简介：摘要目的探讨异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）前后DEK-NUP214融合基因的动态变化及其对急性髓系白血病（AML）患者移植前后的临床意义。方法分别采用实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）和流式细胞仪（FCM）检测2012年9月至2017年9月于北京大学人民医院接受allo-HSCT的15例初诊DEK-NUP214基因阳性的AML患者移植前后不同时间点的DEK-NUP214基因表达和白血病相关免疫表型（LAIP）。使用Kaplan-Meier生存曲线分析入组患者预后。使用log-rank检验比较组间的预后差异。结果中位随访时间为657（62~2 212）d。初诊DEK-NUP214的中位表达水平为488%（274%~1 692%）。13例患者在allo-HSCT前已完全缓解。在allo-HSCT前，13例患者DEK-NUP214表达阳性，中位值为0.38%（0.029%~738.9%）。在allo-HSCT后，13例阳性患者中9例患者的DEK-NUP214基因保持阳性。但其表达水平在移植后1个月内降低了约500（5.7~5 663.0）倍。移植后死亡5例，复发2例。移植前DEK-NUP214阳性患者的3年累计复发率是17.5%±11.3%，3年总生存率是60.5%±13.8%。在allo-HSCT后，DEK-NUP214阴性的患者比DEK-NUP214阳性的患者有更好的预后。结论RQ-PCR监测DEK-NUP214融合基因可能是一种有效且更敏感地评估allo-HSCT后微小残留病状态的指标。

简介：摘要目的研究巨细胞病毒（CMV）血清学阴性供者对CMV血清学阳性患者移植预后的影响。方法回顾性分析2013年3月至2020年3月在北京大学人民医院血液科接受CMV血清学阴性供者（CMV IgG阴性）移植物的16例行异基因造血干细胞移植的恶性血液肿瘤患者，定义为CMV血清学阴性供者组（D-/R+组）。从同一时间段的其他患者中选择（以年龄、患者疾病状态和供受者关系为因素，按1∶4进行倾向得分匹配）64例作为对照组，即CMV血清学阳性供者组（D+/R+组），比较分析两组的CMV感染相关情况、总生存期（OS）、非复发相关病死（NRM）率和累计复发率。结果D-/R+组患者移植后首次出现CMV血症的中位时间稍晚于D+/R+组（移植后+37 d比+31 d，P=0.011），但移植后D-/R+组患者外周血CMV DNA首次和最终转阴中位时间要长于D+/R+组（首次：29 d比18 d，P<0.01；最终：99 d比34 d，P=0.012）。D-/R+组移植后CMV激活次数≥4次的比例为4/16，明显高于D+/R+组（4.7%，3/64，P=0.01）。D-/R+组难治性CMV血症（14/16 比56.3%，P=0.021）和CMV病的发生率（4/16比4.7%，P=0.01）均高于D+/R+组。经过抗病毒治疗后D-/R+组外周血CMV DNA转阴时间明显晚于D+/R+组，且该组启动二线治疗［CMV特异性细胞毒性T细胞（CMV-CTL）治疗］的比例明显升高。单因素分析和多因素分析均提示CMV血清学阴性供者是难治性CMV血症和CMV感染时长的独立危险因素。两组急性移植物抗宿主病（aGVHD）Ⅱ～Ⅳ、慢性移植物抗宿主病（cGVHD）的累积发生率、3年NRM率、累积复发率、总生存期差异均无统计学意义。结论尽管对OS、NRM率无明显影响，CMV血清学阴性供者组的难治性CMV血症发生率、CMV感染持续时长、病毒激活次数和CMV病发生率均明显高于CMV血清学阳性供者组。因此CMV血清学阳性患者应优先考虑CMV血清学阳性供者。

简介：摘要目的检测肝细胞癌组织中GINS复合物4(GINS4)蛋白的表达，观察其对肝癌细胞侵袭、增殖能力的影响。方法选取河南大学人民医院2019年9月至2020年12月60例肝细胞癌患者术中收集肝细胞癌组织及对应癌旁组织标本分别作为观察组和对照组，采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测GINS4在肝细胞癌组织中的表达，使用特异性短发卡RNA (shRNA)构建低表达的肝癌细胞稳定株，将其分为实验组(shRNA组)和对照组(NC组)；Transwell检测其对HepG2细胞的侵袭能力；集落形成实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)检测其对HepG2细胞的增殖能力。组间比较采用配对样本t检验。结果RT-qPCR表明GINS4在肝细胞癌组织中表达量(2.89±0.11)高于癌旁组织表达量(1.34±0.15)，差异有统计学意义(t＝8.56，P<0.01)。Western blot显示在肝细胞癌组织中GINS4表达量高于癌旁组织的(1.54±0.76)倍，差异有统计学意义(t＝2.67，P<0.05)，shRNA转染HepG2细胞后，实验组GINS4表达量较对照组的表达量低(1.88±0.34)倍，差异有统计学意义(t＝7.43，P<0.05)；Transwell实验显示实验组穿孔细胞数目[(56.33±3.51)个/视野]低于对照组[(90.42±1.53)个/视野]，差异有统计学意义(t＝3.34，P<0.01)；集落形成实验显示实验组细胞集落数量[(83.33±7.37)个]低于对照组[(345.00±16.64)个]，差异有统计学意义(t＝15.28，P<0.01)；CCK-8实验显示在3 d的吸光度值实验组(1.43±0.11)低于对照组(2.15±0.15)，差异有统计学意义(t＝6.52，P<0.01)。结论在肝细胞癌组织中GINS4表达量高于癌旁组织，降低GINS4的表达能够显著抑制肝癌细胞侵袭及增殖能力。

简介：摘要目的总结不同程度二尖瓣反流合并左室功能低下患者行冠状动脉旁路移植的治疗效果。方法回顾性分析2015年1月1日至2018年12月31日期间，于中国医学科学院阜外医院深圳医院和天津医科大学总医院525例行冠状动脉旁路移植患者临床资料，其中男428例，女97例，年龄（61±7）岁。选取左室射血分数（LVEF）≤40%合并二尖瓣中度反流以上病例，分析不同程度二尖瓣反流患者预后及心功能恢复的效果。结果入选患者中67例合并中度以上二尖瓣反流。52例术前反流中度，LVEF为38%（35%，40%），食管超声评估瓣膜结构良好，术中搭桥后评估室壁运动得到改善，未干预二尖瓣。6例术前反流中-重度，LVEF为38%（35%，39%），搭桥后食管超声评估室壁运动得到改善并且二尖瓣瓣叶及瓣下结构良好，反流减轻，未干预瓣膜。9例术前反流重度，LVEF为38%（35%，39%），2例术中探查二尖瓣乳头肌及腱索功能及位置尚好，同期行二尖瓣成形术，7例患者存在乳头肌及腱索移位明显，瓣环扩张，行二尖瓣置换；所有患者术后恢复良好，半年随访二尖瓣反流均减轻至中度及以下，LVEF较术前升高[47%（45%，48%）比38%（35%，39%），P=0.024]，左室舒张末期内径缩小[57（56，59）mm比61（59，64）mm，P=0.002]。结论左室功能低下合并二尖瓣反流患者行冠状动脉旁路移植术前术中食管超声评估十分重要。对于中-重度以上反流，瓣下结构受缺血影响的患者，积极行二尖瓣置换手术，以利于术后心功能改善。

简介：摘要目的检测活化激酶C受体1(RACK1)在胆管癌细胞中的表达，探讨其对胆管癌细胞生物学表型的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RACK1在人正常胆管上皮细胞HIBEC和2株胆管癌细胞RBE、HUH28中的表达水平。采用t检验分析RACK1细胞水平表达差异。慢病毒构建RACK1低表达稳定株，分为sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组和阴性对照组(NC-RACK1组)，qPCR检测其转染效率；Transwell实验检测胆管癌细胞的迁移和侵袭能力。采用t检验分析敲低RACK1后胆管癌细胞的迁移和侵袭能力变化。结果qPCR结果显示RACK1在RBE、HUH28胆管癌细胞株中的表达量(3.45±0.92、3.21±0.33)明显高于人正常胆管上皮细胞HIBEC(1.43±0.58，t＝21.965、24.153，P<0.01)，差异均有统计学意义；Western blot结果表明RACK1在RBE和HUH28胆管癌细胞株中的表达水平明显高于人正常胆管上皮细胞HIBEC；Transwell迁移实验结果提示RBE中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量为[(261.89±8.65)、(231.07±9.73)个/视野]，明显低于NC-RACK1组[(430.19±10.15)个/视野，t＝30.684、24.380，P<0.01]，差异均有统计学意义；HUH28中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量[(253.57±7.28)、(210.11±6.09)个/视野]低于NC-RACK1组[(424.78±8.03)个/视野，t＝35.442、36.781，P<0.01]，差异均有统计学意义；侵袭实验结果表明RBE中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量为[(52.15±1.43)、(60.58±2.01)个/视野]明显低于NC-RACK1组[(125.39±4.03)个/视野，t＝9.935、12.566，P<0.05]，差异均有统计学意义；HUH28中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量[(60.91±1.30)、(51.19±0.96)个/视野]低于NC-RACK1组[(150.88±7.28)个/视野，t＝13.554、15.328，P<0.01]，差异均有统计学意义。结论RACK1在胆管癌细胞中表达上调，降低RACK1表达后可抑制胆管细胞迁移及侵袭能力，RACK1可促进胆管癌发生发展。

简介：摘要目的探讨膜泡分拣蛋白72(VPS72)在肝癌组织和对应癌旁组织的表达及临床病理意义，观察其对细胞增殖、迁移能力的影响。方法选取2018年9月至2020年9月来自河南大学河南省人民医院60例肝癌组织及对应的癌旁组织标本，肝癌组织划分为中心组，取距离癌组织边缘2 cm处标本划分为癌旁组。免疫蛋白印迹法(Western blot)及免疫荧光法检测中心组和癌旁组中VPS72蛋白的表达水平及分布，分析其与年龄、性别、肿瘤大小、数目、分期、分化程度、有无脉管癌栓、包膜侵犯等临床病理参数之间的关系；小干扰RNA(siRNA)降低肝癌细胞株Huh-7中VPS72的表达，分为实验组和对照组；划痕实验、Transwell实验检测其对Huh-7迁移能力的影响；细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和平板克隆实验检测Huh-7增殖能力。组间比较采用配对样本t检验和χ2检验。结果VPS72在癌组织中相对表达量为0.900±0.511，明显高于对应癌旁组织表达量(0.729±0.643)，差异有统计学意义(t＝2.027，P<0.05)。其表达量与肿瘤的分化程度、大小、脉管癌栓、细胞增殖抗原-67(Ki-67)和分期明显相关(χ2＝5.621、4.855、4.275、8.418、7.202，P<0.05)。划痕实验表明24、48 h实验组迁移细胞数[(38.330±3.512)、(66.670±5.508)个]低于对照组[(78.670±2.517)、(165.670±5.033)个]，差异有统计学意义(t＝14.162、16.275，P<0.05)。Transwell实验显示穿孔细胞数实验组(32.333±3.512)个，低于对照组[(52.667±2.082)个]，差异有统计学意义(t＝7.625，P<0.05)。CCK-8实验显示0 h实验组吸光度值(0.235±0.047)较对照组(0.237±0.068)无明显变化，差异无统计学意义(t＝0.020，P>0.05)。24、48 h实验组A值(0.539±0.300、0.815±0.038)低于对照组(0.683±0.100、1.415±0.131)，差异有统计学意义(t＝4.654、7.373，P<0.05)。平板克隆实验显示实验组细胞团数量为(50.222±6.222)个，低于对照组[(71.560±7.038)个]，差异有统计学意义(t＝7.875，P<0.01)。结论肝癌组织中VPS72蛋白表达量明显高表达，且与肿瘤的分化程度、大小、脉管癌栓、Ki-67和分期呈正相关，降低VPS72的表达能够明显抑制Huh-7细胞株增殖和迁移能力。

简介：摘要目的探讨叉头转录因子O亚族6(FoxO6)对结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其分子机制。方法将FoxO6 siRNA转染结直肠癌细胞HCT116和SW480，干扰FoxO6表达。构建过表达载体pcDNA.3.1－c－Myc，转染FoxO6沉默的HCT116和SW480细胞，过表达c－Myc。实时荧光定量聚合酶链反应(RT－qPCR)和Western blot法检测HCT116和SW480细胞中FoxO6、c－Myc、p21的mRNA和蛋白表达量，溴脱氧尿苷(BrdU)法检测细胞增殖能力，Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。将FoxO6 shRNA慢病毒(LV－FoxO6)转染的SW480细胞注射至BAL b/c裸鼠右侧腋窝皮下构建荷瘤模型，注射后第10、13、16、19、22、25天测量瘤体体积。结果正常结肠细胞FHC、结肠癌细胞系HCT116和SW480中FoxO6的mRNA表达水平分别为0.91±0.04、1.72±0.07和2.03±0.06，蛋白表达水平分别为0.7±0.04、1.35±0.08和1.56±0.07，结肠癌细胞系HCT116和SW480中FoxO6的mRNA和蛋白表达水平均高于FHC细胞(均P<0.05)。转染FoxO6 siRNA后，HCT116和SW480细胞中FoxO6 mRNA和蛋白表达均降低(均P<0.05)，细胞增殖能力降低(吸光度分别为0.26±0.07和0.27±0.06，均P<0.05)，侵袭能力下降[侵袭细胞数分别为(42.3±3.3)个和(45.7±4.1)个，均P<0.05]，c－Myc的mRNA和蛋白表达量降低(均P<0.01)，p21的mRNA和蛋白表达量升高(均P<0.01)。转染pcDNA.3.1－c－Myc到FoxO6沉默的HCT116和SW480细胞后，p21表达量减少，细胞增殖能力增强(吸光度分别为0.54±0.09和0.58±0.07，均P<0.01)，侵袭能力增强[侵袭细胞数分别为(79.2±5.9)个和(80.5±6.4)个，均P<0.01]。裸鼠接种细胞后第25天，LV－FoxO6－SW480组的肿瘤体积为(190.6±36.2)mm3，明显低于SW480组[(437.8.6±69.2)mm3，P<0.05]。结论FoxO6可通过c－Myc调节p21的表达，进而调控结直肠癌细胞的增殖和侵袭能力。

简介：无

简介：摘要目的探讨微小染色体维持蛋白5(MCM5)在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达和预后的关系，观察其对HCC细胞的增殖、迁移的调节作用。方法根据肿瘤基因组图谱(TCGA)和GEO数据库，分析HCC组织和癌旁组织中MCM5的差异表达，并绘制生存曲线。将MCM5低表达的HCC细胞株作为实验组(HepG2、HuH7)，以转染空载体的HCC细胞株为对照组(shRNAHepG2、shRNAHuH7)。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)技术检测MCM5在人HCC细胞株和正常肝细胞株的表达量。短发卡RNA(shRNA)干扰MCM5表达后，细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、细胞划痕修复实验检测HCC细胞的增殖和迁移能力；流式细胞术检测HCC细胞的凋亡率。多组资料间比较采用单因素方差分析和t检验，计数资料的比较采用χ2检验。结果MCM5在HCC组织较癌旁组织表达升高5.32倍(t＝4.464，P<0.05)，MCM5高表达患者5年生存率(38%)较低表达患者(51%)明显下降，差异有统计学意义(t＝5.337，P<0.05)。MCM5在HCC细胞株(HepG2、HuH7)的表达量(3.95±0.37、3.09±0.27)较人正常肝细胞(HL7702)的表达量(0.94±0.13)明显增高，差异有统计学意义(t＝14.532、16.339，P<0.01)。24、48、72、96 h细胞增殖能力检测显示，实验组HepG2细胞(0.51±0.04、0.94±0.06、1.25±0.15、0.94±0.06)较对照组的HepG2细胞(0.68±0.06、1.21±0.09、1.95±0.12、1.21±0.09)显著下降，差异有统计学意义(t＝7.328、6.997、8.779、11.338、12.067，P<0.05)；实验组HuH7细胞增殖能力(0.48±0.05、0.76±0.13、1.44±0.25、1.44±0.25)较对照组的HuH7细胞(0.58±0.07、0.98±0.13、1.86±0.14、1.98±0.13)显著下降，差异有统计学意义(t＝4.787、5.062、5.997、8.932，P<0.05)。实验组的HepG2细胞、HuH7细胞划痕愈合百分比[(19.14±0.98)%、(19.57±1.01)%]较对照组划痕愈合百分比[(45.29±1.35)%、(40.22±1.66)%]明显减少，差异有统计学意义(t＝25.369、22.891，P<0.01)。实验组HepG2细胞、HuH7细胞凋亡率[(14.68±3.21)%、(11.57±2.52)%]较对照组细胞凋亡率[(4.29±1.42)%、(4.73±0.38)%]明显增高，差异有统计学意义(t＝23.327、24.832，P<0.05)。结论MCM5在HCC组织及细胞株中高表达，MCM5高表达的HCC患者预后较差，MCM5表达降低可抑制HCC细胞的增殖、迁移能力，促进细胞凋亡。

简介：摘要目的研究人增生性瘢痕与正常皮肤组织成纤维细胞中氧化应激程度及相关通路的表达是否存在差异。方法选取并收集2019年6月至2020年7月期间就诊于解放军总医院第四医学中心烧伤整形医学部接受手术切除治疗的8例增生性瘢痕患者的瘢痕组织及供皮区正常全层皮肤组织，其中男5例，女3例，年龄(35.0±11.7)岁。组织块法提取培养原代成纤维细胞，并传代培养，待细胞传代至第3代进行以下实验：(1)CCK-8法检测增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)和正常皮肤成纤维细胞(NSF)的增殖能力；(2)流式细胞术检测HSF和NSF中活性氧含量；(3)比色法检测2种细胞内总超氧化物歧化酶(SOD)相对活力值；(4)RT-PCR检测2种细胞中NQO1基因表达量；(5)RT-PCR检测2种细胞中Nrf2基因表达量；(6)蛋白质印迹法检测2种细胞中Nrf2和Bcl2蛋白含量；(7)细胞免疫组织化学染色检测Nrf2在2种细胞中的表达分布情况。结果采用SPSS 25.0统计软件分析，行独立样本t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。结果(1)与NSF比较，HSF的生长速度更快，2种细胞的细胞数量从第3天起差异有统计学意义(统计结果从3～7 d依次为t＝2.631，P＝0.039；t＝7.025，P<0.001；t＝5.031, P<0.001；t＝4.241, P＝0.002；t＝6.525, P＝0.003)；(2)HSF组中活性氧含量为75.39%±3.06%，明显高于NSF组的45.36%±3.66%，两者比较差异有统计学意义(t＝-17.804, P<0.001)；(3)HSF组SOD活力值为(50.76±0.52) U/ml，比NSF组的(42.76±1.35) U/ml升高，两者比较差异有统计学意义(t＝15.674，P<0.001)；(4)HSF组中NQO1 mRNA相对表达量为0.859±0.076，比NSF组的1.595±0.181降低，两者比较差异有统计学意义(t＝3.763，P＝0.020)；(5)HSF组中Nrf2 mRNA相对表达量为0.590±0.055，相较于NSF组的1.595±0.146降低，两者比较差异有统计学意义(t＝6.445，P＝0.003)；(6)HSF组的Nrf2蛋白相对含量为0.314±0.035，相较于NSF组的0.912±0.039明显降低，两者比较差异有统计学意义(t＝22.554，P<0.001)；HSF组的Bcl2蛋白相对含量为0.466±0.020，相较于NSF组的0.734±0.066明显降低，两者比较差异有统计学意义(t＝7.780，P<0.001)；(7)NSF和HSF细胞中均发现有Nrf2蛋白表达，且细胞核与细胞质中均有蛋白分布。结论HSF的氧化应激程度较高，可能是某些原因导致Nrf2含量降低，造成各种抗氧化酶表达降低，最终使活性氧蓄积导致。HSF的增殖和凋亡能力均强于NSF，而活性氧可以导致细胞凋亡，说明氧化应激增强可能是增生性瘢痕的发病机制之一。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA同源异形盒转录反义RNA(lncRNA HOTAIR)通过靶向微小RNA-520g-3p(miR-520g-3p)对胰腺癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胰腺癌细胞中miR-520g-3p、HOTAIR表达水平；转染HOTAIR小干扰RNA至SW1990胰腺癌细胞中，并分为NC组、siHOTAIR-1组、siHOTAIR-2组。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力，划痕愈合实验检测细胞迁移能力；双荧光素酶报告基因实验验证miR-520g-3p与HOTAIR靶向调控关系，两组之间的定量资料比较采用t检验。结果qRT-PCR结果表明SW1990中HOTAIR mRNA水平明显高于人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE，3.08±0.33比1.57±0.17，t＝29.830, P<0.01)；miR-520g-3p在SW1990中的表达水平明显低于人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE，0.93±0.11比2.63±0.24，t＝22.410, P<0.01)；HOTAIR小干扰RNA转染至SW1990中，72 h后NC组细胞吸光度(A)值明显高于siHOTAIR-1组、siHOTAIR-2组(3.52±0.99比1.92±0.23、2.36±0.58，t＝6.340、5.150，P<0.01)；降低HOTAIR表达48 h后，NC组细胞划痕愈合面积百分比为显著高于siHOTAIR-1组、siHOTAIR-2组[(85.37±9.82)%比(50.56±5.82)%、(35.28±6.86)%，t＝7.760, 14.750，P<0.01]，差异均有统计学意义。双荧光素酶报告基因表明miR-520g-3p可明显降低野生型HOTAIR载体荧光素酶活性。下调miR-520g-3p表达水平后，SW1990细胞增殖及迁移能力高于对照组(t＝13.190、12.480，P<0.01)，差异有统计学意义。结论HOTAIR可通过靶向负调控miR-520g-3p影响胰腺癌细胞增殖、迁移能力。