用荧光PCR法和生物芯片法检测人乳头瘤病毒核酸的结果比较研究

用荧光PCR法和生物芯片法检测人乳头瘤病毒核酸的结果比较研究

吴贵友

铜仁市妇幼保健院检验科，贵州铜仁554300

【摘要】目的：探讨采取荧光PCR法和生物芯片法检测人乳头瘤病毒核酸结果。方法：择取我院2023年8月份到10月份实际纳入的50例患者进行研究，分别采取荧光PCR法和生物芯片法来检测人乳头瘤病毒感染状况，全部接受宫颈细胞学检测，详细分析两种检测方法的人乳头瘤病毒核酸的结果。结果：采取荧光PCR法检测HPV-DNA结果阳性34例，阳性率为68.00%，采取生物芯片法检测阳性28例，阳性率为56.00%。结论：荧光PCR法与生物芯片检测方法诊断效能均良好，因此，临床检测环节，需结合具体情况选择检测方法。

【关键词】荧光PCR法；生物芯片法；人乳头瘤病毒

人乳头瘤病毒属于非包裹双链脱氧核糖核酸病毒的一种，包含100多种基因型，性行为是常见的传播途径，其次是唾液和皮肤接触。结合研究能够得知[1]，宫颈癌的可逆转癌前病变期比较长，及时发现并治疗，患者5年的治愈率可以达90%左右，低危型HPV可能会引起生殖器尖锐湿疣，而高危型的连续感染，主要为宫颈癌和宫颈上皮内瘤变的常见致病原因。所以，通过开展女性生殖道HPV检测筛查并进行分型检测，可更好预防并降低宫颈癌的临床发病率，不同类型的HPV检测方法，由于其对HPV亚型基因数量的检测结果不同使得阳性检出率存在差异。在此报告之中，观察荧光PCR法和生物芯片法检测人乳头瘤病毒核酸的结果，内容如下。

1资料和方法

1.1一般资料

将2023年8月至10月时间段我院纳入的50例患者作为本次观察对象，全部患者均进行液基细胞学检验，年龄在20岁到65岁之间，平均年龄是（36.54±1.25）岁。

纳入标准：年龄均大于20岁；既往无精神类疾病，可正常沟通；依从性好，同意参与到本次报告当中，同时签署了知情同意书。

排除标准：既往存在精神类疾病，能够正常沟通；依从性比较差，同时中途私自退出此次观察。

1.2方法

标本采集：全部患者均采取窥阴器充分暴露其宫颈，使用无菌的生理盐水，将棉拭子进行充分的浸湿处理，将宫颈口部位多余分泌物全部擦拭，使用宫颈刷，将宫颈口位置脱落的细胞适量刷取，将其放入到细胞保存液当中保存，以备后续检测。使用含有Thinprepn细胞保存液，单独保存一份细胞，用来液基细胞学检测。

生物芯片法：（1）样本处理：充分洗脱宫颈刷，并在管壁上挤干，取1ml洗脱液转移到1.5ml离心管中，13000rpm离心10分钟，弃部分上清液，保留约300ml，使用移液器轻吸打3到5次，混匀使用。（2）仪器准备和试剂准备：将核酸芯片检测仪打开，对试剂盒内部各个组分进行充分的平衡，将其平衡到室温后，确保其混合均匀，然后将其放置到仪器试剂盒放置区所对应的具体位置，将芯片安装好。采取手动方法，采取移液器，取200μl，将其加入到微流控芯片加样孔，将仪器舱门关闭，运行HPV核算检测试剂盒的操作程序，包含核酸的提取、PCR的扩增与反向斑点的杂交，以及CCD扫描分析实验结果，全过程需要等待4个小时左右。

荧光PCR法：（1）试剂准备：在-20℃的冰箱当中将试剂盒取出，等待30分钟待试剂完全融化之后，对其进行混匀离心处理，8000rpm离心10s，准确计算出需进行反应的具体份数，配置出PCR扩增试剂，转移到样本处理区。（2）提取样本DNA：将样本取出之后，将其进行充分振荡，保持混匀，吸取出500μl的样本，放入到带螺孔离心管当中，保持13000rpm离心1min，将上清去除，保留下沉淀物。每样本加入50μl细胞裂解液，充分振荡重悬细胞，煮沸10min,然后13000rpm离心10分钟，保留上清溶液（释放的DNA），取上清溶液2.0μl作为PCR扩增的模板，其余保存于-20℃。（3）加样处理。轻轻的将八连管盖逐渐开启，在每孔中，分别加入2μl的样本，将PCR管盖盖好，保持低速短暂离心处理。（4）PCR扩增设置4种荧光检测通道的报告，整个实验操作大约2个小时左右。

1.3判断指标：生物芯片法以各位点检测探针的Cut off值采用，当探针检测信号值大于或等于该探针的Cut off值时，则判断为阳性；当探针检测信号值小于该探针的Cut off值时，则判断为阴性。荧光PCR法以四个通道的检测指标来判断结果，以样本在Cy5荧光检测通道Ct≤40，其它荧光通道Ct值显示为Undet，判断为阴性；样本除在Cy5荧光通道出现Ct值≤40，其它荧光通道的Ct值≤40时，则判断为阳性。

1.3观察指标

观察HPV - DNA结果阳性率。

2结果两种不同方法检测HPV结果比较

两种方法检测HPV病毒时，两者检测结构具有良好的一致性和可比性，但对于病毒量载体比较低的HPV DNA宫颈细胞学样本，荧光PCR法高于生物芯片法，所以说对于检测HPV高危人群及具有临床特征的一些女性患者特别是一些低危型

HPV感染引起的尖锐湿疹人群，荧光PCR法更有利于病人检测。

采取荧光PCR法检测HPV - DNA结果阳性34例，阳性率为68.00%，采取生物芯片法检测阳性28例，阳性率为56.00%。

3讨论

检测人乳头瘤病毒核酸，主要是确认病人体内人乳头瘤病毒核酸是否呈现为阳性，此病毒会对人体所带来的致病性，主要分成低危型与高危型，其中，低危型可能会导致人体患有尖锐湿疣类似的皮肤疾病，高危型则可能会引发宫颈癌此种临床恶性病变。一般情况下，反复多次感染，可能会带来较为严重病变。HPV感染是全世界最为常见的一种性传播感染疾病，持续性的宫颈HPV感染则属于子宫颈癌的高危因素。通过检验HPV - DNA，可直接用于HPV感染流行病学调查，以及HPV疫苗接种效果，包括患宫颈癌风险评估依据[2]。HPV - DNA检测属于多重检测方法，通常使用探针，直接用来检验HPV基因组成，或采取PCR方法，扩增HPV - DNA的片段。HPV m RNA检测能够检测E6与E7癌蛋白表述，其是病毒整合重要标志。现阶段，Co-bas是唯一一种经过FDA批准，可用于25岁及以上女性HPV - DNA筛查的方法，其具备自动化、较为强大的程序化步骤，同时其可重复性特别高[3]。荧光PCR法指的是PCR反应体系内部加入了荧光基团，荧光信号通过积累，能够对PCR整个进程进行监测，最终利用标准曲线，针对未知模板开展定量分析的一种方法，也常被称作荧光定量PCR技术。生物芯片法是利用特异性的探针和核酸进行杂交，利用化学发光级联放大，最终结合特定部位出现的蓝色斑点，进而判断HPV是否出现感染和感染亚型。

在本次研究当中，采取荧光PCR法检测HPV - DNA，灵敏度显著高于生物芯片法，与此同时，荧光PCR法还能够结合样本扩增CT值，准确计算HPV病毒的相对载量。根据相关研究报告可得知，HPV病毒的载量越高，出现宫颈癌变的风险越高。故合理运用荧光PCR法，在临床检测HPV感染期间应用价值较高，能够检出多个拷贝数。若采取生物芯片法，由于其灵敏度较低，可能会出现病毒载量低为主要特征的瞬时HPV感染，进而出现假阴性的结果。通过进行深入的分析可得知，单纯采取荧光PCR法检测出的HPV结果阳性样本，结果表明HPV - DNA表达量均较低，CT值均大于30循环，甚至能够达到临界值的范围，故可以推测出，在某种情况下，已经被气溶胶污染样本，其荧光PCR法检测的结果可能会显示出HPV - DNA假阳性的结果[4]。

经以上两种方法研究讨论，两种方法均适宜宫颈液基细胞学检查，采取荧光PCR法检测的HPV - DNA，其灵敏度较高，检测速度快，耗时也较短，但是，该方法对实验室内部的基础设施与条件要求均较高，若基础设施条件达不到要求，容易出现假阳性率。对于生物芯片法来检测HPV - DNA，其自动化程度较高，操作较为便捷，但是此种方法的灵敏度低[5]，容易出现漏诊现象，所以，在临床中要以荧光PCR法为主为最佳检测方法。

【参考文献】

[1]麦艳媚.实时荧光PCR与基因芯片法检测人乳头瘤病毒的方法学比较[J].吉林医学,2021,42(12):2882-2884.

[2]许秋芳,张国平,闫美娜.用荧光PCR法和生物芯片法检测人乳头瘤病毒核酸的结果比较[J].抗感染药学,2020,17(12):1798-1800.

[3]赵再英.观察实时荧光PCR法在高危型人乳头瘤病毒检测中的应用[J].中国社区医师,2020,36(11):134+136.

[4]姚千红,徐舜,赵倩倩.PCR联合HPV检测在宫颈癌筛查中的应用[J].中国现代医生,2019,57(11):12-15.

[5]张达衡,侯舒倩,陈红玲.液基薄层细胞学检查联合高危型人乳头瘤病毒核酸检测在宫颈癌及癌前病变筛查中的价值[J].中国医学创新,2020,17(07):147-150.

作者简介：吴贵友（1993.05-），男，汉族，贵州遵义人，本科学历，医学检验技术中级，主要从事医学检验相关工作。