高效液相色谱法测定保健食品中叶黄素含量的研究

高效液相色谱法测定保健食品中叶黄素含量的研究

王婷1  ,柳俏凡2

1.广州质量监督检测研究院 511400

2.广州海关技术中心 510623

摘要：本文主要研究了高效液相色谱法测定保健食品中叶黄素含量的具体方法及流程，利用该方法合理科学地测定保健品中叶黄素的含量，以更方便准确了解其在保健食品中的含量情况，进而对食品的保健功能进行科学评估

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关键词：保健食品；叶黄素含量；高效液相色谱法；含量测定

1 前言

叶黄素属于一种天然物质，广泛存在于各类植物中，也是人体视网膜黄斑区的主要构成色素。人体自身无法合成叶黄素，必须要通过外界摄入的方式进行补充。对于保健食品来说，叶黄素是其中的重要组成部分，但对于具体的使用量尚未有明确规定。当前用于测定叶黄素含量的方法有很多，常用的方法包括紫外分光光度计法、分光光度法、液相色谱法等，但不同检测方法能够达到的检测效果也不相同，如分光光度法容易受到外界干扰，导致测定结果的稳定性较差。高效液相色谱法已经广泛食品中药残和营养元素等的检测，但目前尚未有应用此方法测定保健食品叶黄素含量的检测标准，此种方法的操作过程简单，且结果稳定可靠，应用于保健食品中的叶黄素含量的测定，具有较高的灵敏度，而且检测结果稳定，能够达到理想的检测效果。因此，加强对该种检测方法的研究，科学规划检测步骤，可实现对保健食品中叶黄素含量进行更准确高效的测定。

2高效液相色谱法分析

高效液相色谱法是色谱法的重要分支内容，其主要以液体作为流动相，并且应用高压输液系统，将混合溶剂或者缓冲液放置到色谱柱当中，在色谱柱内，各个成分被分离开来，然后放入到检测仪器中进行检测处理，以实现对样品的科学分析与处理[1]。当前该种方法已经广泛应用到了医学、化学、工业、农业等学科领域当中。此种检测方法具有非常显著的特点：第一，高压性。这主要是由于流动相属于液体，在经过色谱柱时所遭受的压力较大，因此必须通过高压方式才能够保障其通过色谱柱。第二，高速性。该种方法的载液、分析速度都非常快，常规情况下对一个样品的分析时间为15-30min，快的可在更短时间内完成。第三，高灵敏性。紫外检测器的精确度可达到0.01ng，进样量可以达到μL级。第四，应用范围广[2]。70％以上的有机化合物都能够应用此种方法进行含量测定与分析，充分凸显了该种测定方法的应用优势[3]。此外，在检测过程中，色谱柱可以进行反复应用，而且能够实现对不同化合物的有效分离。检测过程中所应用到的样品量较少，而且回收较为方便，样品经过色谱柱的过程中不会受到损坏，由此大大提升了样品测定的准确性及可靠性。此种方法在保健食品叶黄素含量测定中的应用也具有显著优势[4-5]。

3实验步骤

3.1选择仪器、试剂及材料

仪器选择LC-20AT高效液相色谱仪，UV1800紫外可见分光光度计、电子天平、振荡器、旋转蒸发仪、低速离心机。

试剂与材料选择含有叶黄素的保健食品，色谱纯包括甲醇、乙醚、乙腈、无水乙醇、环己烷；分析纯包括氢氧化钾、二丁基羟基甲苯；纯净水；有机滤膜，孔径为0.45μm。

3.2配制标准溶液

称取5mg叶黄素，要确保精准量，加入到0.1％的BHT乙醇溶液中进行溶解处理，并且进行定容处理，剂量为100ml，然后配制为50μg/mL储备液。

取出1ml储备液，用乙醇进行定容，剂量为25ml，将其放置到石英比色皿当中，将乙醇作为空白，并应用分光光度计于波长445m处对吸光度值进行测定。并且根据下述公式对标准溶液的质量浓度进行计算。

X=×25×10000

在上述公式中，X表示标准溶液的质量浓度，用μg/mL；A表示吸光度值；表示乙醇中关于叶黄素的吸光系数，2550dL/g；25表示稀释倍数，10000表示转换系数。

3.3样品处理

称取0.2g的样品，放置到聚丙烯离心管当中，并且加入10ml乙醇、0.2gBHT，将其混合均匀，然后再加入10ml 10％的氢氧化钾溶液，进行涡旋振荡处理，持续10min，确保上述溶液混合均匀。在室温条件下皂化30min，然后进行离心处理，并且进行重复提取2次，将所提取的液体合并处理，并用10ml的水进行洗涤处理。再加入0.1％的BHT乙醇溶液，进行涡旋避光处理，将残渣溶解掉，并且进行定容，剂量为10ml。用滤膜进行过滤处理，然后进行液相色谱测定处理。

4结果分析

4.1色谱柱分析

通过对色谱柱分离结果进行分析可知，叶黄素的出峰效果较好，而且在同等条件下，色谱柱与胡萝卜素的化合物分子长度较为接近，二者能够相互加强，这样对于复杂异构体的分离能够起到更好的效果。因此在对保健食品中的叶黄素含量进行测定时，要选择适用性更强的色谱柱。

4.2流动相分析

在本实验当中，应用了3种流动相，包括第一种甲醇-甲基叔丁基醚、第二种甲醇-乙腈-水、第三种乙腈-水，实验结果显示，第一种色谱柱的平衡时间更长，但在反相色谱中不常用。第二种的色谱峰较好。第三种出峰较早，与样品中的杂质无法进行有效分离。因此对于流动相的合理选择应当考虑第二种。

4.3标准曲线分析

取标准溶液2、4、8、10、15、25ml分别放置到容量瓶中，然后取0.1％的BHT乙醇溶液进行定容处理。得到的标准工作液置入到液相色谱当中，对其峰面积进行测定。根据叶黄素质量与峰面积的关系，建立线性回归方程：y=95571x-164969。研究结果显示，在4-50μg/mL范围内具有较好的线性。

4.4精密度分析

通过选取10μL的标准溶液，重复进行峰面积测定，共重复6次，峰面积结果分别为1209972、1203832、1200615、1198521、1192816、1196832，通过分析可知精密度达到了0.33％，可见检测仪器的精密度较高。

对样品含量进行重复测定，研究结果显示，对于每份均等样品中的叶黄素含量测定，其平均含量为0.1324g/100g。选取0.1g的样品放置到离心管当中，然后加入10ml的乙醇及0.2g的BHT，进行均匀混合，并且在后续的操作流程中仍旧采用同样样品进行测定，结果显示回收率为102.11-103.92％，可见此种检测方法的应用准确性及可靠性较高。

5结语

对于保健食品中叶黄素含量的测定，应用高效液相色谱法测定的效果显著，不仅操作简单，而且精密度高，在测量过程中也能够达到较好的线性范围，回收率较高，可见此种检测方法具有较高的准确度及灵敏度。通过对市场上销售的保健食品进行叶黄素测定，与产品的含量说明相符合，可见此种方法应用的有效性。在未来发展过程中，保健食品中的叶黄素测定仍有重要意义，对于科学评估保健食品质量能够起到良好的促进作用。因此我们应当进一步加强关于测定方法的研究，并针对现有的测定技术进行不断优化和改进，以提升检测结果的准确性，更好地服务于叶黄素的含量测定工作。

参考文献

[1]李想,孙思琪,刘晓云等. 保健食品叶蓝明目胶囊制剂工艺及功效成分含量测定研究[J]. 食品与药品,2022,24(04):314-318.

[2]刘艳荣,原敏,蒲雅洁. 保健食品中叶黄素总量的高效液相色谱分析测定[J]. 食品工程,2022,(02):66-68.

[3]解恒杰,徐立清,徐大玮等. 高效液相色谱法快速测定保健食品中叶黄素含量研究[J]. 当代化工研究,2021,(14):1-3.

[4]史朝烨,赵俊楠,樊少娟等. 高效液相色谱法测定保健食品中叶黄素含量[J]. 食品安全质量检测学报,2020,11(19):6787-6791.

[5]周立梅,杨磊,张金秋等. HPLC法测定保健食品中叶黄素含量[J]. 安徽农业科学,2018,46(20):164-166.