简介：目前,在供体器官短缺的情况下,大家公认猪是最合适的异种器官和组织的提供者,用猪肝细胞治疗急性肝衰病人已有报道.如何将肝细胞最大限度完整地、无损伤地分离出来,这是非常关键和重要的一步.我室在进行猪肝细胞的分离中,逐渐探索出一套比较行之有效的方法.材料与方法:采用中国实验用小型猪,常规麻醉、消毒、开腹,用D-Hank′s液进行肝脏原位灌注,再用0.02%EDTA-Hank′s液(37℃)灌注18～20min,摘取肝脏行多点灌注5min,置肝脏于60目钢网上,用直剪迅速剪开肝脏被膜,用镊子夹起轻轻抖动,并用1640液冲洗,边抖动边冲洗,使细胞滤出漏于烧杯中.与此同时,用剪刀把肝组织剪成小块,再用玻璃注射器芯轻轻研磨,边研磨边冲洗,操作要轻,并保持无菌,收集肝细胞,离心洗涤三次,并逐级用80目、100目、120目、150目钢网过滤.分离出的肝细胞进行计数、台盼蓝拒染试验检查、PAS染色、葡萄糖-6-磷酸酶染色及电镜检查.结果:肝细胞存活率90±1.3%,PAS染色显示肝糖元丰富,葡萄糖-6-磷酸酶染色显示酶的活性良好.电镜观察,肝细胞的线粒体、内质网等亚显微结构未见异常.对于猪肝细胞的分离,国外文献报道多采用Ⅳ型胶原酶循环灌注法,但费用很昂贵.在实践中,我们用EDTA代替胶原酶,采用肝脏原位灌注+多点灌注+机械研磨的方法,取得了较为满意的效果.此法与胶原酶灌注法比较,从分离的肝细胞数量、活力、肝糖元及细胞中一些酶的活性都与胶原酶法无显著差异,且光镜及电镜观察,显示细胞形态及亚细胞结构未见异常.我们认为此方法易于控制,价格低廉;而胶原酶法容易消化过度,造成细胞膜破损,或消化不完全造成多个细胞连在一起,且费用昂贵.实验证明,改良的猪肝细胞分离方法为用猪肝细胞治疗急性肝衰病人的研究提供了一个可行的方法.

简介：树突状细胞(DC)是一类专职性抗原呈递细胞,不仅启动免疫反应和诱导免疫耐受,还在调节免疫反应与免疫耐受的平衡中起决定性作用.肝脏因其固有的移植耐受性而在免疫耐受研究中深受关注,肝移植物容易存活,伴有肝移植的其他器官(如心脏、肾脏等)移植存活时间也较其单独移植明显延长.最近有人提出,在肝移植耐受中DC可能起关键作用,但因其难于分离培养,国外仅美国Pittshburgh大学在做相关研究,国内尚未见报道.材料与方法:1.肝非实质细胞的分离:取6～8w小鼠,麻醉后无菌开腹,门静脉插管,用前灌液(PBS+肝素500μ/100ml)灌流2～3min,改用注射器缓慢推注2mlⅣ胶原酶(GIBCOL公司,0.05%);取材后剪碎,15mlⅣ胶原酶液(0.05%)体外消化30min.尼龙网过滤,PBS液清洗(400g×5min离心)两次,稀释成4～5ml细胞悬液.下铺细胞分离液Percoll(Pharmacia公司)制成的不连续密度梯度液,500g×30min离心后,细胞分三层,先吸弃最上层细胞碎片,再吸取两液体界面的肝非实质细胞,避免吸到最底层的血细胞,RPMI1640液(GIBCOL公司)清洗两次,400g×5min离心,即可得肝非实质细胞.2.肝树突状细胞(HDC)的培养:将肝非实质细胞用含灭活的10%胎牛血清(GIBCOL公司)的RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2.5×106/ml,接种于24孔培养板,每孔1ml,加GM-CSF(GIBCOL公司)10ng/ml.培养第三天轻轻吸去未贴壁细胞,换液.后隔天半量换液,培养第7～8d可收取HDC.结果与讨论每只小鼠可得肝非实质细胞约1.0～1.5×107个,细胞大小不一,类型较多.培养24～48hr后,有大量细胞贴壁生长,少量HDC前体细胞半贴壁状散在分布,经筛选、扩增,第4d时HDC数量增多,出现6～8个细胞组成的小集落.第7～8d,HDC数量增多,此阶段细胞有一明显的增殖高峰,有大量半贴壁半悬浮的集落,集落表面的细胞有小的突起.第7～8d,每只小鼠HDC得率约为2～3×106个.因HDC难于分离培�

简介：长期以来,Guguen等[1]的两步胶原酶灌注法分离获得肝细胞的方法,几乎成了肝细胞分离的经典方法;在此基础上又发展了多种不同的培养方法,如在培养瓶内加纤连蛋白(febronectin)以促进肝细胞附壁[2],添加生长因子于培养基促其生长等.但上述方法步骤繁琐,成本较高,且两步胶原酶灌注法主用于大鼠肝细胞的分离,不适于新生鼠肝细胞的分离,甚至分离成年小鼠肝细胞,都因为血管的纤细,在实际应用中也很困难.

简介：超声检测已成为对妊娠中胎儿生长发育监测的主要时段.它对优生、优育愈渐起着主要的作用.目前,超声检测项目繁多,有关以超声检测得到的数据来估计胎儿在宫内的生长发育情况,以及这些数据与胎龄的相关分析、推算公式的文章资料也非常多见.但是这些分析和推算公式哪些更准确、更可信却不一定都能成为定论,其重要原因之一,就是在超声检测妊娠中胎儿的这项工作中还缺乏一种更为科学的、正确可信的,又是大家必须遵循的统一标准.本文就对胎龄的认识和测量点的认定等方面存在的问题提出看法,以期与同行求得共识:

简介：石蜡切片包括取材、固定、脱水、透明、包埋、切片、染色、封固一系列环节.一张好的切片应平展、无裂纹、无脆烂、厚薄均匀.当然一张切片的好坏每一环节都很重要,如出现问题,都将影响切片的质量.而最易出现,最难解决的问题是切片这一环节,下面是我多年工作中总结的经验,仅供参考.

简介：目的探讨解剖学教材编写过程中与临床学科衔接的若干问题。方法贴近临床，优化结构，整合内容，满足资格考试的“必需、够用”，注重与后续课程的衔接，满足相关工作的岗位需求。统一解剖学与临床学科个别存在偏差的内容。结果使教材的科学性、针对性、实用性和趣味性相结合，既满足了学生的就业要求，又为学生职业发展和继续学习打好基础。结论基础学科教材和临床学科教材应相互衔接，概念应统一。

简介：是医学基础课程之一,在医学教育中具有重要地位.医学名词大约1/4源于此,同学们往往认为内容多,零碎、枯燥无味,难学难记,记乔而易忘.

简介：目的通过调查南充市高校学生对蚊虫叮咬相关问题的调查,旨在探索有效的防蚊措施。方法采用随机抽样的原则,选取南充市高校学生470名作为研究对象进行问卷调查,并对其结果进行分析。结果被调查的人中被蚊虫叮咬率为96.2%,其中叮咬后87.2%出现局限性红色肿块,12.2%出现较大的、弥散性的肿块,0.7%出现全身过敏反应;容易出汗的学生易被蚊虫叮咬。结论南充地区普遍学生受蚊虫叮咬,防蚊知识宣传很有必要。

简介：局部解剖学是医学专业的主干课程和桥梁课程,传统的教学模式存在诸多弊端,探索适应现代医学教育新模式具有重要意义。本文就＂以临床问题为中心＂的局部解剖学教学模式进行了初步的探索。

简介：关于人类死亡的定义和机理，是一个十分复杂的问题，人们不仅要从生理、医学等方面研究和探讨什么是死亡，还要从社会学、哲学的角度研究探讨什么是死亡，给予死亡一个多视角的概念和定义。近代医学与生物学认为：人是具有意识和感觉的有机统一体，人的躯体是各种意识、行为活动的物质载体，而驾驭这个统一体的是人脑。从纯生物学的角度讲，人的死亡是人的意识、行为活动及各种生理功能的丧失。唯物主义认为：生命是整个肉体的各种运动的总和，而感觉和思维只是作为这些运动的一个部分，因此，在死人那里，感觉和思维也像所有的其他运动一样都是停止的，精神灵魂不过是物质的一种“变形”，身体死亡之时，灵魂就象蒸气一样消散了。因此，世界上根本不存在灵魂或者死者的鬼神之类。唯物主义还认为死亡是生命的终结，是对生命的否定，是对人生的盖棺定论，是对人生价值的最终评定，一个人的生命虽然结束了，但其生前所创造的价值依然存在，并对社会产生或多或少的影响，因此，后人应尊重其人格，其遗体作为其人的物质的代表也应得以妥善的处置和尊重。

简介：人体解剖学实验教学中所面临的问题很多,其中实验教学人才不足与实验教学环境差等主要因素严重影响到人体解剖学实验教学,这些问题是人体解剖学实验教学所面临的主要问题。怎样解决解剖学实验教学人才不足与改善解剖学实验教学环境是我们不得不思索和应该努力去解决的问题。