摘要目的制备出具备生物学活性的羊膜粉并探索其保存条件，探讨该羊膜粉制成的羊膜-纤维蛋白胶泥（AM-FS）对兔重度眼表碱烧伤模型的疗效。方法实验研究。取新鲜羊膜风干后液氮冷却研磨成颗粒直径<260 μm的羊膜粉并进行灭菌。检测该羊膜粉制备后及不同温度［室温（25℃）、4 ℃、-20 ℃］下保存10、20、30 d后转化生长因子β（TGF-β）、神经生长因子受体（NGFR）、肝细胞生长因子（HGF）、表皮生长因子（EGF）及碱性成纤维生长因子（bFGF）的表达，并与新鲜羊膜进行比较。倍比稀释制备0.125~65 mg/ml共10种羊膜粉浓度及不含羊膜粉的AM-FS，将兔角膜上皮细胞（CEC）置于其中培养72 h，选取波长450 nm处的吸光度（A）值最大者，以其羊膜粉浓度进行后续动物实验。将32只兔（32只右眼）制作重度眼表碱烧伤模型，采用随机数表法分为AM-FS组、新鲜羊膜移植组、纤维蛋白胶（FS）组及抗生素对照组每组8只兔（8只眼），给予不同眼表干预手段，之后每周观察角膜修复情况，第28 d取材行HE染色观察角膜组织，并行免疫组织化学染色观察单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。对生长因子或受体的表达差异倍数进行对数处理后得到的logFC值并用BH法校正；采用t检验及方差分析对数据进行统计学分析。结果羊膜粉中TGF-β与NGFR的表达量低于新鲜羊膜，logFC分别为-0.11、-2.07。羊膜粉中HGF、EGF、bFGF的表达量均高于新鲜羊膜，logFC分别为0.72，0.46，2.62（P<0.05）；保存10、20 d的羊膜粉中HGF、bFGF、EGF的表达均不低于新鲜羊膜；30 d时羊膜粉除HGF、bFGF外其余生长因子或受体的表达较新鲜羊膜下降，室温保存者HGF、bFGF、EGF的表达均不低于4 ℃和-20 ℃保存者。CEC培养72 h后0.25 mg/ml的羊膜粉的A值最大（0.98±0.05）。AM-FS组与新鲜羊膜移植组角膜恢复情况较好，第28 d的角膜混浊程度评分分别为（3.75±0.46）和（3.50±0.46）分，低于抗生素对照组的（4.29±0.45）分（t=2.480，3.629；P=0.019，0.001），而两者间的差异无统计学意义（t=1.148，P=0.261）。抗生素对照组的角膜新生血管面积与其他3个组比较，差异均有统计学意义（t=4.040，4.339，2.820；均P<0.01）；干预后7和28 d，AM-FS组的角膜新生血管面积分为（9.88±0.20）和（18.96±0.18）mm2，均大于新鲜羊膜移植组的（9.54±0.22）和（18.08±0.96）mm2（t=3.085，3.017；均P<0.01），而在第14和21 d两组差异无统计学意义（P>0.05）。光镜下可见AM-FS组和新鲜羊膜移植组的角膜结构完整，上皮细胞排列趋于正常，角膜愈合优于FS组和抗生素对照组。VEGF在新鲜羊膜移植组的阳性表达弱于其余3个组；MCP-1在AM-FS组和新鲜羊膜移植组的表达水平相似。结论本研究制备的风干羊膜粉中活性生长因子表达量高，性质稳定可室温保存；羊膜粉浓度为0.25 mg/ml的AM-FS可促进兔眼碱烧伤后角膜上皮的修复、减轻炎性反应及角膜新生血管。
