药物分析中的高效液相色谱法优化

药物分析中的高效液相色谱法优化

林燕

身份证：362103198201052048

摘要：高效液相色谱法在药物分析中具有非常广泛的应用，本文主要对高效液相色谱法在天然药物、 复方药物、 手性药物及临床治疗药物监测中的应用进行了阐述。

关键词：药物分析；高效液相色谱法；应用；优化

高效液相色谱法（HPLC）是二十世纪七十年代发展起来的一种新型的高效、快速的分离方法。高效液相色谱法是将经典的液相色谱法与气相色谱相结合而形成的一种新的液相色谱分离方法，这种检测方式具有高压，快速，高效，高灵敏度等特点[1]；与气相色谱分析方法比较，该方法只需将试剂制成溶剂，而不用发生气化，因此这种方法可以不用受任何挥发性的限制。对沸点高、热稳定性低、相对分子质量高的有机物，一般都会采用高效液相色谱法进行分离[2]。高效液相色谱法技术以其特有的优点，被广泛地用于药物含量分析、成分分析和质量控制等领域，高效液相色谱法的应用已从1985年《中国药典》中仅8种品种采用高效液相色谱法测定，然后在1995年已经有113个药物品种，再到和2000年的282种，在药典的众多分析方法中，高效液相色谱法是发展最迅速的一种。

高效液相色谱法以其高选择性、高灵敏等优点，在医药领域具有广阔的应用前景，例如对中草药有效组分进行分离与检测、对人工合成药物组分进行定性与定量分析、对新型高效手性药物中手性对映异构体的含量进行检测与分析等等方面，都需要利用高效液相色谱法的不同测定方法。

1 天然药物分析

天然药品的来源主要是动植物及矿物，但以植物为主。然而，天然药物中的化学成分一般比较的复杂，有的是一个，有的甚至有多个，给药品的质量控制和质量标准的建立带来了一定的难度。高效液相色谱法能对中药中有效组分进行分离鉴定，从而确定其有效成分。

吴茱萸属于芸香科植物，有温胃止吐、止痛等功效。有研究显示，吴茱萸的水溶液中存在着一定数量的游离氨基酸。卢义和刘淑芬等人[3]用邻苯二甲醛柱前衍生化法，在常温下用高效液相色谱法分析吴茱萸中的游离氨基酸，本法具有较高的灵敏度，可作为一种较好的测定吴茱萸中氨基酸的方法。罗汉果是我国广西的一种特产中药，其功效是润肺、通便等，近年来有研究显示：罗汉果中的主要有效的成分是强甜味的非糖物质三萜类成分罗汉果皂苷，因其甜度比较高、热量比较低、色泽比较的浅、较好的水溶性、较高的稳定性等特点，于1996年经过我国食品单位的批准，可以将罗汉果作为食品添加剂添加到食品中，能够部分或全部替代蔗糖，能够广泛的应用到多种食品中，对于一些肥胖症、糖尿病等人群，罗汉果还可以作为代糖。目前，国际上通常会采用比色法，这种方法的应用也比较多，但其结果误差一般都比较大，结果不准确。有学者通过实验发现，利用所建立的高效液相色谱法测定罗汉果中皂苷的含量，达到了基线分离，具有较好的分离效果，而且样品的整个处理过程也非常的简单，易操作。

2 天然药物及复方成药分析

增免扶正片系是以当归、党参、黄芪等10多种中药为主要原料，经临床应用，疗效比较显著。本品具有活血化瘀、健脾开胃等功效，同时对于抗氧化，抗疲劳等也具有较好的效果。长期服用具有扶正消症、增强免疫力、增强体质、延长寿命的作用，对肝脏、脾脏和脂肪肝具有良好的治疗效果。谢华[4]等人以高效液相色谱法对当归扶正片中阿魏酸的含量进行测定，这种方法易操作，而且灵敏度高，具有较好的重复性。由于化学研发费用一般比较高昂，且有较大的毒副作用，因此，近年来越来越多的研究者将目光投向了天然药物、民族医药、中草药及其它天然药物。据世卫组织统计，全世界超过60亿人中有百分之八十以上的人都在服用过天然医药，天然物质制成的药品在世界医药市场中，占比已高达30%。高效液相色谱法将为我国传统医学的发展和走向国际市场提供强大的技术支撑。

3 抗生素分析

抗生素是一种通过微生物或其它手段在高度稀释条件下可以抑制或杀灭其它有机体的化学物质。抗生素的分离、分析与定量测定一直是医药分析的难点和热点。其中，微生物法、分光光度法、化学分析法是最常见的方法，但是这些方法一般都需要花费较长的时间，而且专一性比较差。阿奇霉素是目前世界上仅有的15元环大环内酯类药物，与红霉素相比，阿奇霉素的抑菌范围更广，对革兰阳性致病菌、b-内酞胺酶产生菌等都有很好的抑制效果。阿奇霉素是一种在酸性条件下稳定性比较强的抗生素，其吸收好，生物利用度高，半衰期长。吴献花等人以高效液相色谱法对阿奇霉素的含量进行了测定，结果表明，阿奇霉素在5 min之内就能完成初步的分离，使测定的时间大为减少，这种方法可以对尿样、注射液中的阿奇霉素进行测定，获得了满意的结果。

4 手性药物分析

由于大部分氨基酸都是同时含有右旋体和左旋体的，因此其分离难度更大。手性药物常表现为一种对映异构体表现出较强的生物及药理活性，而另一种却无效。目前，针对手性药物的拆分定量方法进行了较为深入的研究

[5]。其中，对机体体液中的手性药物进行分离与分析，可以帮助我们更好地理解药物在映体内的代谢过程，以及各类手性药物的生物利用度。

因此，对抗性药物中的映体的手性拆分一直是高效液相色谱法研究的一个热点。手性高效液相色谱拆分法是一种基于高效液相色谱技术，高效液相色谱法是一种简便、快速、简便的手性药物对映体分离技术，通常分为两种，一种是直接法，另一种是间接法；直接法主要是通过引入不对称中心，主要划分为两种，即手性流动相添加剂法和手性固定相法；间接法是一种在分子中引入不对称中心的方法。张兰华等人用高效液相色谱法对甲磺酸帕珠沙星中左旋体的具体含量进行了测定。手性试剂衍生化法主要是将手性试剂转化为非对映异构体，再利用常规高效液相色谱法对其进行拆分。该方法可用于手性脂肪胺、醇类等不适于直接进行拆分测定的化合物的测定，此法分离效果好，分离的条件也比较的简单，但需要较高的手性衍生试剂，而且操作难度相对比较大，在很多其它方法不能实现的情况下采用采用这种方法。在对生物样品中对映体进行拆分的过程中，单一的高效液相色谱法检测极易受到内源性及代谢物的干扰，非常容易形成谱峰交叠，难以实现对体内手性药物的直接分析。目前利用多柱耦合方法，已经成功地解决了此类问题。

高效液相色谱法是当前手性药物拆分研究中应用最广泛的一种方法。这种方法具有快速、简便和准确性高等优点，可望进一步用于手性药物的研究。

5 临床治疗药物监测

高效液相色谱法是一种较为简便、快捷的检测 GCS血药浓度的手段，但其局限于科研领域，并未被广泛用于临床。Majido等用高效液相色谱法对血液中泼尼松、 泼尼松龙和可的松的浓度进行了检测，结果显示，高效液相色谱法具有快速、简单、灵敏度高、准确性高的优点。其优势在于，无论是否服用该药，均可随时检测其血药浓度。

结语

高效液相色谱法的特点有专属性比较强，灵敏度高等，适合于多种有机物的分离与定量分析。从而，将其它分析手段所不能比拟的优点发挥到极致。随着软件技术的发展、专家系统的应用以及检测手段的不断进步，各种相关技术的相继问世，使得高效液相色谱法在医药研发中的地位日益突出。

参考文献：

[1]曾银珠,杨凤琼.高效液相色谱-质谱联用技术在药物分析中的应用[J].生物化工,2021,7(01):160-162+166.

[2]张爱芳.药物检验分析中应用超高效液相色谱法的研究[J].中国医药指南,2019,17(21):43-45.

[3]卢义,刘淑芬,甄攀.吴茱萸中氨基酸的HPLC分析[J].河北北方学院学报,2005,(03):18-19.

[4]谢华,徐丽婷,谢景文等.HPLC法测定增免扶正片中阿魏酸的含量[J].西北国防医学杂志,2004,(03):221-222.

[5]赵伟曼,吕慧娟,杨伟汉等.高效液相色谱法测定可溶微针贴片中维生素C的含量[J].山西医科大学学报,2019,50(05):632-635.