简介:目的构建hTERT基因RNAi慢病毒载体,为大肠癌RNAi介导的基因治疗打下基础。方法化学合成3条靶向hTERT基因的siRNA,转染大肠癌细胞SW480,48h后采用RT-PCR方法筛选出一条对hTERTmRNA有明显抑制作用的siRNA。针对已经筛选确定的hTERT基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经XhoⅠ和HpaⅠ酶切后的GP-SupersilencingVector载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shhTERT慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV-shhTERT、pGag/Pol、pRev和pVSV-G4质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果PCR和测序证实,成功构建hTERTshRNA的慢病毒载体LV-shhTERT。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为1×108UT/ml。结论成功构建了hTERT基因RNAi慢病毒载体。
简介:摘 要:为提升党建工作质量和效果,促进党建与业务工作相融合,传递党和国家对人民群众的关爱,深入推进全面从严治党,中国疾控中心妇幼保健中心党委着力设计实施了系列联学联建活动,实施3年,取得较好效果,不仅自身党建能力提升了,还有力地助力健康扶贫、深入了解和服务了基层,为妇女儿童健康提供更好地保障作用。本文通过梳理总结活动情况,为开展党组织党建活动提供借鉴。
简介:目的探索构建针对人类核转运蛋白2(KPNA2)基因的重组慢病毒干扰RNA(shRNA)载体的方法,研究其对人骨肉瘤细胞株MG63的沉默效率。方法针对KPNA2基因设计小片段干扰序列。加入AgeⅠ酶和EcoRⅠ酶酶切位点,根据设计好的序列合成单链DNAoligo并退火合成双链DNAoligo。将合成好的双链DNAoligo与GV115载体重组,形成GV115-shRNA慢病毒载体。聚合酶链式反应(PCR)法鉴定筛选出阳性重组子,经测序后包装慢病毒载体。荧光法测定病毒滴度,重组慢病毒感染骨肉瘤细胞株MG63,通过显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达来计算其转染效率。RT-PCR法检测重组慢病毒RNA干扰载体对人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2表达的沉默效率。实验结果数据以均数±标准差(sx±)表示,应用SPSS13.0统计软件分析,两组均数间的比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计意义。结果经PCR分析和测序证实,成功构建KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体;荧光法测定病毒滴度为4×108TU/ml;荧光显微镜下观察GFP,显示细胞感染效率达到80%以上;RT-PCR检测对照组及实验组KPNA2mRNA表达分别为0.991±0.087vs.0.216±0.012,差异有统计学意义(P<0.01)。结论KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体构建成功,并有效干扰人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2mRNA的表达。
简介:【摘要】医院思想政治工作和医院文化建设都是医院管理工作中的重要内容,也是医院推进精神文明建设的重要组成部分和手段。探究和了解医院文化和思想政治工作的特征、用处及辩证关系,并探索如何尽量发挥二者相互补充和促进作用,以进一步提高医院的核心竞争力,这是当下每个医院面临的新课题。
简介:摘要:目的:为了深入研究以健康食堂为载体的营养健康促进模式的干预效果。方法:选取2021年5月至2022年5月期间人员食堂实施健康食堂,本组作为研究组,选取2020年5月至2021年5月期间人员食堂实施常规食堂管理,本组作为参照组,其中,自理人员54人,介助人员50人,介护人员56人,认知症照护人员17人,特困人员61人,孤残儿童100人,职工131人,研究组和参照组共计452人。对比两组人员营养指标。结果:干预后,研究组人员营养指标显著优于参照组。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:对人员食堂实施健康食堂管理干预,可有效改善人员营养指标,故方案值得推广。
简介:摘要目的构建小鼠CXCR3的重组腺病毒载体。方法应用RT-PCR方法从小鼠脑组织中扩增分离CXCR3基因,经双酶切位点插入腺病毒载体pacAd5中,经氨苄青霉素抗性筛选、酶切及DNA测序方法验证目的基因。采用Lipofectamine?2000将重组腺病毒载体CXCR3/pacAd5转染HEK293AD细胞,包装、扩增后测定病毒滴度。结果RT-PCR方法获得1.1Kb目的基因CXCR3,经氨苄青霉素抗性筛选的重组克隆经酶切及DNA测序证实为目的基因。重组CXCR3/pacAd5转染HEK293AD细胞后获得包装及扩增,病毒滴度达1.8×108PFU/ml。结论本研究成功构建小鼠CXCR3的重组腺病毒载体CXCR3/pacAd5,可用于进一步研究CXCR3参与多种疾病转归的分子免疫机制。
简介:摘要目的探讨经开胸心肌内注射腺病毒载体转染大鼠心肌的可行性。方法将16只成年雄性SD大鼠行开胸心肌内注射腺病毒载体,术前和术后第5天进行超声心动图检查,评估心功能。术后第5天切取心肌标本制作冰冻切片,观察心肌组织转染情况;分离心肌细胞,测定细胞转染率。结果超声心动图检查示注射前和注射5天后心功能未见明显变化。心肌组织冰冻切片检查示可见弥散的绿色荧光,转染面积百分比达(5.13±0.90)%;分离心肌细胞转染率测定示可见散在的绿色荧光,转染率达(5.20±1.95)%。结论通过开胸心肌内注射腺病毒载体转染大鼠心肌安全、经济、可行,可作为心脏疾病转基因治疗研究的首选方法。
简介:摘要目的通过建立家兔急性肺动脉栓塞模型,来探讨家兔作为动物模型载体制备急性肺动脉栓塞模型的可行性,并通过16层螺旋CT肺动脉造影评价其应用价值。方法成年健康中国大耳白兔10只,体重2.5kg-3.5kg,抽取耳缘静脉血1ml制备自体血栓,建立肺动脉栓塞模型后进行16-SCTPA数据采集。结果1、10只实验兔其中1只由于栓塞过量未取得数据,其余9只均成功地制备肺栓塞模型。2、通过解剖及肺动脉造影对照,掌握了家兔肺动脉结构,对进一步实验研究提供了理论依据。3、家兔叶动脉直径相差较大,膈叶动脉与尖叶动脉、心叶动脉及右肺中间叶动脉同为3级动脉,但直径差异经t检验P<0.05,具有统计学意义,故将家兔肺动脉按照血管直径分级更为科学。4、造影共检出肺动脉血管171支,肺动脉直径>3.0mm肺动脉45支,2.0-3.0mm肺动脉18支,血管直径在1.5-2.0mm肺动脉36支,<1.5mm肺动脉72支。结论家兔肺栓塞模型是一种方便经济、安全有效的方法,应用热处理后的自体血凝块夹杂线头标记物作栓塞剂,安全稳定,为肺栓塞动物模型的制作提供了一种可行的方案。家兔叶、段级肺动脉同级动脉直径存在显著差异,并且差异具有统计学意义,如按照传统以叶、段肺动脉分级统计易出现偏倚,故将家兔肺动脉按照血管直径分级更为科学。对于进一步研究血栓检出率的统计,更具客观性、科学性、准确性。
简介:摘要目的探讨由载体介导的靶向hTERT基因的RNAi技术对白血病HL-6细胞hTERT基因和细胞增殖的影响。方法用已经构建好的表达针对hTERT基因siRNA的质粒载体,经转染试剂RNAi-Mate转染HL-60细胞;以空质粒、转染试剂及空白组作对照,将转染后24h、72h、120h的细胞作为三个实验组,用RT-PCR检测细胞hTERT基因mRNA的表达,MTT检测细胞增殖活性。结果三个实验组HL-60细胞hTERTmRNA表达水平低于各对照组,细胞增殖活性抑制率高于各对照组(P<0.05),实验组组间比较差异无统计学意义(P>0.05);三个对照组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论载体介导的靶向hTERT基因的RNAi技术能在体外抑制HL-60细胞hTERT基因的表达,抑制细胞增殖。