定蛋白质再结合生物信息学技术进行蛋白质功能分析。结果显示:分离到大豆苗期叶片总蛋白点1300+15个,其中,差异表达(2倍以上,P值〈0.05)的蛋白质点18个,除2个蛋白点未成功测序,其余16个差异蛋白点经GO分析可知,差异表达的蛋白质功能主要涉及光合作用、胁迫应激和非寄主抗性响应,如核酮糖1,5-二磷酸羧化酶、病程相关蛋白PR-10和细胞骨架结构相关蛋白profilin-2。同时,由测序结果推测:在非致病菌(玉米小斑病菌)的胁迫下,大豆通过降低光合作用相关蛋白和能量代谢相关蛋白的表达,来增强防御相关蛋白和非寄主抗性相关蛋白的表达。