环状RNA锌指蛋白652靶向微小RNA-1278调控叉头盒P1蛋白表达对食管鳞状细胞癌细胞存活的影响

(整期优先)网络出版时间:2022-12-13
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摘要目的探讨环状RNA锌指蛋白652(circZNF652)/微小RNA(miR)-1278/叉头盒P1蛋白(FOXP1)轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞活性、增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测circZNF652、miR-1278以及FOXP1 mRNA表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞活性;EdU实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白质印迹法(Western blot)实验检测FOXP1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验和RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证circZNF652与miR-1278之间的靶向关系,以及miR-1278与FOXP1之间的靶向关系。以t检验或单因素方差分析进行统计分析。结果ESCC细胞系KYSE-510和TE-10中circZNF652、FOXP1 mRNA和蛋白表达高于正常食管上皮细胞HEEC(3.37±0.24比1.97±0.06、4.38±0.29比2.88±0.12、2.95±0.25比1.48±0.12),差异有统计学意义(F=209.4、267.3、75.5,P<0.05),而KYSE-510和TE-10中miR-1278表达低于HEEC(0.47±0.06比0.71±0.03),差异有统计学意义(F=152.5,P<0.05)。circZNF652小干扰RNA(si-circZNF652)组的细胞活性、增殖和侵袭能力低于阴性对照小干扰RNA(si-NC)组,差异有统计学意义(0.44±0.04比0.71±0.03、0.50±0.04比1.05±0.05、0.46±0.05比1.01±0.07),差异有统计学意义(F=1.5、1.3、2.1,P<0.05);而si-circZNF652组的细胞凋亡率高于si-NC组[(30.2±0.28)%比(5.20±1.27)%],差异有统计学意义(F=2.3,P<0.05)。miR-1278拮抗剂(抗miR-1278)组的细胞活性、增殖和侵袭能力高于阴性对照拮抗剂(抗NC)组(1.02±0.03比0.71±0.03、1.38±0.04比1.04±0.05、1.51±0.06比0.99±0.04),差异有统计学意义(F=484.1、306.1、190.6,P<0.05),而si-circZNF652+抗miR-1278组的细胞活性、增殖和侵袭能力高于si-circZNF652+抗NC组(0.57±0.02比0.35±0.02、0.89±0.04比0.49±0.02、0.88±0.04比0.52±0.06),差异有统计学意义(F=484.1、306.1、190.6,P<0.05)。miR-1278 mimic+FOXP1过表达(OE-FOXP1)组的细胞活性、增殖和侵袭能力高于miR-1278 mimic+FOXP1过表达阴性对照(OE-NC)组(0.52±0.07比0.23±0.04、0.92±0.03比0.46±0.05、0.91±0.05比0.53±0.04),差异有统计学意义(F=35.9、242.7、237.5,P<0.05),但miR-1278 mimic+OE-FOXP1组的细胞凋亡率低于miR-1278 mimic+OE-NC组(17.35±1.77比33.95±4.88),差异有统计学意义(F=66.1,P<0.05)。结论circZNF652通过抑制miR-1278提高FOXP1的表达,进而促进ESCC细胞增殖和侵袭能力,并降低细胞凋亡率。