旅客列车一次水箱水微生物检测的质量控制分析

旅客列车一次水箱水微生物检测的质量控制分析

崔婷婷，刘洪瑀,，孟庆卓

（哈尔滨铁路疾病预防控制中心）  150000

        【摘要】旅客列车水箱水水质监测在保障旅客列车用水安全方面发挥重要作用。水质监测中，微生物指标的检测是一项重要内容。本文从水箱水水质监测微生物检验流程、水样的采集、实验室检测系统、水质微生物样品检测、结果评价等方面对本地区旅客列车水箱水水质微生物检测的质量控制进行了分析，供相关专业人员参考。

        【关键词】水质微生物检测；质量控制

        近期对四列旅客列车24件水样进行检测，菌落总数不合格18 个，总大肠菌群不合格4 个，合格率分别为 25 %、83.33  % 。从本次旅客列车水箱水检测的结果来看，微生物污染状况比较严重，粪便污染程度较轻。分析水质微生物检测的相关问题，具备质量保障条件的程序应该涉及采样以及结果等多个环节，研究样品具体采集的情况、实验设备的运用情况、实验室环境的设置情况和检测工作者能力情况，下面针对微生物检测的项目进行针对性的分析。

     一、水质检测微生物样品采集的质量控制

1.水质检测微生物指标优先选用无菌玻璃瓶。玻璃容器干热灭菌160℃，2 h ；灭菌后的容器2周内使用。为保证采集水样的代表性，同一水源、同一时间优先采集供微生物学指标检测的水样，选取固定位置取水，采样前要对水龙头进行消毒，采样时直接采集，不可用水样刷洗已灭菌的采样瓶，并避免对瓶口污染。采集管网水、出厂水等水样时，每125mL水样加入0.1mg硫代硫酸钠除去残留余氯。

        2．玻璃采样瓶一般保存水样时间为4小时，全部采集后应立即送往实验室，如不能立即送回，应尽量在4℃冷藏并于暗处保存，从而减缓细菌的增殖；在运输中，玻璃容器尽量防止破裂，样品溢出。

二、实验室检测的相关质量管理

        1仪器设备控制

        （1）温度计定期检定，保证培养箱、冰箱、干燥箱的有效操作温度。

（2）在应用电子天平过程中应时刻围绕操作规程进行，定期检定设备。

（3）干热和湿热灭菌器定期检定，使用生物指示剂进行灭菌效果验证，确保玻璃器皿和液体试剂的灭菌效果，未灭菌和已灭菌的器皿分开放置。

（4）利用恒温培养箱对温度指数进行分析，在固定周期内进行运用，尤其是思考室温为25摄氏度的情况，科学调整实验室温度。

（5）保障玻璃器具足够完整，在清洗器具之后及时检查，使得玻璃器具的功能可以有效发挥。

        2实验室环境控制

        水质检测实验室需使用专门的无菌检测室，使用前后均需紫外线消毒 30 min，要对灭菌效果进行验证，定期做空气无菌检验。

       3.培养基的质量控制

按操作程序配置完成的培养基，记录对应的配置日期信息和培养基信息等，同时还应该重视无菌检验。在具体配置培养基过程中，贯彻少量勤配的基本理念，促使培养基的质量管理足够及时且有效。

4.检测人员的质量控制

检测人员根据检验项目选择检测方法，标准化、规范化操作。可选择不定期或定期方式，在日常工作中使用标准菌株指派不同检测人员进行质控活动，按照所得结果，找出其工作技能的不足或者是优点，找出相对偏差范围尽快调整。

5.检验方法

根据GB5750.12-2016进行水质微生物检测。 

菌落总数检测：以无菌操作方法用微量移液器取1mL样品注入一次性平皿中，做平行接种，同时作空白对照，分别倾注15ml已融化冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，36 ℃培养48h，根据国标进行菌落计数并记录。

        总大肠菌群检测：以无菌操作方法取10 mL水样接种10 mL双料乳糖蛋白胨培养液中，36 ℃培养24h观察结果，根据乳糖蛋白胨培养管产气产酸情况进行复发酵确证实验。

        耐热大肠菌群检测：按GB/T5750.12-2006，自总大肠菌群乳糖发酵试验中的阳性管中取1滴转种于EC培养基中， 置44.5 ℃恒温培养箱内培养24h 观察结果。

大肠埃希氏菌检测：按GB/T5750.12-2006，自总大肠菌群乳糖发酵试验中的阳性管中取样转种于EC-MUG培养基中， 置44.5 ℃恒温培养箱内培养24h 观察结果。由于EC-MUG培养基本身经培养后会溢出一定的荧光物质，因此应带标准菌株同步实验并观察实验结果。

三、水质微生物对应指标检测的质量管理

   采集微生物水样结束，把水样转送给实验室，检验过程的用品应保持一定灭菌性，灭菌之前完全清除和处理，体现水样采集过程的有效性。

        1检测菌落总数的质量控制

具体接种之前，检验人员应具体化对水样进行摇匀，在平皿内注入对应水样，不可以完全启开皿盖。大约20分钟的时间内，将48摄氏度琼脂培养基倾倒平皿，采取旋转摇动的方式，在琼脂完全凝固的基础上，降低出现菌落无规则生长的情况。

        2检测总大肠菌群的质量控制

        接种后轻摇试管，使水样与乳糖蛋白胨充分混匀，初发酵阳性则需进一步革兰染色和继续接种培养观察。挑取典型菌落，进行复发酵实验，适当多挑几个以防假阴性。

        五、评价体系的管理和控制

        1检查操作方法的精密度

        据GBT5750.3-2006,取送检水样中的10%，做平行双样检测分析。计算相对偏差，根据平行双样分析相对偏差允许值判断精密度是否失控，分析原因，解决产生误差的环节继续下一步工作。

        2无菌性检查

        （1）在条件可以满足的基础上，所有的试验都要以无菌水视作基本水样，随后开展针对性无菌性试验研究。

（2）在试验过程中，对一个或者多个水样开展重复研究的项目，理论层面给予10%的水样进行多次检测，最终提高水样检测的准确性。

        旅客列车水箱水的水质检测工作对于保障旅客列车的用水安全和列车环境的卫生质量起到了重要作用，为了保证微生物实验室的检验质量，提出可靠的检验数据，需要严格控制实验室内部质量和外部质量，避免人为因素 、仪器设备以及方法和步骤等环节出现的错误影响检验结果的准确性，及时校正误差，为水箱水后续处理工作起到重要的提示作用。

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