微生物检测－微生物的检测方法有哪些

微生物检测－微生物的检测方法有哪些

李娟

夹江县疾病预防控制中心  四川乐山 614100

微生物检测是医学理论研究、生产实践中的常见工作内容。那么，医学微生物的检测方法都有哪些呢？

微生物的检测作用是什么？

1. 诊断临床感染性疾病。微生物的检测可以检测各种感染性病原微生物，监控病原微生物动态信息，助力临床感染性疾病的诊断。
2. 监控药品质量。微生物检测可以发现药品中微生物限度、生物负载、细菌内毒素是否超标，确保药品质量。
3. 监控医院环境质量。微生物检测可以发现医院水、空气环境中有害微生物浓度、成分，为医院环境管理提供依据。

微生物的检测方法有哪些？

（一）快速检测法

    快速检测法是医学微生物检测常用方法，主要是借助不同形式微生物检测仪器设备，进行快速检测，包括抗干扰培养基和微生物数量快速检测仪器瓦勃氏呼吸仪、微量量热计等以及BACTOMETER全自动各类总菌数及快速细菌检测系统等。

（二）微生物计数法

微生物计数法是传统微生物检测手段之一，根据计数载体、对象的差异，可以划分为血球计数板法、比例计数法、染色计数法、液体稀释法、平板菌落计数法等。

1. 血球计数板法。血球计数板法主要是在划分网格结构稀释血液后，利用专门的血细胞计数板在显微镜下进行直接计数，是以往较为常用的技术方法，具有直观、快捷、简便、仪器损耗小的优良特点，但也存在无法区分死菌、活菌，计数结果高于实际含菌数量的缺点。因此，血球计数板法仅适用于单细胞状态病原微生物所产生孢子计数。
2. 比例计数法。比例计数法是在液体颗粒浓度已知情况下，将其与待测细胞浓度菌液成比例混合后借助显微镜观察计数的方法。比例计数法可以避免个人因素引起的考评误差，适用于痰液、粪便、血液、体液等存在多种细菌时需要将其中一种细菌分离的情况，但因所测得结果为死菌体、活菌体的综合，不适用于运动性较强的活菌计数。
3. 染色计数法。病原微生物体形体积微小，大多无色半透明状。染色计数法是借助不同染料对菌体进行染色后在显微镜下进行活菌计数的方法。根据计数对象的差异，可以选择的染色剂也具有一定差异。染色计数法具有方便实用、操作简单、价格低廉等优良特点，但也存在时间限制多、细胞形态不清晰等缺点。染色计数法适用于无法在油镜下观察计数且具有特殊形态的病原微生物，辅助淋球菌感染、结核分枝杆菌、螺旋体感染等疾病的早期初步诊断，有效弥补血球计数板法无法区分死细胞、活细胞的缺陷。
4. 液体稀释法。液体稀释法是一种对检测菌样进行连续10倍系列稀释，并根据估计数取适量样接种培养，培养后记录不同稀释度出现生长试管数，进而根据MPN（most probably number，最大或然数表）查得菌样含菌数，后根据稀释倍数计算活菌量的方法。液体稀释法具有可计算活菌数、准确度高的优良特点，但也存在操作繁琐的缺点。液体稀释法适用于细胞、病毒、孢子等分离纯化计数。
5. 平板菌落计数法。平板菌落计数法是将待测样品稀释后促使微生物分散为单个细胞，将稀释液涂布到平板上培养，待单个细胞生长繁殖成肉眼可见菌落后计数的方法。平板菌落计数法可以直接观察菌落特征计数，操作仪器易得，但对操作熟练、准确性要求较高，一旦操作不当，将会直接影响结果准确性。同时平板菌落计数法存在吸收量少、易受环境杂菌污染等缺点。平板菌落计数法适用于衣原体、病毒和立克次体等组织细胞病变检测。

（三）生长量测量法

生长量是某一时刻单位面积实存生活的有机物质，涵盖微生物体内所存食物的重量以及微生物本身质量。生长量测量是医学领域病原微生物检测基本方法，涉及了重量、菌丝长度、体积、浊度几个指标。

1. 重量测定法。重量测定法主要是借助称重的方式，经过过滤、离心等操作，进行微生物干重、湿重的测量。在微生物离心法测量时，需要借助离心收集单位体积微生物培养液，反复洗涤后经常压、真空干燥至恒重，精准称重得培养物总生物量；而微生物过滤法测量，则是根据微生物菌体类型，选择不同的过滤介质过滤后烘干称量。重量测定法具有比较准确的缺点，但也存在繁琐、耗时、无法在线分析等缺点。重量测定法适用于含菌量高、不含或微含非菌颗粒性杂质的样品，如痰液等。
2. 菌丝长度测定法。菌丝长度测定法主要是在培养基中测定一定时间内菌丝长度的方法。菌丝长度测定法具有粗放、简单、快速的优良特点，但也存在准确度不高的缺点，适用于部分真菌。
3. 体积测定法。体积测定法又可称之为菌丝浓度检测法。体积测定法主要是借助有刻度离心管，离心压缩后测定一定体积微生物培养液中所含菌丝的量，据此判定微生物生长状况。体积测定法具有粗放、快速、简单的优良特点，但也存在对处理条件一致性要求高、结果干扰因素多的缺点。体积测定法适用于液体条件下病原微生物总生物量的测定。
4. 浊度测定法

    浊度测定法主要是借助紫外分光光度计测定固定波长下培养物吸光值，进而推测微生物生长情况。浊度测定法具有可在线监测反馈、操作快捷、便捷的优良特点，但也存在不同设定读数不一致、样品内气泡反射光线产生不稳定信号、无法测定颗粒大小等缺点。浊度测定法适用于生长过程中存在明显浊度变化的病原微生物检测。

（四）基因检测法

基因检测法是随着医疗技术水平发展而出现的一种新方法，可以有效地鉴定病原微生物，并改善传统检测法仅可检测生理特征、外部形态的不足。病原微生物的基因检测法可以划分为聚合酶链反应、核酸杂交技术、基因芯片技术几个方面。

1. 聚合酶链反应。聚合酶链反应是一种在体外利用已知寡核苷酸引物引导未知片段中微量待测基因片段并进行扩增的手段。聚合酶链反应对引物特异性具有较高要求，存在假阳性风险。聚合酶链反应适用于病原体早期诊断。
2. 核酸杂交技术。核酸杂交技术是根据细胞内病原微生物内具互补序列核苷酸单链融合成异质双链过程中发生杂交因素，对病原微生物进行鉴定，本质上是核酸与探针发生化学反应。核酸杂交技术具有操作便捷、快速的优良特点，可以根据需要选择核酸原位杂交或膜上印迹杂交，适用于敏感、特异病原微生物鉴定。
3. 基因芯片技术。基因芯片技术主要是在微阵列支持下，经高速机器人排列高密度DNA片段，并利用玻璃片或膜固定DNA片段。基因芯片技术具有诊断速度快、病原体耐药性检验精度高等特点，但也存在制作成本高、敏感性低等缺点，仍未得到广泛应用。

总的来说，微生物检测方法多种多样。根据检测内容与对象的差异，适用的微生物检测方法也具有一定差异。因此，应综合考虑微生物检测对象、检测目的，选择生长量测量法、微生物计数法等适宜的检测方法，确保检测结果准确性。