简介：目的建立克罗诺杆菌的特异、灵敏的TaqMan—MGB探针实时荧光定量PCR检测方法。方法根据GenBank公布的克罗诺杆菌MMS基因高保守序列，设计特异引物和TaqMan—MGB探针，建立和优化反应体系，用25种其他常见致病菌评价反应体系的特异性，用克罗诺杆菌MMS基因重组质粒构建实时荧光定量PCR标准曲线，对重组质粒、纯菌和人工模拟污染样本进行灵敏度试验，并与FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR比较，配对t检验分析两种方法对Ct值和荧光强度的差异。结果采用TaqMan—MGB探针实时荧光定量PCR检测克罗诺杆菌MMS基因仅需40min，与25种非目标菌无交叉反应，仅对克罗诺杆菌有特异性扩增；所构建方法线性关系良好，相关系数r2=0．999，扩增效率为99．972％，对重组质粒、纯菌、人工模拟污染样品标本的灵敏度分别达10拷贝／反应、3．8和38cfu／ml；与FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR相比，TaqMan—MGB探针实时荧光定量PCR的Q值更小、△Rn值更高，灵敏度和分辨率差异均有统计学意义（Ct：t=-14．406，P〈0．01；△Rn：t：14．230，P〈0．01）。结论本研究建立的TaqMan—MGB探针实时荧光定量PCR反应体系能够快速、特异、灵敏地检测克罗诺杆菌MMS基因，可用于婴幼儿奶粉中克罗诺杆菌的快速筛查和鉴定，具有较大的的应用价值和推广价值。

简介：目的建立不同水源中GⅡ型诺如病毒(NoVGⅡ)实时荧光逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法,对某市疾病预防控制中心送检的10份疑似引起诺如病毒中毒的水样进行NoVGⅡ检测。方法以瓶装水、河水和生活污水为研究对象,采用硝酸纤维素膜-聚乙二醇(PEG)沉淀法富集病毒,对取样体积、病毒洗脱条件、PEG终浓度及PEG沉淀条件等进行了优化,提取病毒RNA、建立实时荧光RT-PCR检测方法;通过外加MS2计算方法的回收率,评价所建方法对水样中诺如病毒的回收效果。结果建立的方法对瓶装水、河水和生活污水中NoVGⅡ的平均回收率分别为(60.1±8.0)%、(22.0±6.5)%和(35.7±8.1)%,10份送检水样中3份检出NoVGⅡ。结论建立的实时荧光RT-PCR方法适用于瓶装水、河水和生活污水中NoVGⅡ的检测,饮用水被NoVGⅡ是引发某市人员中毒的原因之一。