简介：摘要肠道病毒（enterovirus，EV）可引起多种感染性疾病，临床表现复杂多样。作为RNA病毒，EV的RNA依赖的RNA聚合酶缺乏校对功能，导致其基因发生高频率的突变和重组，从而使EV获得进化优势，进而发生对宿主的免疫逃逸、对抗病毒药物的抗性，也可使病毒的传播力和致病性增强或组织嗜性发生改变。本文综述了EV的重组机制，并对部分重要型别和新型别EV的重组情况以及重组对病毒流行、致病性的影响进行了概述。

简介：摘要目的探讨抗-HCV及HCV RNA检测在静脉吸毒人群中HCV感染的诊断价值，为静脉吸毒人群HCV感染诊断提供一种准确、高效的检测策略。方法收集527例静脉吸毒者的血浆样本，先进行抗-HCV筛查试验（ELISA），对结果呈反应性样本用重组免疫印迹试验(RIBA)进行抗体确证；并对所有样本进行HCV RNA检测，然后分析抗-HCV筛查试验、RIBA及HCV RNA检测（NAT）结果。对数据进行统计描述。结果527例静脉吸毒者样本的抗-HCV ELISA结果中有386例呈反应性，141例为抗-HCV阴性；经RIBA检测386例抗体反应性样本中有370例抗-HCV阳性、6例抗-HCV不确定和10例抗-HCV阴性。抗-HCV ELISA与RIBA检测阳性符合率为95.85% (370/386)，静脉吸毒人群中抗-HCV阳性率为70.21%（370/527）。10例抗-HCV RIBA阴性样本经HCV RNA检测，均为阴性。376例抗-HCV RIBA阳性和不确定样本经HCV RNA检测，有56.93%（300/527）为HCV现症感染，14.42%（76/527）为HCV既往感染。对141例抗-HCV ELISA结果呈阴性的样本进行HCV RNA检测，抗-HCV ELISA筛查残余风险度为1.52%（8/527）。静脉吸毒人群中HCV病毒载量分布显示，高载量值(>107 IU/ml)和低载量值(<102 IU/ml)分别占1.95%和2.27%，而载量值在1×102～1×107 IU/ml的样本占95.78% (295/308)，且主要分布于1×105～1×106 IU/ml（37.99%）。"ELISA+RIBA+NAT"的检测策略能区分300例HCV现症感染、76例HCV既往感染及10例抗-HCV假阳性结果，而"ELISA+NAT"检测策略能检测出300例HCV现症感染者，但不能区分出386例抗体筛查阳性者中存在的10例抗体筛查假阳性（2.59%）。结论静脉吸毒人群是HCV感染的高危人群，有很高的现症感染率，这些HCV感染者体内病毒载量值均维持在较高水平。对静脉吸毒人群抗-HCV筛查将有一定的残余风险度，因此，对静脉吸毒人群用抗-HCV ELISA筛查加核酸检测策略能准确诊断现症感染者，但不能区分出抗体筛查假阳性。

简介：摘要目的分析一例ABO血型重组等位基因的分子特性。方法ABO表型鉴定采用试管法。ABO基因和FUT1基因编码区序列检测采用PCR测序法。利用等位基因特异性引物扩增测序技术鉴别先证者ABO等位基因。先证者及其母亲ABO基因全长序列测定采用二代测序方法。结果先证者红细胞与抗H不凝集，FUT1基因为c.551_552del AG纯合，判定先证者为类孟买型。先证者ABO基因双链测序结果为c.261G/del、467C>T、c.526C>G、c.657C>T、c.703G>A、c.796C>A、c.803G>C、c.930G>A杂合。单链测序结果显示先证者有一个ABO*A1.02等位基因，另一个为ABO*O.01.01和ABO*B.01重组形成的等位基因。二代测序数据显示可能重组的位置在核苷酸c.375-269到c.526之间，家系分析显示先证者重组等位基因遗传自母亲。结论ABO血型等位基因存在重组现象。发现了1例ABO*O.01.01和ABO*B.01重组形成的新等位基因。

简介：摘要同源重组修复是高度保真的DNA双链断裂的修复方式。同源重组修复基因检测对于前列腺癌患者的肿瘤遗传风险评估、治疗决策、预后判断等方面均具有重要意义，涉及适用人群、样本选择、样本处理要求、变异解读与报告等诸多环节。为指导和规范前列腺癌同源重组修复基因检测，中华医学会病理学分会、中华医学会泌尿外科学分会和国家病理质控中心联合制定本共识。

简介：摘要目的构建人IL-2与HBsAg融合基因并转化到BCG中构建重组BCG(recombinant BCG，rBCG)，为制备治疗和预防乙型肝炎和结核病的二联疫苗奠定基础。方法以IL-2 pMalLP质粒和HBsAg pMalLP质粒为模板，设计引物，利用PCR技术扩增HBsAg和IL-2基因，进行重叠PCR获得融合基因IL-2-HBsAg并纯化，将融合基因克隆至穿梭表达载体pMV261得到重组质粒，电转化导入BCG感受态细胞，以蛋白质印迹法检测融合基因在rBCG中的表达。结果PCR扩增得到IL-2和HBsAg，通过重叠PCR获得IL-2-HBsAg融合基因后成功插入穿梭表达载体，rBCG能表达融合蛋白。结论构建人IL-2与HBsAg融合基因重组质粒并导入BCG，获得了稳定表达融合蛋白的rBCG。

简介：摘要目的原核表达古尔图病毒(Guertu virus, GTV)糖蛋白截短片段(Gn、Gn1、Gn2、Gn3、Gc1和Gc2)，分别纯化Gn-His、Gc1-His和Gc2-His重组蛋白并制备其多克隆抗体。方法采用RT-PCR的方法分别扩增得到GTV DXM毒株截短糖蛋白Gn、Gn1、Gn2、Gn3、Gc1和Gc2基因片段，并将其构建到原核表达载体pET-32a(＋)中，继而转化到E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达，SDS-PAGE分析蛋白质大小。经镍柱亲和层析纯化Gn-His、Gc1-His和Gc2-His重组蛋白，用GTV阳性羊血清通过Western blot法检测重组蛋白的抗原性。用纯化的蛋白质分别免疫新西兰白兔制备抗血清，ELISA法检测血清效价。将构建的真核表达载体pcDNA3.1-Gn和pcDNA3.1-Gc1/Gc2转染至哺乳动物Vero细胞，并用间接免疫荧光法评估前述制备的兔多克隆抗体的结合活性。最后用Western blot法检测血清与重组蛋白的特异性反应能力。结果双酶切鉴定和测序结果表明pET-32a-Gn、pET-32a-Gn1/Gn2/Gn3、pET-32a-Gc1/Gc2、pcDNA3.1-Gn和pcDNA3.1-Gc1/Gc2重组表达载体构建正确，重组表达蛋白Gn-His、Gn1/Gn2/Gn3-His、Gc1/Gc2-His相对分子质量(Mr)大小分别约为63.4×103、37.1×103、31.9×103、30.8×103、40×103和54.4×103。重组表达蛋白能够被GTV阳性羊血清所识别；获得的抗GTV Gn、Gc1和Gc2兔多克隆抗体效价分别为1∶409 600、1∶204 800和1∶6 400。间接免疫荧光检测和Western blot结果表明制备的多克隆抗体能够与真核表达产物或重组蛋白发生特异性反应。结论重组GTV糖蛋白Gn-His、Gc1-His和Gc2-His得到了高效表达和纯化，具有较好的免疫性。制备的多克隆抗体效价高，特异性好。本研究结果为进一步开展GTV糖蛋白生物学功能及其检测方法和疫苗研究提供参考资料。

简介：摘要目的构建人降钙素原（hPCT）原核表达载体，低成本、快速、高浓度、高纯度获取hPCT纯化蛋白，为临床实验室检测制备质控品和参考物质奠定基础。方法将GenBank提供的hPCT编码序列经大肠杆菌密码子优化后，人工合成DNA片段克隆至pET-28a(+)原核表达载体以构建重组hPCT表达质粒。转化至大肠杆菌E. coli BL21感受态中，优化诱导表达条件、诱导质粒表达并对重组蛋白进行His融合标签纯化。结果成功构建重组hPCT原核表达质粒，优化异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达浓度及诱导温度，最适IPTG浓度为0.2 mmol/L，最佳诱导温度为37 ℃。纯化后hPCT蛋白可通过临床检测，且稀释倍数与检测浓度间呈现良好线性关系，回归方程为y=-0.0085x+112.63，R2值为0.9975。结论成功构建重组hPCT的高效表达系统，重组hPCT蛋白纯度大、浓度高、生产周期短，有成为候选室间质量评价参考物质的潜力。

简介：摘要目的明确我国诺如病毒暴发GII.6[P7]基因组进化特征和关键位点变异情况。方法对2018—2021年来自中国诺如病毒暴发监测网络(CaliciNet China)监测获得的46个GII.6[P7]阳性样本进行基因组扩增和测序，同时整合GenBank数据库中的所有ORF1(GII.P7)和ORF2(GII.6)序列，进行贝叶斯进化分析，并利用Simplot软件进行重组分析。结果根据贝叶斯进化分析，GII.P7聚合酶具有时间进化特性，平均碱基替换速率为2.067×10－3核苷酸替换/位点/年，与4种不同的VP1基因型发生重组(GII.6、GII.7、GII.14和GII.20)。GII.6型诺如病毒在衣壳区进一步分为GII.6a、GII.6b和GII.6c亚型。本研究46个毒株属于GII.6a亚型，与2015年中国GII.6[P7]参考株NHBGR59为一簇。Simplot分析确定本研究GII.6[P7]毒株重组位点在ORF1-2连接处。VP1氨基酸位点变异主要发生在P1.1末端以及P2区域，与GII.6a亚型参考株相比，受体结合位点均未发生变异。结论我国2018—2021年诺如病毒暴发的GII.6[P7]重组株均属于GII.6a[P7]亚型。

简介：AbstractHepatitis C infection is not uncommon in pregnant women. Vertical transmission of the virus from mother to fetus is estimated at 4%-8%, however this transmission rate is significantly higher when the mother is co-infected with HIV. Intrauterine blood transfusions can be a necessary part of management for certain perinatal conditions like hemolytic disease of the fetus. Currently there is no published material available on the vertical transmission risk of HCV infection to the fetus as a result of this procedure, irrespective of HIV coinfection. We present a case of a pregnant woman co-infected with HCV and HIV that required an intrauterine blood transfusion during pregnancy. Vertical transmission of either infection to the child did not occur. This provides important evidence that vertical transmission of HCV and/or HIV does not necessarily occur with intrauterine blood transfusions.

简介：摘要目的观察双基因重组载体预防兔乙醇性股骨头坏死(ONFH)的组织病理学变化。方法自2018年1月至2019年6月将购自河南省实验动物中心的80只兔采用完全随机化原则分为5组：正常组(N，正常动物，空白对照)、致敏组(H，仅马血清致敏，不给予白酒)、模型组[M，马血清致敏，烈性白酒10 ml/(kg·d)灌胃]、无关序列组[Con，马血清致敏，白酒灌胃，一侧股骨头注入无关序列pGFP-V-RS转染的骨髓间充质干细胞(BMSCs)]、双基因组(S，马血清致敏，白酒灌胃，一侧股骨头内注入双基因重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP转染的BMSCs)。实验第4、8周末分批处死动物，观察兔股骨头病理学改变。两样本两组间比较采用t检验；分类变量数据资料分析采用χ2检验；数值变量资料统计采用方差分析、组间比较采用最小显著性差异法(LSD)。结果实验第8周，S、H组中骨小梁面积分数分别为(40.80±3.16)、(41.20±3.65)%，与正常组[(41.80±3.63)%]比较差异无统计学意义(t＝0.588、0.661，P>0.05)，明显高于M组[(28.10±2.55)%]、Con组[(28.30±2.65)%]，差异均有统计学意义(t＝8.846、8.496、8.322、8.089，P<0.01)。S、H、N组中空骨陷窝计数分别为(13.30±1.66)、(13.10±1.63)、(12.30±1.46)%，组间比较差异均无统计学意义(t＝0.243、1.279、1.273，P>0.05)，明显低于M组[(39.30±3.86)%]、Con组[(39.10±3.65)%]，差异均有统计学意义(t＝17.502、18.397、17.686、18.397、18.505、19.282，P<0.01)。S、H组中最大脂肪细胞平均直径分别为(42.55±4.16)、(42.53±4.15) μm，与正常组[(41.36±3.85) μm]比较，差异均无统计学意义(t＝0.594、0.577，P>0.05)，明显低于M组[(52.31±5.26) μm]、Con组[(52.19±5.13) μm]，差异均有统计学意义(t＝4.116、4.128、4.129、4.141, P<0.01)。M、Con组中出现明显的早期ONFH病理学变化，股骨头软骨下骨区的造血组织显著减少，骨小梁变细稀疏、中断、结构紊乱，骨髓坏死，骨小梁面积分数降低、空骨陷窝显著增多，脂肪细胞增殖肥大，脂肪组织堆积。N组中无这些ONFH病理学改变。S、H组中病理学改变很少，骨组织结构接近于N组。8周时，M、Con组中病理学变化比4周时加重，ONFH发生率为87.5%、87.5%，而S、H、N组中为12.5%、12.5%、0%(χ2＝9.833、9.833、12.444、9.833、9.833、12.444, P<0.01)，差异有统计学意义。结论双基因重组载体能够高效阻止乙醇导致兔ONFH的组织病理学改变，预防乙醇性ONFH的发生，显著优于单一基因的作用。

简介：摘要目的探讨脐血干细胞移植（UCBT）治疗儿童重组活化基因（RAG）突变重症联合免疫缺陷病（SCID）的疗效。方法回顾性分析2015年1月至2019年6月于复旦大学附属儿科医院明确诊断为RAG突变并接受UCBT的8例SCID患儿，其中男6例，女2例。所有患儿均接受白消安（BU）/环磷酰胺（CY）为主的减低毒性预处理方案，采用他克莫司单药预防移植物抗宿主病（GVHD），收集脐血干细胞移植前后的临床及实验室资料，评估患儿治疗效果。不符合正态分布的连续性变量资料用中位数（最小值~最大值）表示，分类资料用例数（相对比）表示。结果8例接受UCBT的RAG突变患儿分析结果显示，脐带血输注中位总有核细胞数为14.73 （5.06 ~ 27.27）×107个/ kg，中位CD34+细胞数为4.14 （1.75 ~ 13.30）×105个/ kg。8例患儿中7例成功植入，中性粒细胞植入时间25 （15 ~ 45） d，血小板植入时间34 （33 ~ 43）d。中位随访时间9.2 （0.3 ~ 31.3）个月。3例患儿移植早期死亡，5例患儿无病生存并获得免疫重建，脱离静脉丙种球蛋白输注的时间为84 （63 ~ 100）d。结论UCBT治疗RAG突变所致SCID取得一定疗效。

简介：摘要HCV感染呈全球流行，发病隐匿。实验室检测是临床诊断的主要依据，其检测方法主要为抗体检测和核酸检测。为实现对HCV感染的早发现、早诊断，选择最佳检测方法和诊断策略尤为重要。本文从HCV核酸检测方法，试剂的性能评价以及目前的HCV检测策略进行综述。

简介：无

简介：摘要艾滋病的流行仍然是重大的全球性问题。由于HIV的变异与进化，各种新型流行重组型毒株不断被发现。随着高效抗逆转录病毒疗法的推广使用，HIV耐药性的出现和流行传播增加了抗病毒治疗的难度，新型流行重组毒株的耐药情况研究也成为抗病毒治疗的一个不能回避的问题，本文从国内外HIV-1流行重组毒株的流行特点、全球HIV耐药总体水平及重组毒株耐药位点新发现以及表型耐药检测的研究进展几个方面进行综述。

简介：摘要目的评价携带人凝血因子FⅧ（hFⅧ）的重组腺相关病毒（AAV）血清型8（AAV8/hFⅧ）病毒治疗血友病A（HA）小鼠效果。方法应用pAAV-CB-EGFP，pH22（AAV2血清型）和pfΔ6（腺病毒辅助质粒）摸索在HEK-293细胞中AAV的包装条件，pH22、pfΔ6及pAAV-CB-EGFP质粒按照1∶1∶1的比例进行转染，免疫荧光显微镜观察四个条件（包括10 cm培养皿转10 μg质粒，20 cm培养皿分别转20、30和40 μg质粒）的病毒包装效果。应用最佳包装条件在HEK-293细胞中包装AAV2-EGFP，通过冻融法获得AAV2粗提液，感染HEK-293细胞和16095细胞，应用荧光显微镜观察包装效果。应用最佳转染条件将pAAV-TTR-hFⅧ、pH28、pfΔ6按1∶1∶1的比例转染HEK-293细胞获得AAV8/hFⅧ，两轮的氯化铯梯度离心法纯化病毒，以8×1012 vg/kg剂量经尾静脉注射HA小鼠进行基因治疗，活化部分凝血活酶时间（APTT）测定分析FⅧ的活性。结果20 cm培养皿转染20 μg质粒的条件能够在24、48和72 h都达到最佳的转染效果，且该条件包装的AAV2粗提液在16095细胞中具有较高的感染率。HA小鼠体内AAV8/hFⅧ能够在注射后12周仍有维持在治疗水平的FⅧ活性。结论利用优化包装条件制备的AAV8/hFⅧ能够在HA小鼠体内有效维持治疗水平的FⅧ活性达12周。

简介：摘要DNA损伤修复基因突变是晚期前列腺癌中常见的突变类型，其中同源重组修复基因突变会导致肿瘤细胞DNA双链断裂修复能力受损，多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂可通过协同致死效应诱导突变肿瘤细胞死亡。PROfound Ⅲ期临床研究结果显示PARP抑制剂奥拉帕利可以显著改善同源重组修复基因突变患者的生存，标志着前列腺癌治疗进入基于基因特征检测的靶向、精准和个体化治疗时代。

简介：无

简介：摘要目的应用荟萃分析系统评价HCV感染是否为肾移植后糖尿病(PTDM)的相关危险因素。方法系统检索中国期刊全文数据库、中国生物医学数据库、PubMed数据库、Embase数据库、Google scholar和Web of science database截至2019年12月公开发表的相关文献。应用Stata 15.1统计软件使用随机效应模型进行荟萃分析，计算相对危险度(RR)。结果共纳入22篇文献，包含129 981例肾移植受者。荟萃分析结果显示，HCV感染的肾移植受者术后发生PTDM的风险为非HCV感染者的2.5倍(RR＝2.50, 95%CI: 1.95～3.20, P<0.001)。在亚洲、高加索和美洲人种中，HCV感染均为肾移植术后PTDM的危险因素。结论HCV感染是促进肾移植术后发生PTDM的危险因素，感染者需尽早进行清除HCV的相关治疗。

简介：摘要目的分析系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）与丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）、乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）、EB病毒（Epstein-Barr vrius，EBV）、巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）感染关系。方法选取2017年8月至2020年4月我院90例SLE患者作为观察组，另选取90例健康体检者作为对照组。比较两组、不同病情程度及不同抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA）、抗心磷脂抗体（anticardiolipin antibody，ACA）阳性患者HCV、HBV、EBV、CMV阳性率，分析病毒感染与SLE的关系，并随访1个月，比较狼疮肾炎与非狼疮肾炎患者各病毒抗体阳性率。结果（1）观察组HCV、HBV、EBV和CMV阳性率高于对照组（x2=7.457，P=0.006；x2=27.321，P<0.01；x2=35.573，P<0.01；x2=6.586，P=0.010）；（2）HCV、HBV、EBV和CMV阳性为SLE发生危险因素（OR分别为5.076、7.517、10.724、5.925，P均小于0.05）；（3）SLE活动期患者HCV、HBV、EBV、CMV阳性率高于稳定期（x2=8.076，P=0.005；x2=24.437，P<0.01；x2=17.058，P<0.01；x2=3.976，P=0.046）；（4）ANCA阳性SLE患者EBV阳性率低于ANCA阴性（x2=39.429，P<0.01）；（5）狼疮肾炎患者HCV、HBV、EBV、CMV阳性率高于非狼疮肾炎患者（x2=5.517，P=0.019；x2=11.073，P=0.001；x2=5.882，P=0.015；x2=28.940，P<0.01）。结论CMV、HBV及HCV感染对SLE患者自身抗体无影响，EBV感染可能通过SLE患者自身抗体ANCA参与SLE病情进展。

简介：摘要目的通过沉默人永生化角质形成细胞HaCaT细胞中nicastrin（NCSTN）基因的表达，研究其下游细胞增殖及分化相关信号通路的改变。方法将HaCaT细胞分为干扰组、阴性对照组和空白对照组：干扰组转染特异性NCSTN-siRNA，阴性对照组转染阴性对照siRNA，空白对照组转染等量转染试剂。实时PCR及Western印迹检测各组NCSTN mRNA和蛋白表达验证转染效率。运用Agilent人类全基因组表达谱芯片技术研究干扰组HaCaT细胞基因表达谱与阴性对照组之间的差异，以表达上调或者下调倍数≥ 2.0且P ≤ 0.05为标准，将差异基因用GO分析进行富集，筛选出表达差异显著且与角质形成细胞增生分化相关的基因，用实时PCR验证结果。结果干扰组HaCaT细胞NCSTN mRNA及蛋白相对表达量分别为0.287 ± 0.090、0.443 ± 0.085，明显低于阴性对照组（0.969 ± 0.127、1.047 ± 0.114）以及空白对照组（1.000 ± 0.151、1.000 ± 0.111），差异均有统计学意义（F值分别为30.787、31.139，P值均为0.001）。表达谱芯片显示，与阴性对照组相比，干扰组表达下调基因605条，上调基因444条。GO分析显示，干扰后差异表达基因富集到上皮发育、上皮细胞分化、角质形成细胞分化、角化4种生物学过程。对表达差异显著且与角质形成细胞增生分化相关的Sprouty相关蛋白2基因、表皮生长因子7基因、胰岛素样生长因子结合蛋白5基因、人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2基因和骨形成发生蛋白6基因通过实时PCR验证，验证结果与芯片结果显示的差异趋势一致。结论NCSTN基因功能缺失有可能通过调节其下游细胞增殖及分化相关信号通路的表达，影响角质形成细胞的正常增殖和分化。